輪狀病毒感染性腹瀉患兒血清中CD4+T細胞相關(guān)細胞因子水平及意義

馬洪剛，王金巖，單風平，呂昌龍*

(1.中國醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院免疫學教研室，遼寧沈陽110001;2.沈陽市兒童醫(yī)院檢驗科，遼寧沈陽110032)

輪狀病毒(RV)是世界范圍內(nèi)兒童嚴重脫水性腹瀉的最重要病原體［1］。每年有近100萬患兒死于本?。?］。但機體感染RV后的免疫病理學機制尚不十分清楚。CD4+T細胞是一群異質(zhì)性細胞亞群組成，主要包括Th1、Th2、Th17及調(diào)節(jié)性T細胞，其通過產(chǎn)生各種細胞因子在炎癥為損傷機制的自身免疫疾病中具有重要作用［3］。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA法)對56例感染早期輪狀病毒腹瀉患兒和30例正常兒童血清中的細胞因子IL-17、IL-6、IFN-γ、IL-4和TGF-β水平進行了檢測，以探討CD4+T細胞相關(guān)細胞因子在兒童輪狀病毒感染性腹瀉疾病早期的變化及可能的免疫病理學意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 一般資料2010年2月至2010年7月沈陽市兒童醫(yī)院消化內(nèi)科患腸道輪狀病毒感染性腹瀉疾病兒童56例，其中男性患兒30例，女性患兒26例，年齡為1～8歲，平均為5.2歲?；純壕?jīng)臨床檢驗科檢測糞便樣品輪狀病毒抗原陽性，符合輪狀病毒感染的臨床診斷標準，并排除其他疾病感染。無菌采取患兒靜脈血液，分離血清樣品，用于細胞因子檢測。采集患兒血液時間為病程4 d內(nèi)，即感染早期。正常對照組為我院兒童保健科的正常體驗兒童30例，年齡為1～8歲，其中男性兒童16例，女性兒童14例，平均5.4歲。2組年齡及性別無統(tǒng)計學差異。

1.1.2 主要試劑IL-17細胞因子ELISA試劑盒購于美國Biotechnology Systems公司;IL-6、IFN-γ、IL-4和TGF-β等細胞因子ELISA試劑盒購于美國R＆D公司。

1.2 方法

1.2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA法)操作步驟按照試劑說明書進行。

1.2.2 統(tǒng)計學處理應用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件包進行分析，數(shù)據(jù)以±S表示，采用t檢驗。

2 結(jié)果

血清中細胞因子IL-17、IL-6、IFN-γ、IL-4和TGF-β的ELISA法檢測結(jié)果見表1。腹瀉組患兒血清中細胞因子IL-17、IL-6、IFN-γ和IL-4與健康對照組比較未見統(tǒng)計學差異，P值均＞0.05。而腹瀉組血清中TGF-β水平則顯著高于對照組(P＜0.05)。

表1 血清中細胞因子水平的ELISA檢測結(jié)果Table 1 The levels of cytokines in sera detected by ELISA

3 討論

自1993年首次研究發(fā)現(xiàn)RV以來，國內(nèi)外對RV病原學、RV感染流行病學及臨床防治方面作了大量研究，但有關(guān)RV致腸炎機體的細胞因子變化特點研究報道較少。細胞因子(CK)是由活化的免疫細胞和多種其他細胞分泌的，具有多種生物學活性，參與調(diào)節(jié)免疫應答的小分子蛋白質(zhì)或多肽，在體內(nèi)形成復雜的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡。當機體受到病原微生物感染時，可因感染因子不同而產(chǎn)生不同種類和不同水平的細胞因子，參與促進或抑制炎癥反應的病理學程度。為此了解RV感染者細胞因子的水平變化，可為弄清該病毒致腸道炎癥反應的病理學機制和應用免疫學機理進行臨床治療提供科學依據(jù)。已有報道試用一些免疫制劑治療RV感染性腸炎具有一定療效，可減輕癥狀，縮短病程［4］。

初始CD4+T細胞接受抗原刺激后，在不同的條件下可分化為不同的T細胞亞群，執(zhí)行不同的生物學功能。在IL-12和IFN-γ誘導下分化為Th1細胞，分泌IFN-γ，促進感染致炎癥性應答;在IL-4的誘導下分化為Th2細胞，分泌IL-4和IL-10，抑制炎癥性應答;在TGF-β和IL-6的共同誘導下分化為Th17，分泌IL-17和IL-6，參與炎癥反應和介導自身免疫性疾病發(fā)生［5］。本實驗結(jié)果顯示，輪狀病毒感染性腹瀉早期患兒血清中IL-17、IL-4、IL-6和IFN-γ的水平與對照組比較未見顯著統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，提示此時尚無明顯針對該病毒的適應性細胞免疫應答發(fā)揮抗病毒作用，這也可能與患兒的適應性免疫應答系統(tǒng)尚未完全發(fā)育成熟有關(guān)。一般規(guī)律為病毒感染后的一周內(nèi)是固有免疫應答主要發(fā)揮抗病毒感染作用，其后適應性免疫應答發(fā)揮作用，清除感染的病毒。本檢測結(jié)果進一步表明輪狀病毒感染性腹瀉早期患兒的抗病毒感染作用可能主要是來自于固有免疫應答。TGF-β是體內(nèi)重要的免疫抑制因子，主要來源于活化的T細胞。TGF-β除發(fā)揮調(diào)節(jié)功能外，還具有促黏膜上皮細胞增殖修復炎癥性潰瘍及與IL-5協(xié)同誘導分泌型IgA合成作用［1］。本研究檢測到患兒血清中TGF-β較對照組相比明顯升高(P＜0.05)，升高的TGF-β可能主要來自于病毒誘導活化的抑制性調(diào)節(jié)性T細胞。血清中的TGF-β水平在一定程度上可能會反映腸道黏膜局部的TGF-β水平，提示輪狀病毒感染性腹瀉早期患兒存在免疫功能紊亂和由于調(diào)節(jié)性T細胞活化所致的免疫失調(diào)。有關(guān)RV病毒感染患兒腸道黏膜局部的免疫分子水平的變化尚有待進一步研究。

［1］ Catherine F，Lionel P，Isabelle P，et al.Oral delivery of homologous and heterologous strains of rot avirus to BALB/c mice induces the same profile of cytokine production by spleen cells［J］.Virology，1998，76(5):244-252.

［2］ Herrmann JE，Chen SC，F(xiàn)ynan EF，et al.DNA vaccines against rotavirus infect ions［J］.Virology，1996，12(Suppl):207-213.

［3］ 張鳳蘊，徐紅薇，任歡.TH17細胞的生物學特性［J］.國際免疫學雜志，2007，30(5):292-295.

［4］ Hammarstrom L.Passive immunity against rotavirus in infants［J］.Acta Paediatr Suppl，1999，88(4):127-132.

［5］ Fikree FF，Azam SI，Berendes HW.Time to focus child survival programmes on the newborn:assessment of levels and causes of infant mortality in rural Pakistan［J］.Bull World Health Organ，2002，80(4):271-276.