高效液相色譜法測定骨傷靈膠囊中芍藥苷含量

韓映晨，金美花

(吉林省延邊朝鮮族自治州食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 延吉 133000)

高效液相色譜法測定骨傷靈膠囊中芍藥苷含量

韓映晨，金美花

(吉林省延邊朝鮮族自治州食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 延吉 133000)

目的提高骨傷靈膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法色譜柱為DikmaC18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈－水(17∶83)，流速0.8 mL/min，柱溫40℃。結(jié)果芍藥苷質(zhì)量濃度在10.24～51.20 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.999 7)，平均回收率為99.11%，RSD=0.6%(n=6)。結(jié)論高效液相色譜法快速、靈敏、準(zhǔn)確、專屬，可作為骨傷靈膠囊的質(zhì)量控制方法。

骨傷靈膠囊;高效液相色譜法;芍藥苷

骨傷靈膠囊由當(dāng)歸、茯苓、熟地、白芍、山萸肉、牛膝、川斷、威靈仙、伸筋草、合歡皮、澤瀉、黃芪、川芎、鹿角膠組方，具有補(bǔ)益肝腎、舒筋活絡(luò)之功能，用于各種骨折后期及外傷后期的功能恢復(fù)，肌肉萎縮，骨質(zhì)增生，頸、腰椎病，腰椎間盤突出癥，腱鞘炎，神經(jīng)損傷等。本制劑原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定方法，為有效控制該制劑質(zhì)量，筆者用高效液相色譜法測定其芍藥苷含量，報(bào)道如下。

1 儀器與試劑

Younglin型高效液相色譜儀;KQ－200KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器;Metterar 261型電子天平。芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所);骨傷靈膠囊(吉林省敦化市中醫(yī)院制劑室，批號為20090101);乙腈(色譜純)，水(超純水)，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Dikma C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈 － 水(17 ∶83);流速:0.8 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL;柱溫:40℃;檢測波長:230 nm。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2 500，色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

精密稱取芍藥苷對照品適量，加乙醇制成每1 mL含50 μg芍藥苷的對照品溶液。取樣品內(nèi)容物2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理20 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得供試品溶液。取不含白芍的陰性樣品，同法制得陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:精密吸取對照品貯備 液 (0.256 g/L)0.4，0.6，0.8，1.0 1.5，2.0 mL，分別置 10 mL 量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密吸取各對照品溶液5 μL，分別注入液相色譜儀，測定峰面積。以芍藥苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為 Y=0.059 6 X－0.829 8，r=0.999 7(n=6)，芍藥苷進(jìn)樣量在 10.24 ～51.20 μg 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密吸取供試品(批號為20090101)溶液10 μL和對照品溶液5 μL，分別重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果供試品和對照品溶液中芍藥苷峰面積 RSD分別為0.8%和0.7%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批(批號為20090101)樣品6份，分別精密稱定，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定芍藥苷含量。結(jié)果芍藥苷含量的 RSD=1.0%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一(批號為20090101)供試品溶液，分別于0，2，4，6，8 h 時(shí)進(jìn)樣測定峰面積。結(jié)果的 RSD=0.9%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取己知含量的樣品(批號為20090101，含量為0.256 mg/粒)，準(zhǔn)確加入一定量的芍藥苷對照品，照供試品溶液制備方法制備溶液，依法測定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品(吉林省敦化市中醫(yī)院制劑室)，依法測定含量，結(jié)果見表2。

3 討論

參照2005年版《中國藥典(一部)》方法，比較了甲醇和稀乙醇兩種溶劑，以過濾時(shí)的難易程度和所得色譜峰的情況及回收率測定結(jié)果評判，結(jié)果乙醇的提取效果較好。取樣品2 g，考察不同超聲時(shí)間(20，30，40 min)的提取效果，結(jié)果3種時(shí)間的提取效果差別不大，故將超聲提取時(shí)間定為20 min。取一定量的芍藥苷對照品，用稀乙醇溶解，照紫外－可見分光光度法[1]，在200～300 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在232 nm波長處有最大吸收峰，且在該波長處其他雜質(zhì)干擾少，滿足含量測定的要求，故選230 nm為測定波長。選擇流動(dòng)相時(shí)，參考了2005年版《中國藥典(一部)》中的芍藥苷含量測定[1]。比較了 3 種比例(15 ∶85，16 ∶84，17 ∶83)的乙腈 － 水，結(jié)果采用乙腈－水(17∶83)時(shí)分離效果理想，出峰時(shí)間適宜，峰形對稱。

白芍為骨傷靈膠囊的主要藥材之一，其主要活性成分為芍藥苷，故選芍藥苷為含量測定指標(biāo)。供試品溶液圖譜中最高峰為芍藥苷主峰，和陰性樣品比較時(shí)須注意其位置的不同。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，高效液相色譜法準(zhǔn)確、快速、專屬，可用于骨傷靈膠囊的含量測定和質(zhì)量控制。

表2 樣品含量測定結(jié)果(mg/粒)

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:384.

R284.1;R286.0

A

1006－4931(2011)10－0040－01

2010－07－22;

2010－11－15)