2種羅格列酮鈉制劑在犬體內(nèi)的生物等效性研究Δ

胡思星，方大樹，張檢，李靖柯，周鴻睿，胡湘南（重慶醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，重慶市 400016）

2種羅格列酮鈉制劑在犬體內(nèi)的生物等效性研究Δ

胡思星＊，方大樹，張檢，李靖柯，周鴻睿，胡湘南#（重慶醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，重慶市 400016）

目的：比較羅格列酮鈉腸溶制劑與羅格列酮鈉普通制劑在犬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征及其生物等效性。方法：將6只犬均分為2組，分別單次灌服羅格列酮鈉腸溶膠囊或羅格列酮鈉普通膠囊4mg，于給藥前及給藥后450min內(nèi)后腿靜脈取血，給藥7d后，相同劑量自身交叉給藥，于上述相同時(shí)間點(diǎn)取血，用高效液相色譜法測(cè)定血漿中羅格列酮濃度；經(jīng)DAS 2.0軟件處理，計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果：在相同劑量下，羅格列酮鈉腸溶膠囊與其普通膠囊的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)分別為AUC0～∞：（119.662±8.451）、（118.493±15.325）mg·min·L－1，t1/2Ka：（101.548±6.526）、（39.702±26.293）min，cmax：（0.359±0.035）、（0.807±0.208）mg·L－1；與普通膠囊比較，腸溶膠囊的AUC0～∞無(wú)顯著性差異，t1/2Ka明顯延長(zhǎng)、cmax明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論：與普通膠囊比較，羅格列酮鈉腸溶制劑與其生物等效且具有明顯的緩釋特征。

羅格列酮鈉；腸溶膠囊；普通膠囊；藥動(dòng)學(xué)；犬；生物等效性

羅格列酮是噻唑烷二酮類藥，其以過(guò)氧化物酶——增殖體活化受體γ（PPARγ）為作用靶點(diǎn)的治療2型糖尿病的新型藥物，其通過(guò)提高骨骼肌和脂肪對(duì)葡萄糖的吸收以及降低肝糖的輸出，來(lái)發(fā)揮胰島素的敏感作用，達(dá)到對(duì)糖尿病患者血糖的控制作用[1]。羅格列酮鈉片（商品名：太羅）是我國(guó)自行研究開發(fā)的、國(guó)內(nèi)唯一擁有完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的抗糖尿病新藥，其通過(guò)放大胰島素的降糖作用，減少胰島素抵抗，更好地“復(fù)活”自身胰島素。但羅格列酮鈉呈堿性，且其普通片劑或膠囊在胃中崩解后又轉(zhuǎn)變成了羅格列酮或其鹽酸鹽，并不利于其吸收。為此，重慶醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院研發(fā)了其腸溶膠囊，在本文中，通過(guò)以羅格列酮鈉的普通膠囊為參比制劑，采用文獻(xiàn)[2，3]方法建立血漿中羅格列酮的高效液相色譜分析方法，對(duì)犬體內(nèi)的羅格列酮鈉腸溶膠囊的藥動(dòng)學(xué)特征和生物利用度進(jìn)行研究，為進(jìn)一步完善該劑型以及開發(fā)新的藥物提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

1100 型高效液相色譜儀（美國(guó)Aglient公司）；GL-88B型混勻器（江西醫(yī)療器械廠）；R200D電子天平（北京塞多利斯天平有限公司）；HS-120D超聲處理器（上海新芝生物技術(shù)研究所）；Anke TGL-16G離心機(jī)（上海醫(yī)療器械廠）。

1.2 試藥

羅格列酮鈉片（太極集團(tuán)重慶涪陵制藥廠有限公司，批號(hào)：66070001，規(guī)格：每片4mg）；羅格列酮對(duì)照品（北京高盟化工有限公司，批號(hào)：070911，含量：99.9%）；羅格列酮鈉普通膠囊（取羅格列酮鈉片研碎，以4號(hào)空心膠囊以每粒4mg的劑量灌裝，打光后即得）；羅格列酮鈉腸溶膠囊（自制，規(guī)格：每粒4mg）；乙二胺四乙酸（EDTA）、醋酸鈉、冰醋酸（分析純，重慶川東化工有限公司化學(xué)試劑廠）；乙腈、甲醇（色譜純，江蘇漢邦有限公司）；戊巴比妥鈉（分析純，中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司）。

1.3 動(dòng)物

家犬6只，♀♂各半，體重8～12kg，月齡10～12個(gè)月，由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SYXK（渝）2007-0001，實(shí)驗(yàn)前2周進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[4，5]

色譜柱：Lichrospher C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：0.01mol·L－1的醋酸鈉緩沖溶液（醋酸調(diào)pH為6.0）-甲醇（35∶65）；流速：1mL·min－1；柱溫：35℃；熒光檢測(cè)激發(fā)波長(zhǎng)：250nm ；發(fā)射波長(zhǎng)：370nm；進(jìn)樣量：100μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品貯備液：精密稱取羅格列酮對(duì)照品95.58mg，置于100mL容量瓶中，加乙腈超聲處理使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液1mL，置于25mL容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻。再精密量取1mL，置于10mL的容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，得濃度為3.8232μg·mL－1的溶液，即得，貯存于4℃冰箱備用。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)工作液：精密量取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液1mL，加3mL乙腈稀釋后，搖勻，得濃度為0.9558μg·mL－1的溶液，貯存于4℃冰箱中備用。

2.3 樣品處理

將血漿樣品200μL、乙腈400μL，同置于1.5mL具塞離心試管，混勻3min，15000r·min－1離心15min，將上清液轉(zhuǎn)入另一具塞離心試管內(nèi)，相同條件下再離心5min，取上清液100μL注入液相色譜儀，記錄色譜，以外標(biāo)法進(jìn)行定量分析。

2.4 含量測(cè)定方法學(xué)研究

取♂家犬1只，用3%戊巴比妥鈉1mL·kg－1麻醉，于后腿靜脈取血，每1mL加入50mmol·L－1EDTA 0.1mL抗凝，轉(zhuǎn)入離心管中，3000r·min－1離心5min，取血漿于具塞玻璃試管中，置于－20℃冰箱中備用，即為空白血漿。

2.4.1 專屬性考察。精密量取標(biāo)準(zhǔn)工作液0.1mL，加醋酸鈉緩沖液0.2mL、乙腈0.3mL，混勻后，精密量取該溶液100μL注入液相色譜儀；取空白血漿0.2mL，加乙腈0.4mL，按“2.3”項(xiàng)下方法處理，取上清液進(jìn)樣；取犬灌服羅格列酮普通膠囊190min后的血漿，處理后進(jìn)樣分析，記錄色譜。結(jié)果顯示，空白血漿在羅格列酮對(duì)照品出峰處無(wú)色譜峰，血漿樣品溶液的主峰出峰時(shí)間與對(duì)照品一致，說(shuō)明空白血漿不會(huì)干擾羅格列酮血漿樣品的測(cè)定。高效液相色譜詳見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.對(duì)照品；B.空白血漿；C.樣品血漿；1.羅格列酮Fig1 HPLC chromatogramsA.reference substance；B.blank plasma；C.sample plasma；1.rosiglitazone

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。精密量取對(duì)照品貯備液適量，分別置于0.2mL的空白血漿中，加乙腈稀釋，制備成濃度分別為0.01991、0.07965、0.15930、0.47790、0.63720、1.27440、1.91160μg·mL－1的血漿樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣分析，記錄色譜。以濃度（c）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程：A＝2523.7c+23.391（r＝0.99945），結(jié)果表明，羅格列酮檢測(cè)濃度在0.01991～1.91160μg·mL－1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4.3 靈敏度考察。取對(duì)照品貯備液適量，分別稀釋成不同濃度溶液，加入至空白血漿中，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣分析。結(jié)果表明，羅格列酮最低檢測(cè)限（S/N＞2）為0.125ng。

2.4.4 回收率與精密度試驗(yàn)。分別取標(biāo)準(zhǔn)工作液適量，置于0.2mL空白血漿中，加乙腈稀釋，制備成濃度分別為0.039825、0.1593、0.6372μg·mL－1的樣品血漿，然后按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣分析，以醋酸鈉緩沖液稀釋的標(biāo)準(zhǔn)工作液為對(duì)照，分別計(jì)算回收率；另取回收率試驗(yàn)中高、中、低3種溶液各1份，每天進(jìn)樣5次，連續(xù)進(jìn)樣5d，同法計(jì)算日內(nèi)和日間精密度，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率與精密度試驗(yàn)結(jié)果Tab1 Results of recovery and precision tests

2.5 藥動(dòng)學(xué)研究

取犬6只，隨機(jī)分為2組，每組3只，給藥前犬禁食12h，用3%戊巴比妥鈉1mL·kg－1麻醉，灌胃給予羅格列酮鈉腸溶膠囊或羅格列酮鈉普通膠囊4mg，于給藥前及給藥后30、50、80、100、130、150、190、230、270、310、360、400、450min分別從后腿靜脈取血，給藥7d后，同劑量自身交叉給藥，于上述相同時(shí)間點(diǎn)取血，加入EDTA抗凝，轉(zhuǎn)入離心管中，3000r·min－1離心5min，取血漿0.5mL于試管中，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣分析，記錄色譜，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)血藥濃度，采用DAS2.0藥動(dòng)學(xué)軟件進(jìn)行自動(dòng)擬合處理。由于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中有2只犬?dāng)?shù)據(jù)未獲得，因此文中只用了4只犬的血藥數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。2種制劑在犬體內(nèi)的藥-時(shí)曲線詳見(jiàn)圖2，藥動(dòng)學(xué)參數(shù)詳見(jiàn)表2。

圖22 種制劑在犬體內(nèi)的藥-時(shí)曲線Fig2 Plasma concentration-time curves of 2kinds of preparations in dogs

表2 2 種制劑在犬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（±s，n＝4）Tab2 Pharmacokinetic parameters of 2kinds of preparations in dogs（±s，n＝4）

表2 2 種制劑在犬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（±s，n＝4）Tab2 Pharmacokinetic parameters of 2kinds of preparations in dogs（±s，n＝4）

與普通膠囊比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.capsule：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

參數(shù)Ke/min－1 Ka/min－1 V1/F/L·kg－1 t1/2Ka/min tmax/min CL/F/mL·min－1·kg－1 cmax/μg·mL－1 AUC0～450min/μg·min·mL－1 AUC0～∞/μg·min·mL－1普通膠囊0.013±0.0040.034±0.0390.355±0.06639.702±26.293200±205±10.621±0.264103.66±16.839118.493±15.325腸溶膠囊0.006±0.001＊0.007±0.001＊＊0.679±0.025101.548±6.526＊＊260±20＊4±10.359±0.035＊＊102.716±3.764119.662±8.451

由表2可見(jiàn)，與普通膠囊比較，腸溶膠囊的Ka、Ke、cmax明顯降低，t1/2Ka、tmax明顯延長(zhǎng)（P＜0.05或P＜0.01），AUC0～450min、AUC0～∞無(wú)顯著性差異。

2.6 生物等效性分析

在相同劑量下，與普通膠囊 AUC0～450min、AUC0～∞比較，腸溶膠囊的相對(duì)生物利用度為（90.4±8.4）%和（100.9±14.4）%，通過(guò)三因素方差分析（周期、制劑、個(gè)體），結(jié)果顯示，在制劑間、周期間無(wú)明顯差異，而個(gè)體間存在差異，這可能是由于個(gè)體差異或操作誤差造成。并在此基礎(chǔ)上對(duì)AUC0～450min進(jìn)行雙單側(cè)檢驗(yàn)，結(jié)果表明，腸溶膠囊與普通膠囊AUC0～∞的比值90%置信區(qū)間為83.3%～97.5%，在80%～125%內(nèi)，各參數(shù)與等效性檢驗(yàn)的低限及高限比較以及群體等效性（PBE）分析顯示均合格，說(shuō)明了2種制劑具有生物等效性。

3 討論

有研究[2]表明，麻醉藥戊巴比妥鈉對(duì)羅格列酮藥動(dòng)學(xué)沒(méi)有影響。在本次研究中，將羅格列酮鈉的普通制劑改成腸溶制劑后，可以減少其堿性鈉鹽對(duì)胃黏膜的刺激以及胃環(huán)境的破壞，同時(shí)，也避免了羅格列酮鈉轉(zhuǎn)變成羅格列酮或其鹽酸鹽，有利于藥物的吸收[6～9]。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可推知，羅格列酮鈉的腸溶制劑有明顯的緩釋特征，在一定程度上避免了血藥濃度的峰值和谷值，延長(zhǎng)了藥物作用時(shí)間，使血藥濃度更加平穩(wěn)，也減少血藥濃度的峰值可能帶來(lái)的噻唑烷二酮類藥物的相關(guān)副作用，提高了患者的順應(yīng)性，適合長(zhǎng)期服用。本文可在某種程度上給臨床合理用藥提供一定的指導(dǎo)，但動(dòng)物和人體對(duì)該制劑的吸收可能存在差異，因此，還需要對(duì)該制劑進(jìn)行更深入的考察和研究。

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Bioequivalence of 2Kinds of Rosiglitazone Sodium Preparations in Dogs

HU Si-xing，F(xiàn)ANG Da-shu，ZHANG Jian，LI Jing-ke，ZHOU Hong-rui，HU Xiang-nan
（School of Pharmacy，Chongqing Medical University，Chongqing 400016，China）

OBJECTIVE：To compare pharmacokinetic characteristics and bioequivalence of Rosiglitazone sodium enteric-release capsule and Rosiglitazone sodium capsule in dogs.METHODS：6dogs were divided into two groups.Both groups were given Rosiglitazone sodium enteric-release capsule or Rosiglitazone sodium capsule 4mg respectively in randomized cross-over study.Blood samples of hind legs vein were collected before administration and within 450min after administration.The plasma concentration of rosiglitazone was measured by HPLC.The pharmacokinetic parameters of rosiglitazone were calculated using DAS 2.0software.RESULTS：The pharmacokinetic parameters of same dosage of Rosiglitazone sodium enteric-release capsules vs.Rosiglitazone sodium capsules were as follows：AUC0～∞：（119.662±8.451）mg·min·L－1vs.（118.493±15.325）mg·min·L－1；t1/2Ka：（101.548±6.526）min vs.（39.702±26.293）min；cmax：（0.359±0.035）mg·L－1vs.（0.807±0.208）mg·L－1.Compared with normal capsule，AUC0～∞of enteric-release capsule had no significant difference，t1/2Kaextended andcmaxdecreased significantly（P＜0.05orP＜0.01）.CONCLUSION：Rosiglitazone sodium enteric-release capsules and common capsule are bioequivalente and characterized with sustained-release profile.

Rosiglitazone sodium；Enteric-release capsule；Common capsule；Pharmacokinetics；Dog；Bioequivalence

R969；R587.1

A

1001-0408（2011）17-1556-03

Δ重慶自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2006BB5286）

＊碩士研究生。研究方向：藥物化學(xué)。E-mail：husixing051@163.com

#通訊作者：副教授。研究方向：藥物化學(xué)。電話：023-66729212。E-mail：huxiangnan@yahoo.com.cn

2011-01-13

2011-02-25）