柿葉黃酮對載脂蛋白E缺失小鼠動脈粥樣硬化的影響

陳英珠 白衛娜 吳 萌 張小兵 閆靜輝 (河北省科學院生物研究所，河北 石家莊 050051)

柿葉黃酮對載脂蛋白E缺失小鼠動脈粥樣硬化的影響

陳英珠 白衛娜 吳 萌 張小兵 閆靜輝 (河北省科學院生物研究所，河北 石家莊 050051)

目的 觀察柿葉黃酮對動脈粥樣硬化形成的影響。方法 高脂飼料飼喂的ApoE-/-缺失小鼠，灌胃給予柿葉總黃酮，觀察其對胸腹主動脈動脈粥樣硬化形成的影響，檢測血清血脂和丙二醛含量。結果 柿葉總黃酮連續灌胃16 w，與模型組比較，柿葉黃酮組形成纖維狀斑塊的小鼠較多，動脈粥樣硬化斑塊面積與管腔面積比從15%降低至7%，血清中丙二醛減少33.56%，對血脂無顯著影響。結論 柿葉總黃酮顯著降低動脈粥樣硬化的形成，具有抗氧化功能。

柿葉黃酮;動脈粥樣硬化;丙二醛

動脈粥樣硬化是一種老年常見性疾病，在我國，發病率逐年上升，并且有年輕化趨勢。歐陽平〔1〕等發現一定劑量的柿葉黃酮在體外能夠分別對低密度脂蛋白(LDL)刺激下和基礎狀態下的大鼠血管平滑肌細胞增殖產生明顯的抑制作用，但是，柿葉黃酮對動脈粥樣硬化的影響尚不十分清楚。本文以載脂蛋白E缺失(ApoE-/-)小鼠為材料，研究柿葉黃酮對胸腹主動脈動脈粥樣硬化的作用，為柿葉黃酮的進一步開發奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料 ApoE-/-小鼠購自北京大學醫學部實驗動物中心，高脂飼料由上海斯萊克實驗動物有限公司提供(含21%豬油和0.15%膽固醇)。柿葉黃酮由本研究室自制，純度25%，其他試劑均為國產分析純。

1.2 方法

1.2.1 實驗分組 實驗分為三組，對照組、模型組和柿葉黃酮組。對照組8只，選用8 w的雄性C57BL/6小鼠，正常飲食。8 w的雄性ApoE-/-小鼠26只，隨機分成模型組和柿葉黃酮組，每組13只，自由飲水，飼喂高脂飼料。柿葉黃酮組灌胃給予30 mg·d－1·kg－1體重柿葉黃酮，對照組和模型組給予灌胃生理鹽水。

1.2.2 血脂測定 連續灌胃16 w后，小鼠經麻醉后眼眶采血，分離血清。按常規方法，應用日立-7170全自動生化儀測定甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)和極低密度脂蛋白(VLDL)。

1.2.3 病理學觀察 連續灌胃16 w后，小鼠經麻醉后采血、處死，取胸腹主動脈，生理鹽水清洗管腔，櫻花冷凍包埋劑(OCT)包埋，冰凍切片，連續橫切，片厚8μm，HE染色。普通OLYMPUS光學顯微鏡觀察并采集圖像。采用HMIAS-2000高清晰度彩色醫學圖文分析系統對血管腔面積和動脈粥樣硬化總面積進行相對定量分析。

1.2.4 血清丙二醛含量測定 采用南京建成丙二醛測定試劑盒，按照說明書操作。

1.3 統計學分析 采用SPSS13.0統計軟件，數據用±s表示，兩組間比較采用t檢驗;多組比較采用單因素方差分析。

2 結果

2.1 動物一般情況 飼養過程中，模型組和柿葉黃酮組各有5只小鼠背部有脫毛現象，但兩組間沒有明顯差異，對照組毛色正常。結果顯示，飼養至16 w，模型組和柿葉黃酮組體重無顯著差異。見表1。

表1 小鼠體重情況(±s，n=13，g)

表1 小鼠體重情況(±s，n=13，g)

組別 8 w體重 16 w 26.06±1.29 30.27±1.70柿葉黃酮組體重模型組26.77±0.87 32.64±1.78

2.2 柿葉黃酮對血脂變化的影響 飼喂高脂飼料16 w，與正常對照組比較，模型組血清中TC、TG和VLDL顯著提高(P＜0.05)，說明模型是成功的。但是，與模型組相比，柿葉黃酮組三者無顯著差異，表明柿葉黃酮對飼喂高脂飼料16 w的ApoE-/-小鼠血清脂質無顯著影響。見表2。

表2 柿葉黃酮對小鼠血脂的影響(±s，n=13，mmol/L)

表2 柿葉黃酮對小鼠血脂的影響(±s，n=13，mmol/L)

與正常對照組比較:1)P＜0.01

組別TC TG VLDL正常對照組3.19±0.06 1.40±0.21 0.27±0.04模型組 40.51±3.471) 3.81±0.421) 1.73±0.191)柿葉黃酮組 35.98±5.291) 3.34±0.631) 1.52±0.281)

2.3 柿葉黃酮對動脈粥樣硬化斑塊形成的影響 光學顯微鏡下觀察，HE染色結果顯示，高脂飼料飼喂16 w時，模型組13只小鼠，9只形成纖維斑塊，3只有脂質條紋形成，1只內膜增厚。柿葉黃酮組13只小鼠，5只有纖維斑塊產生，3只有脂質條紋形成，1只內膜增厚，4只正常。動脈粥樣硬化斑塊面積與管腔面積比模型組顯著高于柿葉黃酮組(P＜0.05)。以上結果顯示，柿葉黃酮明顯抑制動脈粥樣硬化形成。見表3。

表3 柿葉黃酮對小鼠動脈粥樣硬化斑塊的影響(±s，n=13)

表3 柿葉黃酮對小鼠動脈粥樣硬化斑塊的影響(±s，n=13)

與模型組比較:1)P＜0.05

組別 管腔面積(μm2)斑塊面積(μm2)斑塊面積/0.03柿葉黃酮組 123 927.60±7 170.60 8 449.62±2 761.74 0.07±0.021)管腔面積模型組 137 714.10±15 622.07 23 007.54±7 815.64 0.15±

2.4 柿葉黃酮對血清丙二醛含量的影響 飼喂高脂飼料后，與對照組丙二醛含量〔(22.27±2.19)nmol/m l〕比較，模型組小鼠明顯提高〔(35.18±3.89)nmol/ml，P ＜0.05〕，是對照組的1.85倍，柿葉黃酮組血清丙二醛含量略有增加，是對照組的1.24倍〔(24.15±3.18)nmol/ml，P ＜0.05〕。與模型組相比，降低33.56%(P＜0.05)。

3 討論

有研究表明，口服天然黃酮咖啡酸苯乙酯可以降低ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化斑塊的形成〔2〕。柿葉總黃酮包括槲皮素、山奈酚兩種苷元和金絲桃苷、異槲皮苷和黃芪苷等三種糖苷〔3〕。本實驗結果顯示，連續灌胃柿葉總黃酮16 w，與模型組比較，形成纖維狀斑塊小鼠的數量明顯減少，動脈粥樣硬化斑塊面積與管腔面積比由0.15降至0.07，證實口服柿葉總黃酮也可以抑制高脂飼料飼喂的ApoE-/-小鼠胸腹主動脈動脈粥樣硬化斑塊的形成。肥胖和高血脂都是動脈粥樣硬化形成的危險因素，本實驗模型組和柿葉黃酮組體重和血脂無顯著差異，表明柿葉黃酮對體重和血脂無影響。

脂質的過氧化在動脈粥樣硬化發展中占據重要的位置。含有抗氧化物質的紅酒、綠茶等可能有抗冠心病的功能〔4〕。過氧化脂質發生過程中伴隨有毒物質丙二醛的產生。而丙二醛通常作為氧化應激的一個指標〔5〕。丙二醛修飾的LDL能夠被組織中的巨噬細胞吸收，導致泡沫細胞形成進而發展成動脈粥樣硬化斑塊〔6〕。楊建雄〔7〕等對柿葉黃酮的體外抗氧化作用進行了研究，發現其可以清除·OH，從而抑制·OH所導致的丙二醛的產生。本實驗證實柿葉黃酮可以降低ApoE-/-小鼠血清中丙二醛含量，在體內也有顯著的抗氧化作用。這可能是它抗動脈粥樣硬化的因素之一。

1 歐陽平，貝偉劍，賴文巖，等.柿葉黃酮抑制LDL刺激的大鼠血管平滑肌細胞增殖〔J〕.中藥材，2004;27(8):600-2.

2 Hishikawa K，Nakaki T，Fujita T.Oral flavonoid supplementation attenuates atherosclerosis development in apolipoprotein E-deficientmice〔J〕.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2005;25(2):442-6.

3 馬 彥.柿葉的化學成分研究進展〔J〕.中山大學研究生學刊:自然科學與醫學版，2004;25(1):10-6.

4 Vinson JA，Dabbagh YA.Effect of green and black tea supplementation on lipids，lipid oxidation and fibrinogen in the hamster:mechanisms for the epidemiological benefits of tea drinking〔J〕.FEBSLett，1998;433(1-2):44-6.

5 Esterbauer H，Schaur RJ，Zollner H.Chemistry and biochemistry of 4-hydroxynonenal，malonaldehyde and related aldehydes〔J〕.Free Radic Biol Med，1991;11(1):81-128.

6 Holvoet P，Vanhaecke J，Janssens S，et al.Oxidized LDL and malondialdehyde-modified LDL in patientswith acute coronary syndromes and stable coronary artery disease〔J〕.Circulation，1998;98(15):1487-94.

7 楊建雄，原江鋒，李發榮，等.柿葉黃酮的體外抗氧化作用研究〔J〕.營養學報，2003;25(2):215-7.

R2

A

1005-9202(2011)12-2233-02

陳英珠(1962-)，女，博士，副研究員，主要從事中藥藥理研究。

〔2010-10-19收稿 2011-01-06修回〕

(編輯 袁左鳴/曹夢園)