HCV-RNA抗-HCV和ALT聯(lián)合檢測(cè)在丙肝中診斷的應(yīng)用

錢明 袁君君 傅劍釗 周劍輝 舒曉春

HCV-RNA抗-HCV和ALT聯(lián)合檢測(cè)在丙肝中診斷的應(yīng)用

錢明 袁君君 傅劍釗 周劍輝 舒曉春

目的探討丙肝(抗-HCV)陽(yáng)性人群中，其丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)含量與丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)的關(guān)系。方法采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)技術(shù)檢測(cè)222例丙型肝炎病毒感染者血清HCV RNA含量，采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)抗-HCV，采用酶法檢測(cè)其ALT水平。結(jié)果222例抗-HCV陽(yáng)性標(biāo)本中135例HCV RNA陽(yáng)性(＞500拷貝/ml)，陽(yáng)性率為60.8%，120份標(biāo)本ALT異常(＞40U/L)，異常率為54%，ALT水平及異常率隨HCV RNA含量的升高而增加。結(jié)論ALT水平及異常率與HCV RNA之間呈正相關(guān)，提示ALT水平可間接反映HCV在肝臟的復(fù)制程度，HCV-RNA含量與抗-HCV同時(shí)檢測(cè)可以提高臨床對(duì)丙型肝炎的診斷，HCV-RNA是反映HCV復(fù)制的可靠指標(biāo)，結(jié)合ALT生化指標(biāo)結(jié)果可幫助臨床了解HCV在體內(nèi)的復(fù)制狀況。

丙型肝炎;丙肝抗體;丙型肝炎病毒核酸

全球丙肝感染率約為3%，大約117億人感染了HCV，每年新發(fā)丙型肝炎病例315萬(wàn)例［1］。慢性丙肝患者10年內(nèi)約有20%發(fā)展為肝硬化，肝硬化患者每年約有3%發(fā)展為肝細(xì)胞癌［2］。因此早期診斷和及時(shí)治療尤為重要。HCV-RNA含量與抗-HCV同時(shí)檢測(cè)可以提高臨床對(duì)丙型肝炎的診斷，本文檢測(cè)了222例抗-HCV陽(yáng)性的血清標(biāo)本，探討與HCV-RNA，ALT含量之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料中山大學(xué)第五附屬醫(yī)院2005年至2009年除甲、乙、戊型肝炎患者、無(wú)肝臟腫瘤、無(wú)非特異性免疫原性肝病患者外，丙型肝炎病毒感染的住院或門診患者222例。其中男166例，女56例;年齡7～77歲，平均為37.8歲。

1.2 標(biāo)本采集抽取EDTA-K2抗凝外周靜脈血2 ml用于HCV RNA定量檢測(cè)，及促凝外周靜脈血2 ml用于ALT檢測(cè)。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 HCV RNA測(cè)定采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQPCR)技術(shù)檢測(cè)，儀器采用美國(guó)生產(chǎn)的MJ Research 2全自動(dòng)熒光定量PCR儀。試劑由深圳匹基生物工程公司提供。操作按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。HCV RNA含量的陰性參考值＜500拷貝/ml。

1.3.2 ALT測(cè)定采用酶法在日立7170型全自動(dòng)生化分析儀上檢測(cè)，所有操作按照試劑盒上說(shuō)明書進(jìn)行。試劑由上海科華東菱診斷用品有限公司提供。ALT血清含量＜40U/L為正常。

1.3.3 抗-HCV測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)，所有操作按照試劑盒上說(shuō)明書進(jìn)行。試劑由北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司提供。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，對(duì)ALT采用相關(guān)分析P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清HCV RNA含量變化與ALT的關(guān)系(表1)。

從表1可以看出，135例HCV RNA含量＞500拷貝/ml的標(biāo)本中，92例ALT水平異常，其ALT水平及異常率隨HCV RNA含量的升高而增加，經(jīng)相關(guān)性分析，ALT水平及異常率與HCV RNA含量呈正相關(guān)性(r=0.986，P＜0.005)

2.2 血清HCV RNA含量對(duì)222例抗-HCV陽(yáng)性測(cè)定血清HCV RNA含量，結(jié)果為87例陰性，135例為陽(yáng)性，含量為5× 102～5×107拷貝/ml，在135例HCV-RNA陽(yáng)性標(biāo)本中，有43例ALT水平正常，92例ALT水平異常。在HCV-RNA陽(yáng)性組中，ALT正常組與異常組比較見表2。從表2可以看出，HCV-RNA陽(yáng)性時(shí)肝功異常68.2%明顯高于HCV-RNA陰性時(shí)32.2%。而222例抗-HCV陽(yáng)性患者中有(60.8%)的患者HCV-RNA都為陽(yáng)性。

表1135 個(gè)陽(yáng)性標(biāo)本血清HCV RNA含量變化與ALT的關(guān)系

表2 ALT正常組與異常組在135例HCV-RNA陽(yáng)性標(biāo)本中的比較(例，%)

3 討論

丙型肝炎病毒感染是肝硬化和肝癌的重要病因，因此盡早診斷、合理治療丙肝尤為重要。目前診斷主要依靠抗HCVIgG及HCV RNA的檢測(cè)。但由于抗-HCV檢測(cè)存在窗口期、不能區(qū)別現(xiàn)癥感染和既往感染、受機(jī)體免疫水平影響等缺陷［3］，不能及時(shí)診斷出病毒感染，而熒光定量PCR檢測(cè)HCV RNA含量，可直接反映體內(nèi)HCV的活動(dòng)和復(fù)制程度等優(yōu)點(diǎn)，有利于及時(shí)診斷。近年來(lái)許多研究表明，丙肝發(fā)病過(guò)程中肝炎病毒感染使機(jī)體免疫系統(tǒng)活化，這些活化的細(xì)胞可與因肝炎病毒感染而改變的肝細(xì)胞膜成分發(fā)生免疫應(yīng)答，從而造成肝功的改變和肝細(xì)胞的壞死［4］。表1通過(guò)血清HCV RNA含量及ALT檢測(cè)結(jié)果的比較，從分子學(xué)定量角度證實(shí)了HCV RNA含量與ALT水平呈正相關(guān)，與相關(guān)研究［5-7］報(bào)告一致。ALT異常率也與HCV RNA含量呈正相關(guān)，也說(shuō)明了HCV RNA是在肝細(xì)胞中復(fù)制，對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生直接或間接的損害。而表2HCV-RNA陽(yáng)性時(shí)肝功異常68.2%明顯高于HCV-RNA陰性時(shí)32.2%。而222例抗-HCV陽(yáng)性患者中有(60.8%)的患者HCV-RNA都為陽(yáng)性。本文中出現(xiàn)的ALT水平異常，HCV RNA陰性可能由于:①丙型肝炎患者血清中病毒含量低，且具有一定波動(dòng)性，在未經(jīng)干擾素治療的患者中HCV RNA可呈間歇性陽(yáng)性;②HCV RNA十分脆弱，易被白細(xì)胞含有的RNA酶降解;③HCV RNA不像HBV DNA那樣不受進(jìn)食的影響，HCV易與迅速增高的血中脂質(zhì)及脂蛋白相結(jié)合致使檢出率下降;④HCV RNA的PCR包括從RNA到DNA的轉(zhuǎn)錄，第一次PCR及第二次PCR，其中任何步驟的問題均影響其檢出［8］。同樣的，本文也出現(xiàn)了HCV-RNA陽(yáng)性，ALT水平正常的情況，這也與近年來(lái)一些研究相符合，其研究顯示部分患者血清HCV-RNA含量高，但肝臟組織僅呈輕度或中度損傷。但也有個(gè)別HCV-RNA很低，卻出現(xiàn)較嚴(yán)重的肝臟組織損傷，提示HCV對(duì)肝臟的損傷可能是由于免疫應(yīng)答所造成的，免疫應(yīng)答反應(yīng)在HCV感染的發(fā)病機(jī)制中具有重要作用［9］。本文中也出現(xiàn)有抗-HCV陽(yáng)性，HCV RNA陰性的情況，可能由于:①有些病例經(jīng)過(guò)病毒治療，使病毒復(fù)制減慢或停止，血清中的HCV RNA載量低于最少可檢出值，抗-HCV在體內(nèi)存在時(shí)間長(zhǎng)(1～10年)，故可出現(xiàn)抗-HCV陽(yáng)性，HCV RNA陰性;②由于ELISA試劑盒上包被有多種抗原成分，能檢測(cè)出機(jī)體針對(duì)不同區(qū)域抗原產(chǎn)生的多種抗體;③急性丙肝感染恢復(fù)期，HCV復(fù)制停止，HCV-RNA消失，但抗-HCV持續(xù)存在。抗-HCV是HCV感染與既往感染的間接指標(biāo)，但HCV感染后到抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)一般有一個(gè)較長(zhǎng)的窗口期，平均為70 d，約1%～3%的患者抗-HCV可持續(xù)陰性，而且抗-HCV檢測(cè)存在不能區(qū)別現(xiàn)癥感染和既往感染、受機(jī)體免疫水平影響等缺陷。HCV RNA是HCV復(fù)制活躍的可靠指標(biāo)，在感染HCV 1～2周內(nèi)，血清中即可檢測(cè)到HCV RNA，該技術(shù)大大縮短了檢測(cè)丙肝“窗口期”，可以判斷疾病是否處于隱性及亞臨床狀態(tài)，而且FQ-PCR檢測(cè)HCV-RNA的整個(gè)過(guò)程均在完全封閉狀態(tài)下進(jìn)行，能有效的克服擴(kuò)增產(chǎn)物的污染造成的假陽(yáng)性，特異性與靈敏度高，易為基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室接受。但由于丙型肝炎病毒的遺傳物質(zhì)為RNA，容易受到外界RNA酶的影響，可能出現(xiàn)假陰性。ALT在肝細(xì)胞中含量較多，當(dāng)肝臟遭到損害時(shí)，此酶釋放到血液中，故作為診斷肝炎的一項(xiàng)重要指標(biāo)。但有時(shí)ALT與肝臟受損情況并不相符，尤其是HCV病毒直接作用于肝臟，對(duì)肝臟造成的破壞是隱匿的。血清ALT濃度升高不能單獨(dú)由病毒載量決定，還取決于個(gè)體的免疫應(yīng)答能力。綜上所述，單一地檢測(cè)抗-HCV或者HCV-RNA含量從而確定丙型肝炎病毒感染存在一定風(fēng)險(xiǎn)，因此建議在以HCV RNA為重要檢測(cè)指標(biāo)診斷HCV時(shí)，應(yīng)聯(lián)合檢測(cè)分析抗-HCV和ALT等。

［1］莊輝.重視丙型肝炎的研究.中華肝臟病雜志，2004，12(2): 65-66．

［2］Tamim H，Irani-Hakime N，Aoun JP，et al.Serop revalence of hepatitis C virus(HCV)infection among blood donors:a hosp italbased study.Transfus Apheresis Sci，2001，24(1):29-35．

［3］王彥君，譚復(fù)明，陳偉華，等.重組干擾素治療慢性丙型肝炎68例.中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2005，15(5):295-296．

［4］王志明，譚復(fù)明，陳偉華，等.輸血后丙型肝炎病毒感染的血清病毒定量研究.中華傳染病雜志，2000，18(1)37-38．

［5］Adinolfi LE，Utili R，Andreana A，et，al.Serum HCVRNA levels correlate with histological liver damage and concur with steatosis in propression of chronic hepatitis C.Dig Dis Sci，2001，46: 1677-1683．

［6］Sabin CA，Emery V，Devereux HL，et al.Long-term patterns of hepatitis C virus RNA concentrations in a cohort of HIV seronegative men with bleeding disorders.J Med Virol，2002，68:68-75．

［7］趙穎，魏軍，王菊英.丙型肝炎病毒核酸定量測(cè)定的臨床價(jià)值.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2005，27(4):233．

［8］譚躍，黃淑媛，劉勇.丙型肝炎病人在治療過(guò)程中HCV-RNA含量、血清抗HCV抗體及其生化指標(biāo)的變化，2005，15(17):8-11．

［9］Lee YS，Yoon SK，Chung ES，et al.The relationship of histologic activity to serum ALT，HCV RNA genotype and HCV RNA titers in chronic hepatitis C.J korean Med Sci，2001，16(5):585-591．

Clinical application HCV-RNA anti-HCV And ALT examination in diagnosis of patients with HCV

QIAN Ming，YUAN Jun-jun，F(xiàn)U Jian-zhao，et al．Laboratory Department of the Fifth Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University，Zhuhai 519000，China

ObjectiveTo discuss the relationship between the HCV-RNA levels and ALT levels in the HCV masculine crowd.MethodsFluorescent Quantitative PCR methodswere used to detect the quantify of HCV-RNA in 222 anti-HCV masculine samples，the ALT were detected by automatic biochemistry analyzer. ResultsIn 222 cases anti-HCV masculine samples，135 cases were positive of HCV-RNA and 120 cases were positive of ALT.Masculine gender rate of HCV-RNA was 60.8%.ALT rate of abnormality was 54%.The ALT level and the rate of abnormality content ascension increased along with the HCV-RNA.ConclusionThere was a corrlation between ALT levels and the concentration of HCV RNA.Prompted the ALT level to be possible to reflect HCV indirectly in the liver duplication degree，HCV-RNA levels and anti-HCV detection could improve the clinical diagnosis of hepatitis C，HCV-RNA is a reliable indicator to reflects HCV replication，combined with ALT biochemical results could help clinicians understand the status of HCV replication in the body．

HepatitiscHCV-RNA;Anti-HCV;HCV-RNA

519000珠海，中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院檢驗(yàn)科

舒曉春E-mail:shuxc@163.com