急性冠脈綜合征患者趨化因子CXCL16與GRACE積分的相關性及臨床意義

李定良 巫相宏

研究表明，動脈粥樣硬化是一種慢性的炎癥性疾病，炎癥反應在動脈粥樣硬化的發生和發展過程中起重要的作用[1]。趨化因子（CXC chemokine ligand 16，CXCL16）是近年在人動脈粥樣硬化損傷部位的巨噬細胞中發現的一種趨化因子，同時也是一種膜結合蛋白，研究發現其在動脈粥樣硬化病變過程中有著重要作用[2-4]。全球急性冠脈綜合征注冊（the Global Registry of Acute Coronary Events，GRACE）研究是目前世界上第一個對急性冠脈綜合征（acute coronary syndrome，ACS）進行的全球多中心的前瞻性臨床研究，GRACE危險評分可用以指導ACS患者的危險分層，幫助選擇正確的治療策略[5]。本研究旨在觀察不同類型冠心病患者外周血中CXCL16水平，分析CXCL16水平與GRACE危險評分和C反應蛋白（C-reactive protein，CRP）水平的相關性，探討血清CXCL16在急性冠脈綜合征危險分層中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年1～7月我院心內科住院并經冠狀動脈造影確診的冠心病患者61例納入實驗組，男42例，女19例；年齡38～94歲，平均（62.3±11.3）歲。按照2007年美國心臟病學會/美國心臟學會（ACC/AHA）冠心病處理指南的診斷標準，分為急性冠脈綜合征（acute coronary syndrome，ACS）組30例，其中不穩定型心絞痛（Unstable angina，UA）17例，急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）13例；穩定型心絞痛（stable angina pectoris，SA）組30例；對照組為同期住院經冠狀動脈造影后排除冠心病者24例，男13例，女11例，年齡38～81歲，平均（57.9±13.0）歲。冠心病患者與非冠心病患者性別、年齡、糖尿病及高血壓病史、冠心病家族史及相關用藥史等方面均無統計學差異，具有可比性。排除標準：風濕性疾病，自身免疫性疾病，周圍血管疾病或周圍血管，血栓性疾病，腦卒中，肝、腎功能不全，發熱，感染性疾病，腫瘤，或近期（至少1個月）有手術、外傷史的患者。

1.2 方法

1.2.1 血標本采集和檢測 所有研究對象于入院次晨空腹肘正中靜脈取血，分離血清標本-80℃保存備用。采用免疫比濁法測定測定血清CRP水平。CXCL16的測定采用酶聯免疫定量分析的方法。試劑盒購自桂海生物公司，應用雙抗體夾心法測定標本中CXCL16水平。用純化的CXCL16抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入CXCL16，再與HRP標記的CXCL16抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的CXCL16呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人CXCL16濃度。

1.2.2 GRACE危險評分[5]GRACE評分的內容包括年齡、心率、收縮壓、肌酐、Killip分級、是否有已知心臟事件、心肌酶標志物、ST段變化，理論分值范圍為2～383分，見表1。

1.3 統計學處理 所有數據均應用SPSS15.0統計軟件處理，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，多樣本比較采用方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗，計數資料用x2檢驗，多組比較采用Kruskal Wallis法；血清CXCL16與CRP、GRACE危險評分之間的關系采用Pearson直線相關分析，P＜0.05表示差異有統計學意義。

表1 GRACE危險評分系統

2 結果

2.1 外周靜脈血CXCL16和CRP水平的比較 我們發現，隨著冠狀動脈病變程度的增加，CXCL16、CRP水平逐漸升高。CXCL16及CRP水平在ACS組中均明顯高于SA組和正常對照組（均P＜0.01）；CXCL16水平在SA組中高于正常對照組，差別顯著（P＜0.01）；CRP水平在SA組中與對照組比較，表達水平高于正常對照組，但差別沒有統計學意義；見表2。

表2 各組外周靜脈血中CXCL16，CRP水平比較

2.2 外周靜脈血CXCL16與GRACE危險評分及CRP水平的相關性分析見圖1，2。

Pearson直線相關分析ACS患者外周靜脈血中的CXCL16水平[（9.96±6.53）ng/mL]與GRACE危險評分（134.50±55.57）呈正相關（r=0.770，P＜0.01），而且與CRP水平[（17.71±15.48）mg/L]亦呈正相關r=0.852，P＜0.01）。

3 討論

CXCL16是一種跨膜趨化因子，既能以分泌形式又能以膜結合形式存在，參與炎癥和免疫應答過程，另外還具有清道夫受體的功能，與氧化型低密度脂蛋白（OX-LDL）結合，參與相關的生物學效應[2-6]。近年研究發現，CXCL16參與動脈粥樣硬化（AS）的形成，其機制主要有：①趨化激活T細胞。CXCL16可強烈趨化激活CD8+T細胞，達整個T細胞的40％[2]，趨化激活后的T淋巴細胞分泌γ干擾素（INF-γ）、腫瘤壞死因子-β（TNF-β）、GM-CSF等炎癥因子，以旁分泌的方式影響其周圍細胞的功能活動，在AS發生、發展中起調節作用。②促進細胞一細胞間黏附和細胞增殖。平滑肌細胞的增殖是AS形成中的重要環節，它與一些生長因子的作用有關。CXCL16及其受體在動脈平滑肌細胞均有表達，研究發現CXCL16可以增加細胞間黏附并誘導核因子-κB（NF-κB）依賴的主動脈平滑肌細胞增殖[3]。③血管源性因子。動脈粥樣硬化斑塊內的新生血管可能在促進斑塊的發生、發展，甚至誘發斑塊出血和斑塊破裂這一系列事件中起著關鍵性作用[4-7]。研究表明，CXCL16不僅可誘導激人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）的增殖與趨化，同時還作為血管源性因子存在，其可以顯著誘導血管生成[8]。④氧化型低密度脂蛋白受體。氧化低密度脂蛋白及其脂質成分激活內皮細胞是引起AS病理變化的關鍵環節。CXCL16是新發現的OX-LDL的細胞表面受體，對OX-LDL有較強的結合和內吞攝取的能力，參與了動脈粥樣硬化細胞內脂酯聚集的過程[7]，可能在AS病變中起重要作用。

急性冠狀動脈綜合征（ACS）是以冠狀動脈粥樣硬化斑塊破裂，繼發完全或不完全閉塞性血栓形成為病理基礎的一組臨床綜合征，ACS中存在嚴重的內皮細胞受損激活狀態，黏附并聚集大量白細胞到血管內皮，使炎癥因子水平進一步增加，形成惡性循環，最終導致急性炎癥爆發和血栓形成。本研究發現CXCL16活性水平在ACS組顯著高于SA組和對照組，在SA組中亦顯著高于對照組，提示CXCL16與動脈粥樣硬化有關，并隨著冠心病病情的加重而進一步升高，而冠心病病情的加重與冠狀動脈粥樣硬化斑塊的不穩定性增加有密切關系，炎癥反應加劇了斑塊的不穩定性，CXCL16則參與了炎癥反應，加重了冠心病的病情。

圖1 ACS患者外周靜脈血CXCL16與GRACE危險評分之間的相關關系圖

圖2 ACS患者外周靜脈血CXCL16與CRP水平之間的相關關系圖

研究發現，CRP在冠狀動脈中的分布與冠狀動脈內膜炎癥或壞死過程相一致，除了作為炎癥產物，還可以直接促進炎癥反應及局部血栓的形成，改變冠狀動脈粥樣斑塊的結構，促使斑塊破裂[9]，與急性冠脈綜合征的發生及發展密切相關[10]。本研究發現，CRP水平在ACS組中顯著高于SA組和正常對照組，但在SA組與對照組比較，差別沒有統計學意義，說明CRP水平可反映ACS中冠狀動脈粥樣斑塊的不穩定狀態。穩定性心絞痛患者中，冠狀動脈粥樣硬化斑塊可能相對穩定，斑塊破裂，炎癥反應亦相對較輕，從而部分患者血液中CRP水平有所升高，但總體比較起來，與正常人差別不明顯。CXCL16水平與CRP水平呈正相關，進一步證實了CXCL16與炎癥反應密切相關，通過炎癥反應加劇了斑塊的不穩定。

全球ACS注冊研究是目前世界上第一項針對ACS患者進行的多國家、前瞻性觀察研究，2007年更新的ACC/AHA指南指出：GRACE風險評分是對急性冠脈綜合征患者進行風險評估的方法之一。在ACS組中，CXCL16水平與GRACE危險評分呈正相關，因此檢測ACS患者的CXCL16對ACS患者的危險分層及治療策略的選擇具有一定的臨床指導意義。

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