血清胱抑素C在腎損傷中研究及與血肌酐尿素氮關系的分析

張立軍

腎損傷疾病是臨床上一種常見的疾病，主要表現雙腎排泄過濾機體廢物能力的極大降低。早診斷、早治療，可逆轉損傷的腎功能，阻止腎臟疾病惡化。目前血清胱抑素C（cystatin C）檢測是近幾年發展起來的腎臟疾病早期診斷的新檢測項目，它是一種低分子量蛋白質，由體內有核細胞產生，來源恒定。作為一種血漿內源性成分對此我們采用顆粒透射比濁法測定血清cystatin C的濃度，探討其在腎病中的變化情況，并同血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）進行比較。

1 材料與方法

1.1 研究對象 2010年1～6月6338例患者血清標本來自我院門診及住院患者共同檢測cy statin、血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN），其中血清胱抑素C（cy statin C）≥1.55（m g/L）共560例，男性328例，女性232例。年齡94～60歲368例，30～59歲163例，15～29歲23例，0～14歲6例。cy statin C正常參考范圍0.50～1.55mg/L，血清肌酐（Scr）正常參考范圍44～133μmol/L、尿素氮（BUN）正常參考范圍2.4～7.5m ol/L。各項正常參考范圍是依據《全國臨床檢驗操作規程》，結合本院實際情況做適當修改得出。

1.2 儀器 cystatin C、Scr、BUN濃度測定采用貝克曼公司生產的LX 20全自動生化分析儀。

1.3 試劑和方法cystatin C濃度測定試劑是由利德曼公司提供，采用顆粒增強透射比濁法測定。患者在采血后3h內分離血清并進行測定。Scr和BUN采用Jaffe速率法和尿素酶法進行常規測定，試劑由貝克曼公司公司提供。6338例cystatin C、Scr、BUN的測定數據均來自我院2009.06.01～2010.01.01門診及住院患者。

2 結果

560例cystatin C（cysc）≥1.55m g/L的患者cystatin C、BUN、Scr性別年齡構成比比較。cystatin C的值在≥1.55m g/L時為異常，BU N的值在≥7.5m o l/L為異常，Sc r的值在≥133μmol/L時為異常，各組的異常檢出率見表1。

560例cy statin C（cy sc）≥1.55m g/L的患者各年齡階段cystatin C、Scr、BUN均值結果比較。cystatin C的值在≥1.55 m g/L時為異常，BUN的值在≥7.5m o l/L為異常，Scr的值在≥133μmol/L時為異常，各年齡段均值見表2。

從560例標本中選出cystatin C（cysc）、Scr、BUN數值最高30、60、90、120、150、180例患者，并計算cystatin C、BUN、Scr均值與BUN、Scr對應cystatin C（cysc）均值，分析cystatin C、Scr、BUN的相互關系，見表3。

3 討論

在1981年檢測了人胱氨酸蛋白酶抑制劑C（cy statinC）的氨基酸系列，它沒有顯示與已知任何超家族蛋白系列的同源性。直到兩年后研究者檢測了雞胱氨酸蛋白酶抑制劑的結構，并發現兩種蛋白44％的氨基系列相同，才確定胱氨酸蛋白酶抑制劑C的功能—半胱氨酸蛋白酶的抑制劑。又經過二十多年的研究，人胱氨酸蛋白酶抑制劑家族目前已有明確11種蛋白組成。它們是胱氨酸蛋白酶抑制劑家族1中的胱氨酸蛋白酶抑制劑A和B，是惟一的細胞內蛋白。胱氨酸蛋白酶抑制劑家族2中的胱氨酸蛋白酶抑制劑C、D、E、F、S、SA和SN組成，它們是細胞外蛋白和細胞間蛋白。胱氨酸蛋白酶抑制劑家族3由高和低分子量的激肽原（K in inogen）組成，它們主要是血管內蛋白。1983年A nastasi等首次從雞蛋清中分離純化得到高純度的半胱氨酸蛋白酶抑制劑（cysteine p roteinase inh ibitor，CPI），是這一類蛋白質超大家族的成員之一，有半胱氨酸蛋白酶抑制劑C、胱抑素C、γ-痕跡蛋白（γ-trace protein）、后γ球蛋白（post-γ-globu lin）之稱，目前中文多稱之為胱抑素C。它由122個氨基酸組成，帶正電荷，等電點為9.3，是一種堿性非糖化的低分子蛋白質，相對分子質量為13 300[1]。

為比較血清胱抑素C在醫院常規檢測中相對血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）的優勢，筆者從6338份醫院患者標本中統計出血清胱抑素C異常標本560例，在560例血清胱抑素C異常標本中，血清肌酐（Scr）異常355例，尿素氮（BUN）異常422例。各項正常參考范圍的來源是依據《全國臨床檢驗操作規程》，結合我院實際情況做適當修改得出。從橫向比較得出的這個數據中可以看出血清胱抑素C在檢測中相對血清肌酐、尿素氮的優勢。因此可以說胱抑素C（Cystatin C）因其分子量小，能自由通過腎小球濾過膜，幾乎完全被腎小管重吸收且不被分泌，能很好地替代血肌酐而成為一種新的反映腎小球濾過率（GFR）的理想標志物[4-5]。在縱向比較時，4個不同的年齡段中除最低年齡段（0～14歲），檢測中的血清胱抑素C和血清肌酐、尿素氮無論是在異常檢出率和均值上都無很大區別，血清胱抑素C在低年齡段（0～14歲）檢測中具有很好優勢，而血清肌酐與尿素氮由于小兒體重和代謝原因，不能真實反映早期腎損傷。

國內外對血清胱抑素C的參考值從出生到101歲之間年齡范圍的個體以及各種體液進行了研究，正常人血清胱抑素C為（0.96±0.20）m g/L，臍帶血為（2.08±0.33）m g/L，嬰兒（＜1個月）為（0.18±0.04）m g/L，＜12個月為（0.39±0.09）m g/L，＞12個月為（0.72±0.29）m g/L。腦脊液為（5.371±0.36）m g/L，唾液為（1.22±0.67）m g/L，關節液為（1.27±0.41）m g/L，尿液為（0.11±0.125）m g/L。羊水中的濃度與血漿中的濃度接近，腦脊液濃度為血漿的5～6倍，精漿中濃度最高，平均為51m g/L[6]。

血清胱抑素C應用中的不足，相對血清肌酐與尿素氮低廉的價格，血清胱抑素C的價格是昂貴的，增加患者負擔。從表2我們可以看到血清胱抑素C最大測定值大多小于10m g/L，在中至重度腎損傷的患者的檢測結果中對患者腎損傷程度上的反映不如血清肌酐與尿素氮明顯。從方法學上顆粒增強透射免疫比濁法測血清胱抑

表1 560例cystatin C（cysc）≥1.55m g/L的患者cysc、BUN、Scr性別年齡構成比

表2 560例cystatin C（cysc）≥1.55的患者各年齡階段cysc scr BUN均值

表3 560例標本中數值最高30～180例cysc、BUN、Scr均值與BUN、Scr對應cysc均值

Cystatin C是一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑，也被稱為γ-微量蛋白或γ-后球蛋白，廣泛存在于各種組織的有核細胞和體液中，是一種低分子量、堿性非糖化蛋白質，分子量為13300M r，由122個氨基酸殘基組成，由機體有核細胞產生，產生率恒定，不受炎性反應、膽紅素、溶血、血脂等影響，且與性別、年齡、體重、飲食無關。Cystatin C相對分子質量低、等電點高，能自由地通過腎小球濾過膜并在近曲小管上皮細胞重吸收和降解。由于cy statin C的生成速度和血濃度穩定，不受其他病理變化影響，腎臟是其惟一的濾過和代謝器官，因此其可作為反映腎小球過率的一種理想的內源性標志物，當腎小球出現輕微損傷時血中cystatin C濃度即可出現升高，并隨著病情的加重而逐漸升高，所以cystatin C被公認為是反映早期腎損害的敏感標志物之一[2-3]。

在早期的研究中，胱氨酸蛋白酶抑制劑C濃度的測定只能通過放射免疫擴散方法，此方法非常耗時，需要至少10～20h，并且CV值相當高（大約10％）。10年后發展了全自動的微粒子增強透射免疫比濁法和夾心酶免疫法，不僅快速而且精密度高，所以明顯促進胱氨酸蛋白酶抑制劑C再臨床常規實驗的發展。透射免疫比濁法可在自動生化分析儀上進行，有準確、簡便、快速的優點。顆粒增強透射免疫比濁法是以多克隆抗體為基礎的改良免疫比濁分析法，利用碳二亞胺反應將抗胱抑素C IgG共價結合到Intex顆粒上，與抗原結合形成的免疫復合物被聚乙二醇-6000沉淀，在340nm處比濁，與同樣處理的標準液比較，計算標本中胱抑素C的含量。整個分析過程只需幾分鐘，可利用生化分析儀進行比濁測定，批內和批間CV分別為0.9％和2.2％，回收率為98％，黃疸、溶血和脂血標本均不受影響。使cystain C在臨床的廣泛應用成為可能。素的線性與血清肌酐的 Jaffe速率法與尿素氮尿素酶法也是不可比的。可見血清胱抑素C應用的優勢在反映早期腎損傷。

[1]孫曉慧.血清胱抑素C測定在疾病監測中的應用[J].醫學綜述,2006，12（7）：443-445.

[2]李曉娟.胱氨酸蛋白酶抑制劑c的臨床應用[J].國外醫學：臨床生物化學與檢驗學分冊,2004,25（2）：92-93.

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[5]陳菁,朱東芳.Cystatin C的檢測及臨床應用[J].紹興文理學院學報,2004,24（7）：106-108，112.

[6]Woitas RP,Stoffel-Wagner B,Flommersfeld S,et al.Correlation of serum concentrations of cystatin C and creatinine to inulin clearance in liver cirrhosis[J].Clin Chem,2000,46（5）：712-715.