海南五指山苦丁茶黃酮含量測(cè)定的研究

陳 文，王湘君，趙 陽(yáng)，陳啟芳

(1.瓊州學(xué)院理工學(xué)院，海南五指山572200;2.瓊州學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，海南五指山572200;3.河南省新鄉(xiāng)市環(huán)境監(jiān)測(cè)站，河南新鄉(xiāng)453002)

0 引言

海南省五指山苦丁茶屬冬青科的兩個(gè)種，即冬青科冬青屬大葉冬青和冬青科冬青屬苦丁茶［1］。文章通過(guò)測(cè)定苦丁茶黃酮含量，發(fā)現(xiàn)黃酮是苦丁茶的重要組成成分。在一定范圍內(nèi)，隨著黃酮含量的增多，其產(chǎn)生的藥理作用對(duì)人體有益效果更加明顯［2］。

1 實(shí)驗(yàn)研究

實(shí)驗(yàn)研究以不同等級(jí)海南五指山苦丁茶為原料，采用醇提法對(duì)苦丁茶樣品進(jìn)行初處理;根據(jù)黃酮類物質(zhì)與金屬鋁離子結(jié)合顯黃色，并在465nm波長(zhǎng)下有最大吸收這一特征反應(yīng);利用紫外可見分光光度法與蘆丁標(biāo)準(zhǔn)系列定量比較，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出公式，計(jì)算樣品中黃酮含量。將實(shí)驗(yàn)測(cè)量結(jié)果與國(guó)內(nèi)其它地區(qū)苦丁茶相應(yīng)物質(zhì)含量比較，發(fā)現(xiàn)五指山苦丁茶黃酮含量較高。

1.1 五指山苦丁茶中黃酮類物質(zhì)含量測(cè)定

1.1.1 材料、設(shè)備與試劑

1.1.1.1 苦丁茶樣品樣品均來(lái)自海南五指山山脈(海拔約為1860m)采摘的苦丁茶(曬干)。

高級(jí)苦丁茶:一級(jí)苦丁茶，肥壯，烏潤(rùn)，勻凈，無(wú)花雜，價(jià)格適中。

低級(jí)苦丁茶:二級(jí)苦丁茶，褐黑，較勻凈，少量花雜，稍有嫩莖，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。

1.1.1.2 主要儀器設(shè)備TU－1901紫外－可見分光光度計(jì):北京普析通用儀器有限責(zé)任公司

蒸餾裝置:M22型中量有機(jī)制備儀

電子天平:上海恒平科學(xué)儀器有限公司

電子分析天平:賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司

電子調(diào)溫電熱套:天津市泰斯特儀器有限公司

電子萬(wàn)用爐:天津市泰斯特儀器有限公司

容量瓶:10mL，100mL，250mL，1000mL

吸量管:0.5mL，2mL，5mL，10mL

1.1.1.3 主要試劑(1)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品:稱取0.25g蘆丁粉末，用甲醇溶解配制成0.25mg/mL溶液。(2)5%亞硝酸鈉:稱取0.5g亞硝酸鈉固體，加入蒸餾水9.5mL配制成溶液。(3)5%硝酸鋁:稱取0.5g硝酸鋁固體，加入蒸餾水9.5mL配制成溶液。(4)4%氫氧化鈉:稱取4.0g氫氧化鈉固體，加入蒸餾水96mL配制成溶液。

(5)甲醇和95%乙醇:市售

1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.1.2.1 苦丁茶黃酮樣品液制備將新鮮的苦丁茶葉經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，用電子天平準(zhǔn)確稱取10.0g粉末，用濾紙包好，裝入索氏提取器中，包好的濾紙緊貼器壁，上端呈凹狀，高度低于虹吸管最大高度，燒瓶?jī)?nèi)加入125mL甲醇，水浴加熱抽提2－3小時(shí)，直到抽提液顏色變淺。得到深綠色的提取液，溶液水浴加熱濃縮約至100mL，轉(zhuǎn)入100mL容量瓶用甲醇定容，備用。

1.1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制準(zhǔn)確稱取干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0.25g，用甲醇溶解后轉(zhuǎn)入于1000mL容量瓶中，并定容至刻度，得濃度為0.25mg/mL標(biāo)準(zhǔn)貯備液，裝入棕色瓶中冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確吸取 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液于 25mL 已編號(hào)比色管中，依次加入0.3mL 5%亞硝酸鈉溶液，0.3mL 5%硝酸鋁溶液，4mL 4%氫氧化鈉溶液，以甲醇溶液定容至10mL，靜置15min，多次測(cè)量取平均值。

1.1.2.4 最佳波長(zhǎng)的選擇取標(biāo)準(zhǔn)待測(cè)液(第4支比色管)在TU－1901紫外－可見分光光度計(jì)上，300－550nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，取最大吸收波長(zhǎng)為檢測(cè)波長(zhǎng)，最后得到465nm處吸收最大。

1.1.2.5 待測(cè)樣品的準(zhǔn)備取1mL樣品提取液用甲醇稀釋至10mL，再取其中1mL于10mL比色管中，依次加入0.3mL 5%亞硝酸鈉溶液、0.3mL 5%硝酸鋁溶液、4mL 4%氫氧化鈉溶液，以甲醇溶液定容至10mL，靜置15min，重復(fù)測(cè)量3次。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與結(jié)果

1.1.3.1 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

表1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液吸光度曲線圖Figure1 rutin standard solution absorbance curve

1.1.3.2 苦丁茶樣品液實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

表2 苦丁茶樣品液實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

1.1.3.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果分析

計(jì)算公式:①吸光度值代入公式:

求得到測(cè)量樣液濃度C

②含量計(jì)算公式:

表3 苦丁茶黃酮含量結(jié)果

不同等級(jí)的海南五指山苦丁茶黃酮含量不一樣，經(jīng)計(jì)算低級(jí)苦丁茶和高級(jí)苦丁茶黃酮含量分別為2.204%和2.282%，高級(jí)苦丁茶黃酮含量較豐富，但整體含量相差不大;通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，黃酮類物質(zhì)在苦丁茶中所占分量較高，是苦丁茶的重要組成部分之一。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論與分析

2.1 與國(guó)內(nèi)其他地區(qū)不同等級(jí)苦丁茶物質(zhì)含量比較

表4 國(guó)內(nèi)不同等級(jí)苦丁茶中黃酮和咖啡因含量

綜上，黃酮類物質(zhì)在苦丁茶中的含量比重相對(duì)較高。長(zhǎng)江中下游地區(qū)黃酮類比重相對(duì)較低，而海南五指山的含量相對(duì)較高，相對(duì)有些地區(qū)苦丁茶中黃酮類物質(zhì)含量高出近18%［3］。

2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析實(shí)驗(yàn)采用的原料是不同等級(jí)的海南五指山苦丁茶，由于苦丁茶的等級(jí)級(jí)別較少并且等級(jí)級(jí)數(shù)相差不大，測(cè)量結(jié)果數(shù)據(jù)顯示相差不明顯;實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過(guò)TU－1901型紫外可見分光光度計(jì)測(cè)得，測(cè)量時(shí)采用多次平行測(cè)定，準(zhǔn)確度相對(duì)較高。由于受環(huán)境如光照、溫度等條件影響較大，測(cè)量結(jié)果存在著一定的誤差，但仍具有參考價(jià)值。

3 黃酮類物質(zhì)藥用價(jià)值

苦丁茶的藥療功效需要長(zhǎng)期飲用后才能有較明顯效果。據(jù)《本草綱目》記載，苦丁茶具有散熱、清目、生津、止渴、消食、提神、消炎、解毒、降壓、降脂等藥理功能［4］。黃酮廣泛存在于自然界植物和漿果中，4千多種，其分子結(jié)構(gòu)不盡相同，不同分子結(jié)構(gòu)的黃酮可作用于身體不同的器官。苦丁茶中黃酮的種類和結(jié)構(gòu)也多樣，了解其藥用價(jià)值對(duì)苦丁茶的深入認(rèn)識(shí)奠定了基礎(chǔ)。黃酮的功效是多方面的，作為一種很強(qiáng)的抗氧劑，可有效清除體內(nèi)的氧自由基，阻止細(xì)胞的退化、衰老，也可抑制癌癥的發(fā)生［5］;黃酮可改善血液循環(huán)，降低膽固醇，降低心腦血管疾病的發(fā)病率;黃酮還有降低血糖的功效，因?yàn)槠渚哂蟹€(wěn)定膠原質(zhì)的作用，對(duì)糖尿病引起的視網(wǎng)膜病及毛細(xì)血管脆化有很好的保護(hù)作用;黃酮還可抑制炎性生物酶的滲出，增進(jìn)傷口愈合和止痛，由于具有抗組織胺性，可用于各類敏感癥［6］。總之，黃酮類物質(zhì)可以幫助人體改善血液循環(huán)，提高免疫力，降低血壓、抑制癌癥、抗擊衰老等多種藥療功效，是糖尿病、高血脂、高血壓患者的福音［7］。

4 結(jié)論

苦丁茶是天然保健綠色食品，有較好的藥用價(jià)值。海南五指山地區(qū)四季如春，獨(dú)特的氣候?qū)ΨN植苦丁茶可以提供優(yōu)越的環(huán)境，對(duì)實(shí)現(xiàn)海南五指山苦丁茶產(chǎn)業(yè)化，市場(chǎng)化具有重要意義。海南五指山不同等級(jí)苦丁茶中黃酮類物質(zhì)含量為2.204%至2.282%，相對(duì)國(guó)內(nèi)其它地區(qū)有較強(qiáng)的競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)，這對(duì)五指山苦丁茶發(fā)展研究提供科學(xué)的參考價(jià)值。目前，國(guó)家正在大力發(fā)展海南國(guó)際旅游島，應(yīng)合理利用發(fā)展契機(jī)，開發(fā)五指山苦丁茶產(chǎn)業(yè)如飲料等新產(chǎn)品，具備良好的發(fā)展前景，促使苦丁茶行業(yè)迅猛發(fā)展。

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