紅魚(yú)眼醇提物鎮(zhèn)痛抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究Δ

秦貽強(qiáng)，李 江，蔡小玲（桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科，桂林市541001）

紅魚(yú)眼是大戟科植物無(wú)毛龍眼睛Phyllanthus reticulates Poir.Var.glaber Muell.Arg.或龍眼睛P.reticulates Poir.的干燥莖，具有祛風(fēng)活血、散瘀消腫的功效[1]，為廣西尤其是壯族民間常用藥味。臨床中多采用其復(fù)方內(nèi)服或外用等療法治風(fēng)濕性、類(lèi)風(fēng)濕性、骨性關(guān)節(jié)炎[2，3]。紅魚(yú)眼作為治療風(fēng)濕痹癥的藥物運(yùn)用較廣，但是僅在臨床應(yīng)用方面有報(bào)道，而相關(guān)藥理研究甚少，不利于其安全用藥與進(jìn)一步開(kāi)發(fā)使用。因此，本研究采用相應(yīng)動(dòng)物模型，對(duì)紅魚(yú)眼醇提物的鎮(zhèn)痛、抗炎作用進(jìn)行了探討，以期為臨床用藥提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

R-200型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi公司）；UV2550型紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）；HH-W600型數(shù)顯三用恒溫水浴箱（金壇市科析儀器有限公司）；微量進(jìn)樣器（芬蘭Thermo Finnpipette公司）；BT224S型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

1.2 試藥

紅魚(yú)眼購(gòu)自廣西南寧市中堯藥材市場(chǎng)，經(jīng)桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系天然藥物化學(xué)教研室唐愛(ài)蓮副教授鑒定為真品；吲哚美辛腸溶片（廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)：081108）；鹽酸曲馬多緩釋片（深圳南方盈信制藥有限公司，批號(hào)：20090801）。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)昆明種小鼠150只，♀♂兼半，體重（20±2）g；SPF級(jí)SD大鼠50只，♂，體重（200±20）g，均由桂林醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（桂）2007-0001）。

2 方法與結(jié)果

2.1 醇提物的制備

藥材粉碎為粗粉，采用10倍量75%乙醇水浴回流提取，每次2 h，共提取2次，過(guò)濾后合并濾液，于60℃減壓回收至無(wú)醇味，分別配制成所需濃度的供試液，待用。

2.2 紅魚(yú)眼醇提物對(duì)小鼠熱板法痛閾值的影響

取♀小鼠若干，置于（55±0.5）℃恒溫?zé)岚迳希蕴蚝笞阕鳛橥从X(jué)指標(biāo)，秒表記錄痛閾值，每只小鼠測(cè)定2次，中間間隔3 min，取其均值為正常痛閾值。取正常痛閾值在5～30 s的小鼠50只，隨機(jī)分為模型對(duì)照（生理鹽水20 mL·kg-1）、鹽酸曲馬多（0.04 g·kg-1）和紅魚(yú)眼醇提物高、中、低劑量（30、20、10 g·kg-1）組。ig給藥后，于30、60、120 min分別測(cè)定痛閾值。若測(cè)定中小鼠痛閾值＞30 s，則按照30 s計(jì)算。結(jié)果表明，高、中、低劑量紅魚(yú)眼醇提物均能不同程度顯著提高小鼠對(duì)熱反應(yīng)的痛閾值（P＜0.01或P＜0.05），提示紅魚(yú)眼醇提物對(duì)小鼠由刺激引起的疼痛具有良好的鎮(zhèn)痛作用。紅魚(yú)眼醇提物對(duì)小鼠熱板法痛閾值的影響見(jiàn)表1。

2.3 紅魚(yú)眼醇提物對(duì)小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響

取小鼠50只，♀♂兼半，隨機(jī)分為模型對(duì)照（生理鹽水20mL·kg-1）、吲哚美辛（20 mg·kg-1）和紅魚(yú)眼醇提物高、中、低劑量（30、20、10 g·kg-1）組，每組10只。ig給藥，每天1次，連續(xù)3 d。末次給藥后30 min每只小鼠ip新配制的0.6%醋酸溶液0.1 mL·10 g-1，觀(guān)察并記錄小鼠的扭體潛伏期和15 min內(nèi)扭體反應(yīng)的次數(shù)。結(jié)果表明，僅吲哚美辛組的扭體抑制率與模型對(duì)照組比較差異顯著（P＜0.05），其余各組均無(wú)顯著差異，提示紅魚(yú)眼醇提物對(duì)小鼠ip醋酸引起急性腹膜炎而產(chǎn)生的疼痛無(wú)明顯的鎮(zhèn)痛作用。紅魚(yú)眼醇提物對(duì)小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響見(jiàn)表2。

表1 紅魚(yú)眼醇提物對(duì)小鼠熱板法痛閾值的影響（±s，n＝10）Tab 1 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the pain threshold in hot plate metho（d±s，n＝10）

表1 紅魚(yú)眼醇提物對(duì)小鼠熱板法痛閾值的影響（±s，n＝10）Tab 1 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the pain threshold in hot plate metho（d±s，n＝10）

與模型對(duì)照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.model control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別模型對(duì)照組鹽酸曲馬多組紅魚(yú)眼醇提物低劑量組紅魚(yú)眼醇提物中劑量組紅魚(yú)眼醇提物高劑量組劑量/g·kg-1 120 min 10.7±3.5 13.6±4.4 14.6±4.3 16.0±5.6＊14.7±5.8-0.04 10 20 30給藥前痛閾值/s 14.2±3.4 15.0±4.4 13.3±2.9 14.7±1.8 14.2±3.9給藥后痛閾值/s 30 min 9.7±2.2 18.5±7.2＊＊12.3±2.7＊15.7±2.0＊＊14.7±2.5＊＊60 minimages/BZ_205_394_507_396_507.pngimages/BZ_205_329_530_334_530.png10.7±2.5 14.9±3.6＊14.3±2.8＊14.4±4.0＊8.8±2.0

表2 紅魚(yú)眼醇提物對(duì)小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響（±s，n＝10）Tab 2 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the acetic acid writhing tes（t±s，n＝10）

表2 紅魚(yú)眼醇提物對(duì)小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響（±s，n＝10）Tab 2 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the acetic acid writhing tes（t±s，n＝10）

與模型對(duì)照組比較：＊P＜0.05vs.model control group：＊P＜0.05

組別模型對(duì)照組吲哚美辛組紅魚(yú)眼醇提物低劑量組紅魚(yú)眼醇提物中劑量組紅魚(yú)眼醇提物高劑量組扭體抑制率/%-31.8＊8.8 1.4 8.9劑量/g·kg-1-0.02 10 20 30扭體次數(shù)/次14.8±4.8 10.1±2.8 13.5±3.8 14.6±3.8 13.9±4.5

2.4 紅魚(yú)眼醇提物對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹度的影響

分組、給藥同“2.3”項(xiàng)下方法。ig給藥，每天1次，連續(xù)7 d。末次給藥60 min后，將30 μL二甲苯均勻涂抹于小鼠右耳廓兩面致炎。致炎30 min后，脫頸椎處死小鼠，沿耳廓基線(xiàn)剪下兩耳，并以直徑8 mm打孔器分別在左右耳對(duì)稱(chēng)部位打下圓形耳片，分別用電子天平稱(chēng)重，計(jì)算腫脹度和腫脹抑制率。小鼠耳廓腫脹程度以每鼠左右耳片重量之差的平均值來(lái)表示[腫脹抑制率（%）＝（模型對(duì)照組腫脹度－用藥組腫脹度）/模型對(duì)照組腫脹度×100%]。結(jié)果表明，紅魚(yú)眼高、中劑量組的耳廓腫脹度與模型對(duì)照組比較差異顯著（P＜0.01或P＜0.05），提示紅魚(yú)眼醇提物對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹能起到一定的抗炎作用。紅魚(yú)眼醇提物對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹度的影響見(jiàn)表3。

表3 紅魚(yú)眼醇提物對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹度的影響（±s，n＝10）Tab 3 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the mice ear swelling induced by xylen（e±s，n＝10）

表3 紅魚(yú)眼醇提物對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹度的影響（±s，n＝10）Tab 3 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the mice ear swelling induced by xylen（e±s，n＝10）

與模型對(duì)照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.model control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

抑制率/%-34.01 8.50 11.53 29.37組別模型對(duì)照組吲哚美辛組紅魚(yú)眼醇提物低劑量組紅魚(yú)眼醇提物中劑量組紅魚(yú)眼醇提物高劑量組劑量/g·kg-1-0.02 10 20 30耳廓腫脹度/mg 12.98±1.41 8.57±0.67＊＊11.88±1.36 11.49±1.13＊9.17±0.95＊＊

2.5 紅魚(yú)眼醇提物對(duì)大鼠角叉菜膠致足趾腫脹的影響

取大鼠25只，♂，均分為模型對(duì)照（生理鹽水5 mL·kg-1）、吲哚美辛（0.015 g·kg-1）和紅魚(yú)眼醇提物高、中、低劑量（7.5、5、2.5 mg·kg-1）組。ig給藥，每天1次，連續(xù)3 d。末次給藥后立即于每只大鼠右后足爪部sc 0.1 mL的1%角叉菜膠致炎，分別于致炎前和致炎后1、2、3、4 h用毛細(xì)管放大法測(cè)量右后足容積，以計(jì)算腫脹抑制率[腫脹抑制率（%）＝（模型對(duì)照組腫脹度－給藥組腫脹度）/模型對(duì)照組腫脹度×100%]。結(jié)果表明，高、中、低劑量紅魚(yú)眼醇提物對(duì)大鼠足趾腫脹均有不同程度的抑制作用，高、中劑量紅魚(yú)眼醇提物在60～240 min內(nèi)抑制作用穩(wěn)定，而低劑量紅魚(yú)眼醇提物至180 min后才出現(xiàn)抑制作用，提示紅魚(yú)眼醇提物對(duì)角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的抑制作用時(shí)間較長(zhǎng)。紅魚(yú)眼醇提物對(duì)大鼠角叉菜膠致足趾腫脹的影響見(jiàn)表4。

表4 紅魚(yú)眼醇提物對(duì)大鼠角叉菜膠致足趾腫脹的影響（±s，n＝5）Tab 4 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on rat toe swelling induced by carrageena（n±s，n＝5）

表4 紅魚(yú)眼醇提物對(duì)大鼠角叉菜膠致足趾腫脹的影響（±s，n＝5）Tab 4 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on rat toe swelling induced by carrageena（n±s，n＝5）

與模型對(duì)照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.model control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別模型對(duì)照組吲哚美辛組紅魚(yú)眼醇提物低劑量組紅魚(yú)眼醇提物中劑量組紅魚(yú)眼醇提物高劑量組劑量/g·kg-1注射后不同時(shí)間的足腫脹率/%-0.015 2.5 5.0 7.5正常足容積/mL 1.03±0.02 1.04±0.01 1.01±0.05 1.02±0.01 1.07±0.01 60 min 27.74±6.84 21.24±5.83 26.20±3.46 17.45±2.69＊＊13.99±2.57＊＊120 min 38.12±8.39 21.23±3.10＊＊32.96±4.63 24.13±2.29＊＊27.42±4.97＊180 min 36.81±6.46 14.66±2.22＊＊25.47±3.17＊＊22.0±1.50＊＊25.21±7.60＊240 min 35.18±5.66 11.81±4.59＊＊18.37±2.98＊＊16.67±0.86＊＊20.56±7.35＊

2.6 紅魚(yú)眼醇提物對(duì)大鼠角叉菜膠性炎性滲出液中前列腺素（PG）E2含量的影響[4]

分組、給藥與炎癥復(fù)制同“2.5”項(xiàng)下方法。角叉菜膠致炎4 h后頸椎脫臼處死大鼠，齊踝關(guān)節(jié)剪下炎性足，稱(chēng)重，剝皮，充分剪碎，置于8 mL生理鹽水和2 mL甲醇中浸泡過(guò)夜，10 000 r·min-1離心3 min，取上清液0.6 mL，置于10.0 mL量瓶中，加入0.5 mol·L-1氫氧化鉀-甲醇溶液2 mL，在50℃水浴中異構(gòu)化20 min，放冷至室溫，然后用甲醇定容，搖勻，于278 nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度（A），以每1 g炎性組織相當(dāng)?shù)腁值表示PGE2的含量（A/g足重）。結(jié)果表明，紅魚(yú)眼醇提物高劑量組與模型對(duì)照組比較PGE2含量顯著降低（P＜0.05）。紅魚(yú)眼醇提物對(duì)大鼠角叉菜膠性炎性滲出液中PGE2含量的影響見(jiàn)表5。

表5 紅魚(yú)眼醇提物對(duì)大鼠角叉菜膠性炎性滲出液中PGE2含量的影響（±s，n＝5）Tab 5 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the content of PGE2in the carrageenan induced inflammatory effusion in ra（t±s，n＝5）

表5 紅魚(yú)眼醇提物對(duì)大鼠角叉菜膠性炎性滲出液中PGE2含量的影響（±s，n＝5）Tab 5 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the content of PGE2in the carrageenan induced inflammatory effusion in ra（t±s，n＝5）

與模型對(duì)照組比較：＊P＜0.05vs.model control group：＊P＜0.05

組別模型組吲哚美辛組紅魚(yú)眼醇提物低劑量組紅魚(yú)眼醇提物中劑量組紅魚(yú)眼醇提物高劑量組0.202 1±0.009 9 0.183 4±0.009 2＊0.201 4±0.028 1 0.220 5±0.019 4 0.181 0±0.016 0＊-0.015 2.5 5.0 7.5 1.608 3±0.081 6 1.653 0±0.085 8 1.580 2±0.087 3 1.642 0±0.111 1 1.732 2±0.116 3 0.324 8±0.018 4 0.303 0±0.018 2 0.319 8±0.059 0 0.363 6±0.054 8 0.313 0±0.029 8 PGE2含量/ng·g-1劑量/g·kg-1足重/g A值

3 討論

本研究表明，紅魚(yú)眼醇提物在熱板法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)中，能不同程度提高小鼠的痛閾值，起到一定的鎮(zhèn)痛作用；而抗炎實(shí)驗(yàn)中其不僅能減輕二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹程度，并能不同程度抑制角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠足腫脹反應(yīng)，高劑量作用下還可減少角叉菜膠致炎的鼠足滲出液中PGE2的含量，說(shuō)明其具有一定的抗炎作用，且作用機(jī)制可能與抑制炎性部位PGE2的生成有關(guān)。本研究結(jié)果論證了紅魚(yú)眼傳統(tǒng)功效與現(xiàn)代藥理研究的一致性，可為指導(dǎo)臨床合理用藥，并將其開(kāi)發(fā)成高效、低毒、價(jià)廉、療效確切的具有抗風(fēng)濕作用的新型天然藥物提供理論依據(jù)。因此，進(jìn)一步深入開(kāi)展紅魚(yú)眼藥理學(xué)方面的研究，對(duì)抗風(fēng)濕疾病的治療及其開(kāi)發(fā)利用有著重要意義。

[1] 廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳.廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)（1990年版）[S].南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，1992：52.

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[3] 鐘麗雁，李鳳珍，謝愛(ài)澤.壯藥內(nèi)服加藥?kù)僦委熛リP(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎30例觀(guān)察[J].實(shí)用中醫(yī)藥雜志，2009，25（6）：358.

[4] 崔曉燕，王素霞，侯永利.金銀花提取物的抗炎機(jī)制研究[J].中國(guó)藥房，2007，18（24）：1 861.