高效液相色譜法測定當歸養血丸中丹皮酚的含量

陳玉秀 張勝

高效液相色譜法測定當歸養血丸中丹皮酚的含量

陳玉秀 張勝

目的建立了高效液相色譜法測定當歸養血丸中丹皮酚的檢測方法。方法色譜條件為C18色譜柱;柱溫為室溫;流動相:甲醇-水(70∶30);流速1 ml/min;檢測波長:274 nm。結果丹皮酚在0.0102～0.0510 mg/ml范圍內具有良好的線性關系(r=0.9999)。加樣回收率為99.12%(RSD為2.88%，n=9)。結論比種方法簡便，準確度高。

當歸養血丸;丹皮酚;高效液相色譜法

當歸養血丸是中國藥典載入品種，具有益氣養血調經的功效。用于氣血兩虛所致的月經不調，癥見月經提前、經血量少或量多、經期延長、肢體乏力。2010版中國藥典一部中當歸養血丸只有當歸與丹皮的薄層鑒別而沒有含量測定［1］。因此我們開發了丹皮酚的含量測定項目，進一步提升了該產品質量控制水平。現報告如下。

1 儀器與試藥

PERKIN ELMER高效液相色譜系統:Series 200 LC四元低壓梯度泵;Model 785A紫外檢測器;NELSON 200 Series色譜工作站;200 Series自動進樣器。丹皮酚對照品購自中國藥品生物制品檢定所，含量測定用，批號:0708-9704。當歸養血丸由本廠提供(批號:1008261、1008271、1008281);陰性對照樣品(按處方除去牡丹皮按制法工藝制成)。分析用甲醇為色譜純，水為三重蒸餾水，其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent C18，250×4.6 mm 5μm(Agilent公司產);柱溫:室溫;流動相:甲醇-水(70:30);流速1 ml/min;檢測波長:274 nm，進樣量10μL。在此色譜條件下，丹皮酚可達到基線分離，見圖1，2。理論板數按丹皮酚峰計算不低于3500。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱取干燥至恒重丹皮酚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含丹皮酚對照品20 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品水蜜丸，研碎，取1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 m l，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率33 KHz)45 min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

2.3 線性關系的考察 精密稱取丹皮酚對照品2.55 mg，置25 m l量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。精密吸取此溶液2 m l，置10m l量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得丹皮酚對照品溶液(濃度為0.0204 mg/ml)。精密吸取上述對照品溶液5、10、15、20、25 μl(相當于濃度為 0.0102、0.0204、0.0306、0.0408、0.0510 mg/ml)，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以對照品進樣量x(g)為橫座標，進樣峰面積值Y(mv.s)為縱座標，繪制標準曲線，結果Y=81732x-4853.08，r=0.9999。表明丹皮酚在 0.0102～0.0510 mg/m l范圍內具有良好的線性關系。

2.4 精密度試驗 精密吸取上述對照品溶液10μl，重復進樣6次，測定，記錄峰面積，求得相對標準偏差 RSD為0.41%，結果說明儀器的精密度較好。

2.5 重現性試驗 稱取樣品6份(批號:1008261)，每份1 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法操作，依法進樣測定，計算含量，求得相對標準偏差RSD為1.56%，結果表明，本法測定具有良好的重現性。

2.6 穩定性試驗 精密吸取供試品溶液，在室溫下，分別于配制后0、2、4、6 h進行丹皮酚峰面積測定，每次進樣 10μl，測得供試品溶液于6 h內的峰面積平均值RSD為1.79%，結果表明供試品溶液在6 h內穩定。

2.7 專屬性試驗 精密稱取缺牡丹皮的陰性對照樣品，按供試品溶液制備方法操作，依法測定，記錄色譜圖，結果見圖3。對比圖1、2、3，當歸養血丸供試品在與丹皮酚對照品在相同保留時間處有色譜峰，而陰性對照樣品在與丹皮酚對照品相同保留時間處無色譜峰。表明樣品中無干擾丹皮酚檢測的成分存在。方法的專屬性強。

2.8 回收率試驗 采用加樣回收法，稱取已知含量的同一批當歸養血丸(批號:1008261;丹皮酚含量為0.513 mg/g)0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入對照品溶液，按照供試品溶液制備方法制備。按正文方法，進樣，測定，計算，求得丹皮酚平均回收率為99.12%，RSD=2.88%，結果見表1。結果表明，本法回收率較好，方法可行。

2.9 樣品測定 精密稱取當歸養血丸(批號:1008261、1008271、1008281)，照供試品溶液制備方法制備，分別精密吸取供試品溶液10μl，按上述色譜條件測定，計算樣品中丹皮酚的含量。結果見表2。

圖1 丹皮酚對照品的HPLC圖譜

圖2 當歸養血丸樣品的HPLC圖譜

圖3 當歸養血丸陰性樣品的HPLC圖譜

表1 丹皮酚回收率試驗

表2 樣品含量測定(n=3)

3 討論

中國藥典當歸養血丸所載丹皮酚的薄層鑒別方法，我們在操作時發現有斑點不明顯的情況出現。需要通過增大點樣量或者對薄層板加熱才使顯色斑點變清晰。因此，作者是薄層鑒別檢出限較高所致。此外薄層鑒別不能定量。如果改用高效液相色譜法，則可對產品質量有較客觀的判斷，同時也解決了該標準沒有含量測定方法的缺陷。通過上述實驗結果，我們認為該方法簡便，準確，可用于當歸養血丸的質量控制。

［1］中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部).中國醫藥科技出版社，2010:688.

Determ ination of Paeonol in Danggui Yangxue pills by HPLC

CHEN Yu-xiu，ZHANGSheng．Pharmic Secondary School of Hunan Province，Hunan，410014，China

ObjectiveTo establish a HPLC method for determining the paeonol content in Danggui Yangxue Pills.M ethods HPLC was used to detect Paeonol in Danggui Yangxue pills with C18column.The mobile phase consisted ofmethanol-H2O(70∶30).The flow rate was 1.0 ml/min and column temperature was 25℃.The detecting wavelength was at274 nm.ResultsThemethod was linear at the range of0.0102～0.0510 mg/m l for Paeonol(r=0.9999).The average recovery ratewas99.12%，RSD=2.8%，n=9).ConclusionThe method is convenient and accurate，which can be applied to the content determination of paeonol and the quality control of Danggui Yangxue pills.

Danggui Yangxue pills;Paeonol;HPLC

410014 湖南省醫藥中等專業學校(陳玉秀);湖南湘雅制藥有限公司(張勝)