適合結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢查的替代策略研究

趙紅玉 李 穎

1.甘肅省靈臺縣疾病預(yù)防控制中心，甘肅靈臺 744400；2.甘肅省平?jīng)鍪械诙嗣襻t(yī)院，甘肅平?jīng)?744000

結(jié)核病是國家防控的重點(diǎn)傳染病之一，如何早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是結(jié)核病防控的主要措施，提高診斷的陽性率具有較高的實(shí)用價值。目前，縣級實(shí)驗(yàn)室多采用經(jīng)典的痰涂片顯微鏡檢查法，但由于該方法與檢驗(yàn)人員的業(yè)務(wù)素質(zhì)和水平、操作方法、痰液的采集，標(biāo)本的處理，取材制片，顯微鏡檢查等諸多因素有關(guān)，陽性率也比較低；因此，研究適合實(shí)驗(yàn)室顯微鏡檢查結(jié)核桿菌的替代策略，是一項(xiàng)很有意義的事情。結(jié)核分支桿菌是胞內(nèi)感染菌，屬帶菌免疫，只有當(dāng)機(jī)體細(xì)胞內(nèi)存在結(jié)核分枝桿菌或其組分時才有免疫力，一旦結(jié)核分枝桿菌被完全殺滅，其組分完全被清除后，相應(yīng)的免疫力也隨之消失。近年來的研究表明活動性結(jié)核患者體液免疫隨病變加重而増強(qiáng)，產(chǎn)生特異性結(jié)核抗體也隨之升高[1]。因此，用ELISA檢測患者血液標(biāo)本中是否存在特異性結(jié)核桿菌抗體及其含量，從而診斷結(jié)核病和觀察療效。筆者對230例確診的活動性肺結(jié)核患者和60例非結(jié)核性患者用ELISA法檢測血液中結(jié)核桿菌抗體與直接厚涂片檢測患者痰中結(jié)核桿菌進(jìn)行對比，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

世行貸款/英國贈款靈臺縣結(jié)核病控制項(xiàng)目2007年7月1日～2009年6月30日臨床確診的230例活動性肺結(jié)核患者，在230例患者中，涂陽59例，涂陰171例；初治173例，復(fù)治57例。另選擇臨床診斷非結(jié)核病患者60例作為對照，其中慢性支氣管炎合并肺氣腫者31例，支氣管擴(kuò)張癥11例，肺炎6例，肺癌并咯血者12例。

1.2 儀器及試劑

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）快速測定結(jié)核桿菌抗體試劑盒由珠海麗珠生物技術(shù)有限公司提供，（試劑批號：20080521，有效期：2008-05-20）；美國Stat Fax 2600型洗板機(jī)，美國Stat Fax 2100型酶標(biāo)儀比色。

1.3 標(biāo)本來源

血清標(biāo)本由2007年7月～2009年6月世行貸款/英國贈款靈臺縣結(jié)核病控制項(xiàng)目確診的230例活動性肺結(jié)核患者提供，抽取患者早晨空腹靜脈血標(biāo)本5 mL，分離血清，及時檢測；痰標(biāo)本由患者早晨徹底清潔口腔后，深咳出1～2口痰液（如果咯血取膿血痰）留于加蓋無菌容器內(nèi)立即送檢。

1.4 檢測方法和結(jié)果判斷

1.4.1 ELISA試驗(yàn) 230例活動性肺結(jié)核患者血清，ELISA法檢測結(jié)核桿菌抗體，嚴(yán)格按說明書操作，顯色后應(yīng)用美國Stat Fax 2600型酶標(biāo)儀比色，結(jié)果以說明書給定的公式設(shè)置的酶標(biāo)儀判斷結(jié)果為準(zhǔn)。陰性：提示待檢標(biāo)本中結(jié)核抗體含量未升高，即近期可能無結(jié)核菌感染；陽性：提示待檢標(biāo)本中結(jié)核抗體含量升高，即近期可能有結(jié)核菌感染或結(jié)核病存在。

1.4.2 顯微鏡檢查 取合格痰直接厚涂片以抗酸染色，干燥后顯微鏡檢查100個視野，有3～9條抗酸桿菌為陽性，鏡檢300個視野未見抗酸桿菌為陰性。陰性：說明痰液中結(jié)核桿菌量少或無，傳染性低或無傳染性；陽性：說明痰液中結(jié)核桿菌有結(jié)核桿菌，傳染性強(qiáng)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析；計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）的形式表示，采用t檢驗(yàn)，計數(shù)資料用x2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

230例活動性肺結(jié)核患者，ELISA法檢測血清結(jié)核桿菌抗體陽性196例，抗體陽性率為85.2%；230份痰標(biāo)本直接痰厚涂片顯微鏡檢查，陽性59例，痰檢陽性率為25.6%，這59例涂陽患者ELISA法檢測其血清抗體全部陽性。171例涂陰患者中ELISA檢測血清結(jié)核桿菌抗體陽性133例，抗體陽性率77.8%。60例非結(jié)核病患者中，ELISA檢測結(jié)核桿菌抗體陽性6例（肺癌2例，慢性支氣管炎3例，支氣管擴(kuò)張1例），痰直接厚涂片未檢出陽性。經(jīng)x2檢驗(yàn)，ELISA檢測結(jié)核桿菌抗體陽性率明顯高于直接涂片法陽性率（P＜0.01）。ELISA法檢測患者血液中結(jié)核桿菌抗體是實(shí)驗(yàn)室顯微鏡檢查結(jié)核桿菌最好的替代策略方法。見表1。

表1 ELISA檢測血清結(jié)核桿菌抗體與痰顯微鏡檢查結(jié)核桿菌結(jié)果比較

3 討論

由于結(jié)核病診斷缺乏“金標(biāo)準(zhǔn)”，確診只有通過臨床標(biāo)本痰直接厚涂片顯微鏡檢查和X線胸片確定。對早期結(jié)核，痰涂陰和肺外結(jié)核病往往無法明確診斷。而且顯微鏡檢查與檢驗(yàn)人員的業(yè)務(wù)素質(zhì)和水平，操作方法，痰液的采集，標(biāo)本的處理，取材制片等諸多因素有關(guān)，陽性率也比較低；應(yīng)用ELISA檢測活動性肺結(jié)核患者血清結(jié)核桿菌抗體，標(biāo)本易采集，方法簡單，儀器判定結(jié)果誤差小，陽性率高；而且可檢測結(jié)核早期感染，細(xì)菌量少或肺外結(jié)核病時更明顯。文獻(xiàn)報道ELISA法檢測肺結(jié)核患者血清中的結(jié)核桿菌抗體陽性率明顯高于痰涂片和培養(yǎng)，尤其在結(jié)核早期感染，細(xì)菌量少或肺外結(jié)核病時更明顯[2-3]。因此ELISA特別適合結(jié)核病的早期或肺外結(jié)核診斷。

[1] 中華醫(yī)學(xué)會結(jié)核病分會.肺結(jié)核病診斷與治療指南[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2001，24（3）：70.

[2] 楊諾，馬滌輝.酶聯(lián)免疫點(diǎn)化驗(yàn)法在結(jié)核性腦膜炎診斷中的應(yīng)用及展望[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，6（12）：183-184.

[3] 夏洪嬌，劉劍榮，彭可君.噬菌體生物擴(kuò)增法結(jié)合熒光染色法快速檢測結(jié)核分枝桿菌[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2008，7（11）：80-81.