基質固相分散-液質聯用法測定雞肉中磺胺和氯霉素的殘留

王凌云

(佛山市農產品質量安全監督檢測中心，佛山 528000)

磺胺類藥物(SAs)和氯霉素(CAP)的殘留對人類具有嚴重的毒副作用，可引起癌癥、畸形、抗藥性及某些中毒現象。美國、歐盟等已明文規定禁止在食品工業中使用該類藥物[1]。中華人民共和國農業部2002年235號公告規定動物性食品中SAs總量不得超過0.1 mg/kg ；氯霉素及其鹽、酯在所有可食組織中不得檢出。目前國內檢測磺胺類藥物和氯霉素的方法主要有酶聯免疫法、高效液相色譜法、氣相色譜法、液相色譜-質譜法[2-5]。上述方法存在溶劑用量大、操作繁瑣及分析對象單一等缺點。筆者采用基質固相分散技術實現了磺胺和氯霉素的同時提取凈化，有效地縮短了實驗時間，具有操作簡單快捷、溶劑用量少等特點，可進行大批量分析。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

超高效液相色譜-串聯質譜儀：Quattro Premier XE型，美國Waters公司；

磺胺嘧啶(SD)、磺胺二甲基嘧啶(SM2)、磺胺甲惡唑(SMZ)、磺胺間甲氧嘧啶(SMM)、磺胺甲氧嗪(SMP)、磺胺喹惡啉(SQ)、磺胺地索辛(SMZ) 、氯霉素(CAP)：純度均大于97.5%，德國Dr．Ehrenstorfer公司；

乙腈、甲酸、乙酸乙酯、乙酸銨：色譜純；

實驗用水為超純水。

1.2 標準溶液配制

取適量的標準品分別用乙腈配制成質量濃度為100 μg/mL的單標儲備溶液，再將其配制成10 μg/mL (SAs)和0.5 μg/mL(CAP)的混合標準工作液，于4℃下避光保存。

1.3 樣品提取

取100 g雞肉樣品于組織搗碎機中打碎，準確稱取0.5 g(精確到0.01 g)置于玻璃研缽中，加入2.0 g C18顆粒研磨均勻至5 mL注射器中(底部裝有脫脂棉)，壓實，加蓋一層脫脂棉。用10 mL乙腈少量多次洗滌研缽和研錘，洗液轉移上柱，控制流速約為1 mL/min，收集流出液。將洗脫液在50℃下減壓蒸發至干，殘渣用2 mL流動相溶解，過0.2 μm微孔濾膜，濾液供UPLC-MS-MS分析。

1.4 基質添加標準曲線制作

稱取5份0.5 g陰性試樣(精確到0.01 g)，分別加入標準工作液2、10、20、40、100 μL，余下步驟同1.3樣品提取。

1.5 色譜條件

色譜柱： BEH C18柱(2.1 mm×50 mm，1.7 μm)；柱溫:40℃；進樣量:10 μL。

正離子模式下的流動相：A相為0.1%甲酸乙腈溶液，B相為0.5 mmol/L乙酸銨-0.1%甲酸水溶液。梯度洗脫程序見表1。

表1 正離子模式下梯度洗脫程序

負離子模式下的流動相：A相為0.1%甲酸乙腈溶液，B相為水溶液；梯度洗脫程序見表2。

表2 負離子模式下梯度洗脫程序

1.6 質譜條件

電噴霧電離源(ESI)：磺胺采用正離子模式，氯霉素采用負離子模式。正離子模式下，毛細管電壓：3.2 kV；離子源溫度：105℃；脫溶劑溫度：400℃；脫溶劑氣流量：980 L/h；錐孔反吹氣流量：100 L/h。

負離子模式下，毛細管電壓：1.5 kV；離子源溫度：100℃；脫溶劑溫度：350℃；脫溶劑氣流量：500 L/h；錐孔反吹氣流量：50 L/h。

正負離子分開采集，多反應監測模式下，選擇離子、錐孔電壓及碰撞誘導解離能量參數見表3。

2 結果與討論

2.1 吸附劑的用量

表3 多反應監測分析的質譜參數

注：1)為定量離子。

在0.5 g樣品中分別加入1.0、1.5、2.0、2.5 g C18顆粒，考察C18顆粒吸附劑用量對提取效果的影響。結果表明，樣品質量與吸附劑用量為1∶2、1∶3時，回收率較低且背景值高，說明吸附劑用量不足以將樣品完全分散，不利于分析物從基質中分離；兩者比例為1∶5時，回收率下降，顯示C18顆粒對SAs和CAP的吸附增強，需要更多的洗脫劑；當樣品質量與吸附劑用量為1∶4時，獲得良好的提取效果，回收率為82.1%～90.4%，這與張素霞等[6]以C18顆粒MSPD提取豬肌肉中磺胺類藥物時樣品質量與分散劑用量比為1∶4，奉夏平等[7]以C18顆粒MSPD提取動物源食品中氯霉素時樣品質量與分散劑用量比為1∶4相一致。因此確定C18顆粒的用量為2.0 g。

2.2 洗脫劑的選擇

洗脫劑的種類和用量直接影響分析物的回收率，試驗考察不同體積下乙腈和乙酸乙酯對SAs和CAP的洗脫效果。結果顯示，當乙酸乙酯的體積為10.0 mL時，回收率最高，但SAs的回收率小于65%；乙腈作為洗脫劑在體積達到10.0 mL時獲得滿意的回收率；繼續增加乙腈的用量，回收率趨于平穩，沒有明顯的提高。實驗中還發現，乙酸乙酯的洗脫液較易乳化，需要破乳和脫脂處理。綜合考慮，選擇乙腈作為洗脫劑。

2.3 基質添加標準曲線及其檢出限

在SAs為10～500 ng/mL和CAP為0.5～25 ng/mL濃度范圍內，8種獸藥的峰面積和濃度之間呈良好的線性關系，相關系數均大于0.99。按添加水平SAs為40 μg/kg、CAP為2 μg/kg，定量離子的信噪比(S/N)為3時，方法的檢出限、線性方程和相關系數見表4。

2.4 添加回收試驗

在0.5 g空白雞肉樣品中按SAs為40、100、200 μg/kg，CAP為2、5、10 μg/kg的水平添加標準工作液，每個添加水平對4個樣品平行測定，計算平均回收率和精密度，結果見表5。 由表5可知，8種獸藥的平均回收率為81.6%～106.0%，相對標準偏差為0.6%～7.1%，表明該方法有良好的精密度和準確度，能夠達到痕量分析要求。

表4 磺胺和氯霉素標準曲線線性方程及其檢出限

表5 磺胺和氯霉素在雞肉樣品中的添加回收率(n=4)

3 結語

建立了基質固相分散-超高效液相色譜-串聯質譜同時測定雞肉樣品中磺胺和氯霉素殘留量分析的方法。該方法簡單快捷、準確可靠，溶劑用量少，適用于大批量樣品的定性定量分析，滿足痕量分析要求。

[1] 中國有機質譜學第十二屆全國學術大會論文集.氯霉素和磺胺類藥物的LC-MS/MS分析[C].北京：原子能出版社，2003.

[2] GB/T 21316-2007 動物源性食品中磺胺類藥物殘留量的測定 液相色譜-質譜/質譜法[S].

[3] SN 0208-1993 出口肉中十種磺胺殘留量檢驗方法[S].

[4] GB/T 20756-2006 可食性動物肌肉、肝臟和水產品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法[S].

[5] SN 0341-1995 出口肉及肉制品中氯霉素殘留量檢驗方法[S].

[6] 張素霞,李俊鎖,錢傳范.豬肌肉組織中磺胺類藥物的MSPD凈化和HPLC測定[J].畜牧獸醫學報,1999,30(6):531-535.

[7] 奉夏平,張亮,張卓恒,等. MSPD/PVT-GC/MS測定動物源食品中氯霉素[J].中山大學學報(自然科學版),2005,44(2):65-68.