萃取法測定人血白蛋白中辛酸鈉含量

姜國亮

萃取法測定人血白蛋白中辛酸鈉含量

姜國亮

目的總結萃取法測定人血白蛋白中辛酸鈉含量經驗。方法采用萃取法測定人血白蛋白中辛酸鈉的含量,并對其線性關系、精密度、穩定性和回收率進行研究,且與氣相色譜法進行比較。結果萃取法與氣相色譜法差異無統計學意義(P＞0.05)。結論該方法簡單快捷,結果可靠,可用于人血白蛋白的半成品中辛酸鈉的含量控制。

辛酸鈉;萃取法;氣相色譜法

《中國藥典》采用氣相色譜法控制其含量[1],但此方法制品測定前需做繁瑣的處理,檢測周期過長,對于等待分裝的半成品顯然不可取。本作者采用經典萃取法,利用辛酸鈉為有機弱酸強堿鹽的化學性質及在兩種溶劑中分配系數的不同,分離出辛酸,然后進行酸堿滴定,測其含量。

1 儀器與試劑

0.04mol/L的辛酸鈉標準溶液(辛酸鈉,北京師化精細化工),混合溶解液(無水乙醇-吐溫聚山梨醇酯 80-水(5∶0.5∶94.5,v/v),乙醚,正丁純,1mol/L鹽酸溶液,標準0.01mol/L氫氧化鈉滴定液,1%酚酞指示液。本實驗所用試劑均為分析純。

2 操作

2.1 方法 將 19ml純化水加入到 250m l分液漏斗中,再準確加入約 20%(C)的白蛋白溶液 1ml(V 1),然后加入 1mol/L鹽酸溶液 0.2ml,搖勻后加入 15ml乙醚及 1m l正丁醇,震振蕩 15s,靜置分層后,棄掉下部水層,然后將醚層用 15m l純化水震振蕩洗滌 2次,分層后將醚層轉入到 100ml的錐形瓶中。再用 15m l混合溶解液置前述分液漏斗中,輕輕搖蕩充分洗滌分液漏斗內壁后,將混合溶解液合并轉入前述錐形瓶中,混勻,加入 1%酚酞指示液 2～3滴,然后用標準氫氧化鈉滴定液(0.01mol/L)(N)滴定至淡粉紅色即終點,記錄消耗體積數(V)。同時用純化水 1ml同法操作所得的萃取液消耗標準氫氧化鈉滴定液(0.01mol/L)(N)數作空白(V)。

Pr為蛋白質

3 結果

3.1 線性關系 將 20%樣品依次取 0.6,0.8,1.0,1.2,14,1.6m l進行操作,消耗 0.01mol/L氫氧化鈉滴定液的體積差分別為 1.9,2.6,3.2,3.9,4.5,5.1m l。將其線性回歸得:Y=3.2X+0.01332,r=0.9995。表明辛酸鈉的含量在 0.095～0.255mmol/g·Pr范圍內具有良好線性關系。

3.2 精密度 取同一批樣品分成 6份按上述萃取法操作 6次。結果表1

表1 精密度及重現性穩定性試驗結果[mol/(g·Pr)]

3.3 回收率 取已知樣品按 0.160mol/g·Pr準確加入標準辛酸鈉進行 6次實驗取平均值,回收率值為 99.5%,RSD值為 1.41%。

3.4 4批成品辛酸鈉的含量測定結果比較,如表2。

表2 含量測定及中檢所氣相色譜法所測的結果比較[mol/(g·Pr)]

4 討論

室溫若高于 30℃,萃取 時特別容易乳化,影響結果,本實驗均在 20℃～30℃室溫進行。萃取法測定人血白蛋白中辛酸鈉的含量簡便易行快捷其精密度及重現性穩定性試驗RSD均小于 2%,且與中檢所氣相色譜法比較,P＞0.05,差異無統計學意義,結果可靠,方法簡便,值得推廣。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典.中國醫藥科技出版社,2010.

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