鹽酸小檗堿磷脂復合物在兔體內的藥動學及相對生物利用度研究

韓文莉，陸巍，何東平，龍友琦，尚京川

（重慶醫科大學藥學院，重慶市 400016）

鹽酸小檗堿磷脂復合物在兔體內的藥動學及相對生物利用度研究

韓文莉＊，陸巍，何東平，龍友琦，尚京川#

（重慶醫科大學藥學院，重慶市 400016）

目的：考察鹽酸小檗堿磷脂復合物在兔體內的藥動學及相對生物利用度。方法：將6只兔隨機均分為A、B組，分別灌服鹽酸小檗堿原料藥和鹽酸小檗堿磷脂復合物（50mg·kg－1，以鹽酸小檗堿計），于給藥前及給藥后0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24h股靜脈取血，給藥1周后，2組交叉給藥，相同時間點取血，采用高效液相色譜法測定其中鹽酸小檗堿濃度，并計算藥動學參數及相對生物利用度。結果：血漿中鹽酸小檗堿檢測濃度的線性范圍為20.0～640.0μg·L－1（r＝0.9996）；A組和B組的tmax分別為（0.24±0.12）、（0.23±0.27）h，t1/2β分別為（5.01±0.17）、（3.80±0.16）h，cmax分別為（59.88±6.10）、（194.26±8.60）μg·L－1，AUC0～24h分別為（446.98±10.50）、（1110.12±28.40）μg·h·L－1；鹽酸小檗堿磷脂復合物相對于其原料藥的相對生物利用度為（273.3±3.40）%。結論：鹽酸小檗堿磷脂復合物與其原料藥比較，增加了血漿中藥物濃度，顯著提高了鹽酸小檗堿的相對生物利用度。

鹽酸小檗堿；磷脂復合物；兔；藥動學；相對生物利用度；高效液相色譜法

小檗堿（Berberine）屬季銨類異喹啉生物堿，其鹽酸鹽在臨床上一直作為清熱解毒、抗菌止瀉藥應用。近年來，隨著研究的不斷深入，其臨床作用已擴展到心血管疾病、胃腸神經官能癥、糖尿病等治療方面[1，2]。由于小檗堿具有口服吸收差、生物利用度低、大劑量服用會產生嚴重的胃腸道反應等[3]缺點，很大程度上限制了其臨床應用。為了提高鹽酸小檗堿的口服生物利用度，筆者研制了一種新的給藥系統——鹽酸小檗堿磷脂復合物[4]。為評價該磷脂復合物在兔體內的藥動學和生物利用度，本文采用自身對照單劑量雙周期交叉給藥方案，以高效液相色譜（HPLC）法測定其血漿中的藥物含量。

1 儀器與材料

1.1 儀器

1100 系列HPLC儀和G1314A紫外檢測器（美國Agilent公司）；TGL-16G高速離心機（上海安亭科學儀器廠）；SK-1渦旋混合儀（江蘇國華儀器廠）；BF2000氮氣吹干儀（北京八方世紀科技有限公司）。

1.2 試藥

鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110713-200208，純度：98%）；參比制劑：鹽酸小檗堿原料藥（重慶醫科大學藥學院自制，批號：090425，含量：99.2%）；受試制劑：鹽酸小檗堿磷脂復合物（重慶醫科大學藥學院自制，批號：0900516，含量：48.7%）；乙腈為色譜純，磷酸氫二鉀、十二烷基磺酸鈉等均為分析純，水為超純水。

1.3 動物

新西蘭大白兔6只，♀♂各半，體重（2.75±0.25）kg，由重慶醫科大學動物實驗中心提供，動物生產許可證號：SCXK（渝）2007-0001。

2 方法與結果

2.1 給藥方案與血樣采集

采用自身對照單劑量雙周期交叉給藥方案，將6只大白兔隨機均分為A、B組，禁食12h后，A組灌服鹽酸小檗堿原料藥，B組灌服鹽酸小檗堿磷脂復合物，給藥劑量均為50mg·kg－1[5]（以鹽酸小檗堿計），服藥后4h內禁食，于給藥前及給藥后0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24h股靜脈采血1.5mL，給藥1周后2組交叉給藥，相同時間點取血。將所有采集的血樣均置于肝素化離心管中，3000r·min－1離心10min，分離上層血漿，－20℃冷凍保存待測。

2.2 色譜條件[5]

色譜柱：Hypersil ODS（150mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-0.05mol·L－1磷酸氫二鉀（含0.01mol·L－1十二烷基磺酸鈉）＝50∶50（V/V）；檢測波長：345nm；流速：1mL·min－1；柱溫：25℃；進樣量：50μL。

2.3 血漿樣品處理

精密量取待測血漿樣品500μL，置于離心管中，加入800μL乙腈，渦旋振蕩2min，14000r·min－1離心15min，取上清液800μL于另一離心管中，50℃水浴中氮氣吹干，殘留物加流動相400μL溶解，渦旋振蕩1min，14000r·min－1離心10min，取上清液50μL進樣。

2.4 方法學驗證

2.4.1 專屬性考察。分別取空白血漿、空白血漿+鹽酸小檗堿、血漿樣品（給藥后1.5h），按“2.3”項下方法處理，進樣分析，記錄色譜。結果表明，鹽酸小檗堿的保留時間約為5min，與血漿中內源性雜質峰分離良好，空白血漿中的內源性物質對鹽酸小檗堿測定無干擾。色譜詳見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.空白血漿；B.空白血漿+鹽酸小檗堿；C.血漿樣品；1.鹽酸小檗堿Fig1 HPLC chromatogramsA.blank plasma；B.blank plasma spiked with berberine hydrochloride；C.plasma sample；1.berberine hydrochloride

2.4.2 標準曲線的制備。精密稱定烘干至恒重的鹽酸小檗堿原料藥適量，加甲醇制備成16mg·L－1的貯備液。精密量取一定量的貯備液，置于5mL具塞離心管中，加入兔空白血漿制備成含鹽酸小檗堿20.0、40.0、80.0、160.0、320.0、640.0μg·L－1的系列血漿標準工作液，各取500μL按“2.3”項下方法處理，進樣測定，以峰面積（A）對鹽酸小檗堿濃度（c）進行線性回歸，得回歸方程：A＝1.880c－5.334（r＝0.9996，n＝5）。結果表明，血漿中的鹽酸小檗堿在20.0～640.0μg·L－1濃度范圍內線性關系良好，方法的最低檢測限為10μg·L－1（S/N≥3）。

2.4.3 方法回收率與精密度試驗。分別取500μL低、中、高（20.0、320.0、640.0μg·L－1）3種濃度的血漿樣品，按“2.3”項下方法處理，進樣測定，同一濃度同日內測定5次，連續測定5d，計算方法回收率和日內、日間RSD。結果，低、中、高3種濃度的平均方法回收率為92.0%～101.6%，RSD≤3.9%；日內、日間RSD均≤4.5%。

2.4.4 提取回收率試驗。分別取500μL低、中、高（20.0、320.0、640.0μg·L－1）3種濃度的血漿樣品，按“2.3”項下方法處理，進樣測定，將經提取后血漿中鹽酸小檗堿的峰面積（Ai）與流動相稀釋成的對應濃度的鹽酸小檗堿的峰面積（Ai′）相比較，計算提取回收率。結果，低、中、高3種濃度的平均提取回收率為80.4%～85.6%，RSD≤3.5%。

2.5 藥動學參數

利用3p97藥動學軟件處理測得的藥-時數據，選擇最佳藥動學模型，計算相應的藥動學參數，其中tmax和cmax為實測值，AUC0～24h由梯形法求得。采用t檢驗對藥動學參數進行統計分析，以鹽酸小檗堿原料藥為參比計算鹽酸小檗堿磷脂復合物的相對生物利用度Fr（Fr＝AUC受試制劑/AUC參比制劑×100%）。2種制劑灌服后的藥-時曲線詳見圖2，藥動學參數詳見表1。

圖2 2種制劑灌服后的藥-時曲線（±s，n＝6）Fig2 Mean plasma concentration-time curve of 2kinds of preparation（s±s，n＝6）

表12 種制劑的藥動學參數（±s，n＝6）Tab1 Pharmacokinetic parameters of 2kinds of preparation（s±s，n＝6）

表12 種制劑的藥動學參數（±s，n＝6）Tab1 Pharmacokinetic parameters of 2kinds of preparation（s±s，n＝6）

藥動學參數Ka/h－1 t1/2ka/h t1/2β/h tmax/h cmax/μg·L－1 AUC0～24h/μg·h·L－1 Fr（0～24h）/%鹽酸小檗堿原料藥21.42±0.170.03±0.075.01±0.170.24±0.1259.88±6.10446.98±10.50鹽酸小檗堿磷脂復合物20.87±0.050.03±0.113.80±0.160.23±0.27194.26±8.601110.12±28.40273.3±3.40

由表1可知，與鹽酸小檗堿原料藥比較，鹽酸小檗堿磷脂復合物的tmax略有縮短，cmax升高 3.24倍，Fr（0～24h）為（273.3±3.40）%。2種制劑的藥動學參數cmax、AUC0～24h比較存在顯著性差異（P＜0.05），說明鹽酸小檗堿制成磷脂復合物后，吸收速度和程度均明顯提高。

3 討論

磷脂復合物是藥物和磷脂分子通過電荷遷移作用而形成的較為穩定的化合物或絡合物。作為一種新型的藥物制劑，其可改變母體藥物的理化性質，能顯著提高藥物的脂溶性，增強藥物吸收，提高藥物相對生物利用度，減少藥品不良反應，而且其制備方法簡單，成本低廉，近年來在藥物制劑方面應用逐漸增多，特別是在中藥磷脂復合物的研究方面取得了較大的成就。這對于探索我國天然藥物、加速傳統中藥制劑的現代化研究進展、提高中藥工業技術水平及臨床應用質量，均具有重要的理論和實際意義[6]。

在選擇實驗動物時最初考慮選擇更為接近人體生理構造和功能的實驗動物Beagle犬，但是經查閱文獻發現，曾經有研究者[3]用Beagle犬進行鹽酸小檗堿的藥動學研究，結果發現盡管加大給藥劑量直至發生嚴重胃腸道反應，血漿中鹽酸小檗堿濃度仍很低。這可能是由于鹽酸小檗堿在Beagle犬體內吸收較差，同時體內分布很廣，因此導致在血液中的分布很少，血藥濃度太低，不利于其含量測定。因此本實驗初步選擇新西蘭大白兔作為實驗動物，結果表明，在新西蘭大白兔血漿中鹽酸小檗堿在20.0～640.0μg·L－1濃度范圍內線性關系良好。

本實驗結果表明，與鹽酸小檗堿原料藥比較，鹽酸小檗堿磷脂復合物的cmax和AUC0～24h顯著提高，表明鹽酸小檗堿磷脂復合物顯著提高了鹽酸小檗堿的相對生物利用度。但其復合物的分析鑒別方法以及吸收機制等，還有待進一步研究和探索。

[1] 李 娜，陳琴華.黃連-小檗堿的藥理作用研究概況[J].中國臨床醫藥研究雜志，2006，11（159）：28.

[2] 崔學軍.黃連及其有效成分的藥理研究進展[J].中國藥師，2006，9（5）：469.

[3] 盛美萍，孫 淇，王 宏.鹽酸小檗堿在Beagle狗靜脈注射和口服藥動學研究[J].中國藥理學通報，1993，9（1）：64.

[4] 左巨波，尚京川.鹽酸小檗堿磷脂復合物的制備和理化性質研究[J].中國新藥雜志，2009，18（14）：1372.

[5] 溫 悅，賀英菊，羅巍偉.反相高效液相色譜法測定兔血漿中鹽酸小檗堿的濃度[J].中國藥房，2005，16（12）：900.

[6] 左巨波，尚京川.中藥磷脂復合物的研究進展[J].中國藥房，2007，18（27）：2149.

Pharmacokinetics and Relative Bioavailability Study of Berberine Hydrochloride Phytosome in Rabbits

HAN Wen-li，LU Wei，HE Dong-ping，LONG You-qi，SHANG Jing-chuan
（College of Pharmaceutical Sciences，Chongqing Medical University，Chongqing 400016，China）

OBJECTIVE：To study pharmacokinetics and relative bioavailability of berberine hydrochloride phytosome in rabbits.METHODS：6rabbits were randomly divided into group A and group B.Two groups were given berberine hydrochloride or berberine hydrochloride phytosomes（50mg·kg－1of berberine hydrochloride）respectively.Blood samples of femoral vein were collected before administration and 0.5，1，1.5，2，3，4，6，8，10，12，24after administration.After one week of treatment，therapy of two groups intercrossed.The concentrations of berberine hydrochloride in plasma were determined by HPLC.The pharmacokinetic parameters and relative bioavailability were calculated.RESULTS：The linear range of berberine hydrochloride was 20.0～640.0μg·L－1（r＝0.9996）.The pharmacokinetic parameters of group A vs.group B were as follows：tmax：（0.24±0.12）h vs.（0.23±0.27）h，t1/2β：（5.01±0.17）h vs.（3.80±0.16）h，cmax：（59.88±6.10）μg·L－1vs.（194.26±8.60）μg·L－1，AUC0～24h：（446.98±10.50）μg·h·L－1vs.（1110.12±28.40）μg·h·L－1.The relative bioavailability of berberine hydrochloride phytosome was（273.3±3.40）%，compared with raw material.CONCLUSIONS：Compared with raw material，berberine hydrochloride phytosomes significantly increases the plasma concentration of berberine hydrochloride and improves the relative bioavailability of it.

Berberine hydrochloride；Phytosome；Rabbits；Pharmacokinetics；Relative bioavailability；HPLC

R969.1

A

1001-0408（2011）17-1564-03

＊碩士研究生。研究方向：體內藥物分析。電話：023-68485048。E-mail：0904hanwenli@163.com

#通訊作者：副教授。研究方向：體內藥物分析。電話：023-68485048。E-mail：sjc20@126.com

2010-07-14

2010-09-19）