毛細管氣相色譜法測定保健食品、中藥材中的五氯硝基苯殘留

(山東省疾病控制中心，濟南 250014)

五氯硝基苯(PCNB，Quintozene)是一種專用于種子、土壤消毒的有機氯殺菌劑,其化學性質穩定,高殘留性和脂溶性嚴重污染環境并危害人類的健康。美國和日本對該農藥在食品中殘留均規定了限量標準。歐盟規定中藥材中的最大殘留限量為0.6 mg/kg,中國為0.1 mg/kg。我國現行檢測標準GB/T 16341-1996[1]和GB/T 5009.136-2003[2]使用填充柱色譜分離五氯硝基苯，受六六六等組分干擾嚴重，現行檢測標準GB/T 5009.19-2008[3]使用凝膠柱層析法凈化樣液有操作繁瑣、成本高等問題。筆者參照文獻[4-6]及利用現成的有機氯農藥殘留量的檢測方法建立了保健食品、中藥材中的五氯硝基苯殘留分析的毛細管氣相色譜測定方法，并用此方法對2009年6月至2010年7月間部分保健食品及中藥材進行了五氯硝基苯殘留分析。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：CP3800型，包括63Ni電子捕獲檢測器，STAR V6.2色譜工作站，美國Varian公司；

超聲波清洗儀：AS3120A型，天津奧特賽恩斯儀器有限公司；

旋轉蒸發儀：SENCO-R型，上海申生科技有限公司；

高速均質器：IKA-T18 BS型,德國IKA公司；

離心機：80-2型,上海醫療器械手術離心機廠；

正己烷：經氣相色譜確認符合農藥殘留檢測的要求；

丙酮、異辛烷、無水硫酸鈉、氯化鈉：分析純；

濃硫酸：優級純；

五氯硝基苯標準品：含量大于99%，美國Accustandard公司；

五氯硝基苯標準溶液:準確稱取五氯硝基苯0.010 0 g，用異辛烷溶解，轉入100 mL容量瓶中并用異辛烷定容，得到濃度為100 μg/mL的標準儲備液，將儲備液稀釋100倍，配成濃度為1 μg/mL的標準溶液；

1.2 實驗樣品

樣品為2009、2010年本實驗室日常檢測的部分保健食品及中藥材，其中保健食品36份、中藥材20份。

1.3 樣品處理和樣液凈化

試樣處理:取試樣置于組織搗碎機杯中粉碎過380 μm(40目)篩，精密稱取 5 g，加入正己烷30 mL，放置30 min后超聲提取10 min，過濾，濾液移入250 mL分液漏斗中，殘渣用正己烷提取2次，每次15 mL，合并有機相液，加入20 g/L硫酸鈉水溶液50 mL，充分振搖，靜止分層，棄下層液水相。上層溶液通過無水硫酸鈉，濾于梨形瓶中，于旋轉蒸發儀上濃縮后定容至5.0 mL。

樣液凈化:準確吸取樣品提取液5.0 mL，加入1.0 mL濃硫酸，振搖1 min，以2 500 r/min離心15 min，取上清液，供氣相色譜分析用。

1.4 色譜條件與色譜圖

色譜柱:HP-5型毛細柱(30 m×0.32 mm，0.25 μm，美國安捷倫公司)；柱溫程序：初溫90℃保持2 min，以40℃/min升溫至170℃，保持1 min，以5℃/min升溫至230℃保持9 min；進樣口溫度：260℃，檢測器溫度：300℃；載氣：高純氮，流量2.0 mL/min，尾吹28 mL/min；進樣量為1.0 μL，分流不分流進樣，分流比1∶100；保留時間定性，外標法定量；組分峰保留時間9.36 min。五氯硝基苯標準品色譜圖、檢出五氯硝基苯殘留樣品色譜圖分別見圖1、圖2。

圖1 五氯硝基苯標準品色譜圖

圖2 檢出五氯硝基苯殘留樣品色譜圖

2 結果與討論

2.1 色譜柱的選擇

本研究綜合了文獻[1-3，7]的技術特點，參照文獻[4-6],利用山東省疾病控制中心實驗室現行的六六六和DDT農藥殘留分析條件及弱極性毛細管柱HP-5與文獻[1，2]國家標準使用的填充柱相比分離效率、排除雜質干擾能力明顯提高,可解決五氯硝基苯與γ-666用填充柱難以分離的問題。五氯硝基苯、六六六、滴滴涕農藥混合標準樣色譜圖見圖3。由圖3可知，HP-5毛細管柱能滿足同時檢測保健食品、中藥材中五氯硝基苯、六六六、DDT殘留的分析要求。

圖3 五氯硝基苯、六六六、滴滴涕農藥混合標準樣品色譜圖

2.2 樣品處理、凈化方法選擇

基于五氯硝基苯不溶于水,溶于有機溶劑,化學性質穩定,不易揮發、氧化和分解,也不易受陽光和酸堿影響的特點,采用具有強氧化性的濃硫酸進行凈化,以排除大量雜質對檢測的影響，解決了文獻[3]使用的凝膠柱層析法凈化樣液操作繁瑣的問題,同時節省了成本。用硫酸凈化在離心管中進行，樣品損失少，凈化簡便、高效。當樣液成分復雜、顏色較深、色素和雜質不易去除時可重復磺化一次。樣液曾嘗試用過Florisil硅藻土小柱凈化，回收率為89%～96.7%與硫酸處理相近，但因小柱成本較高、來源困難而棄用。

2.3 標準曲線與檢出限

精密稱取一定量的五氯硝基苯標準品，用異辛烷溶解并逐步稀釋成0.005、0.010、0.020、0.050、0.100 μg/mL的標準品溶液，按1.4色譜條件分析，測定峰面積Y，對峰面積和五氯硝基苯濃度X進行線性回歸，得線性方程為Y=2 081.1X-1.58，r=0.999 6，線性范圍為0.005～0.10 μg/mL。以陰性樣品北沙參中添加五氯硝基苯0.005、0.002、0.001、0.000 6 mg/kg,按1.3方法提取、凈化，按1.4色譜條件進樣分析。以取5 g樣品定容5 mL計，五氯硝基苯的檢出限為0.000 6 mg/kg(S/N=3)。

2.4 回收試驗

采用標準添加法分別進行回收試驗。取適量陰性北沙參樣品加標0.02 mg/kg和0.05 mg/kg兩個水平，混勻后稱取5 g左右，按1.3提取、凈化,在1.4色譜條件下進樣分析,計算回收率，結果見表1。

表1 回收率試驗結果

0.05 mg/kg和0.02 mg/kg兩水平回收率范圍分別為93.0%和94.5%。

2.5 精密度試驗

取陰性樣品搗碎加標配成濃度為0.020、0.10 mg/kg的樣品，混勻后取5 g左右，按1.3處理、凈化，按1.4條件測定，結果見表2。

表2 精密度試驗結果

2.6 方法應用

用本方法分別對2009年、2010年山東省內日常檢測的部分保健食品及中藥材進行五氯硝基苯殘留分析，56份樣品有10份檢出，五氯硝基苯殘留最高的一份樣品為人參海狗丸(0.066 mg/kg)，檢測結果見表3。

表3 部分保健食品及中藥材五氯硝基苯檢測結果

3 結語

毛細管氣相色譜法可對保健食品、中藥材中五氯硝基苯殘留進行檢測,其分析的科學性和可操作性均優于國內外現行標準方法,體現了簡便，高效，靈敏度高，準確度、重現性好等特點，方法具有較高的實用價值。

[1] GB/T 16341-1996 食品中五氯硝基苯殘留量的測定[S].

[2] GB/T 5009.136-2003 植物性食品中五氯硝基苯殘留量的測定[S].

[3] GB/T 5009.19-2008 食品中有機氯農藥多組分殘留量的測定[S].

[4] 李晶，李晶，董豐收，等.基質固相分散萃取-氣相色譜法同時檢測人參中五氯硝基苯及其代謝物殘留[J].農業環境科學學報，2009,28(1):216-220.

[5] 宋家玉，李澤國，王大衛，等.毛細管氣相色譜法測定食品、中藥中的有機氯農藥[J].化學分析計量，2006,15(6):8-10.

[6] 黃衛平,唐紅芳，阮征.GC法檢測浙八味藥材中有機氯農藥的殘留[J].華西藥學雜志，2008,23(5)：590-591.

[7] GB/T 5009.146-2003 植物性食品中有機氯和擬除蟲菊酯類農藥多種殘留的測定[S].