先天性肥厚性幽門狹窄組織蛋白酶 D的免疫組化研究

劉春義 李玉樓

先天性肥厚性幽門狹窄組織蛋白酶 D的免疫組化研究

劉春義 李玉樓

肥厚性幽門狹窄,先天性；組織蛋白酶 D；免疫組化

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院 2003至 2009年 42例 CHPS患兒為CHPS組均為足月產兒,男 38例,女 4例；年齡 16～121 d,平均年齡 29.5 d。均于幽門環肌切開術中幽門肌層 1條,包括漿膜、縱行肌、肌間及環形肌。對照組標本 10例,男 9例,女 1例；新生兒 7例,嬰幼兒 3例,均為幽門部正常的術中標本,取材方法同CHPS組,新鮮標本立即固定在 10%甲醛溶液中,組織經過酒精梯度脫水,石蠟包埋成蠟塊。

1.2 免疫組織化學染色 標本經 10%甲醛固定、石蠟包埋,連續切片,切片厚 4μm,行 CAD免疫組化染色。染色步驟采用非生物素兩步法,用已知陽性的神經節細胞瘤作為陽性對照片,用 PBS代替一抗作為陰性對照片,DAB顯色。一抗、二抗及DAB顯色劑均購自上海越研生物科技有限公司。

1.3 免疫組化染色結果分析 采用盲法,半定量分析方法分析。

2 結果

2.1 2組幽門部肌層及肌間 CAD陽性細胞比較 見表 1。

表1 2組幽門部肌層及肌間 CAD陽性細胞比較

2.2 正常幽門肌病理表現 (1)對照組新生兒與嬰兒標本相比較,CAD陽性細胞數量分布無明顯差異,且無嚴重不成熟細胞。(2)肌間神經從可見大量 CAD陽性節細胞,染色較深。

2.3 CHPS患兒的幽門肌病理表現 (1)環形肌與肌間均可見CAD抗體陽性細胞,與對照組比較,有明顯減少,著色較淺的不成熟細胞,無明顯差異。(2)縱行肌內CAD陽性細胞與對照組比較數量差異較小。

3 討論

CHPS是嬰兒器質性嘔吐的最常見原因,是一種預后較好的先天性消化道畸形。其病因也有眾多學說,如遺傳因素、體液控制異常、幽門神經分布異常、生長因子異常等。但它的病因至今并不十分清楚。近年來有人提出神經節細胞細胞異常與 CHPS的形成有一定關系。CAD是一種天冬氨酸酶,屬于溶酶體酸性蛋白酶家族,其在細胞內蛋白質的分解代謝中起著關鍵作用,可催化許多神經肽的降解,如P物質、生長抑素、B脂蛋白和血管緊張素原。CAD是腸神經節細胞特異性較高的標志物,對不同成熟程度的神經節細胞表達強度不同,不僅可以特異性標記神經節細胞,而且可以判斷神經節細胞的成熟程度。

本組 42例CHPS患兒幽門部環肌層、肌間及縱肌層各層間均有CAD陽性細胞,但較對照組明顯減少,尤其以環肌層及肌間神經節細胞減少顯著。而且未發現嚴重變性或明顯不成熟神經節細胞。該病病理是幽門壁各層組織均肥厚增大,以環肌層為主。這是由肌纖維增粗和肌束間結締組織增生所致。單位面積內肌纖維數目明顯減少。本組觀察結果提示,該病幽門部腫塊大小與年齡、病程長短有關,病史越長,腫塊越大。這種病理改變是可逆的,經過一定時間,腫塊可逐漸消失而痊愈[1]。

主要從事幽門腸肌層神經叢的研究者發現,神經節細胞直至生后 2～4周才發育成熟,因此,許多學者認為神經細胞發育不良是引起幽門肌肉肥厚的機制,而否定過去幽門神經節細胞變性導致病變的學說,運用組織化學分析法測定幽門神經節細胞內酶的活性；但也有持不同意見者,觀察到幽門狹窄的神經節細胞與胎兒并無相同之處,如神經節細胞發育不良是原因,則早產兒發病應多于足月兒,然而二者并無差異。近年研究認為肽能神經的結構改變和功能不全可能是主要病因之一,通過免疫熒光技術觀察到環肌中含腦啡肽和血管活性腸肽神經纖維數量明顯減少,應用放射免疫法測定組織中 P物質含量減少,由此推測這些肽類神經的變化與發病有關[2]。

本組觀察到,幽門部神經節細胞在不同部位,單位面積內神經節細胞數均減少,差異顯著,尤以環肌層變化更顯著。未發現有神經節細胞分離、空化,等退行性改變。神經節細胞有維持節律等作用,數量明顯減少,而且幽門部神經纖維明顯減少,神經網絡有不同程度異常。有報道卡哈爾間質細胞及神經遞質、突觸也有減少[3]。這些因素可能引起幽門部動力失衡。其具體作用機制有待于進一步研究。該病患兒幽門部神經節細胞明顯減少,所以各種影響幽門部神經組織發育或導致神經節細胞減少的因素可能是構成肥厚性幽門狹窄的因素之一。

1 王練英,劉永煜,李正.先天性肥厚性幽門狹窄病理組織學觀察.中華小兒外科雜志,2000,21:122.

2 Shen ZX,She YX,WangWC,et al.Immunohistochemical study ofpeptidergic nerves in infantile hypertrophic ptloric stenosis.Pediar Surg Int,1900,5:111-113.

3 張海蘭,王練英.先天性肥厚性幽門狹窄卡哈爾間質細胞和突觸的免疫組織化學研究.中華小兒外科雜志,2003,24:200-222.

R 573.6

A

1002-7386(2011)01-0100-02

10.3969/j.issn.1002-7386.2011.01.058

050031 石家莊市,河北省兒童醫院

先天性肥厚性幽門狹窄(CHPS)是嬰兒嘔吐的常見原因,占新生兒消化道畸形的第三位,對于它的病因研究迄今已有100余年,但至今仍不十分清楚,關于肌間神經叢的神經節細胞的研究有矛盾的形態學發現,組織蛋白酶 D(CAD)是腸壁神經節特異性標記物,幽門的正常功能有賴于幽門部神經節功能的完整,通過對幽門部 CAD的研究,進一步探討 CHPS的發病機制。

2010-08-05)