三肽囊素對雞血漿蛋白組分及IL-2與IL-6含量的影響

摘要：１４４只１日齡黃羽肉雞隨機分為４組，第７日齡時第Ｉ～ＩＶ組分別注射０、０．００５、０．０１０、０．０３０ｍｇ／ｋｇ劑量的三肽囊素，在１４、３５及５６日齡時每組各取一個重復，取血漿，醋酸纖維薄膜電泳檢測血漿蛋白各組分的比率，放射免疫法檢測血漿ＩＬ－２與ＩＬ－６的含量。結果顯示不同劑量的三肽囊素可提高血漿γ球蛋白水平；對血漿ＩＬ－２的影響呈現前期抑制后期促進的作用；對血漿ＩＬ－６的影響是早期促進，中期抑制，后期又恢復到較高水平。上述結果表明三肽囊素在不同時期通過促進細胞以及體液免疫水平來提高機體的免疫機能。

關鍵詞：三肽囊素；蛋白組分；ＩＬ－２；ＩＬ－６

中圖分類號：Ｓ８５９．７９＋７文獻標識碼：A文章編號：１００７－２７３Ｘ（２０11）01-03-0007-03

三肽囊素（Bｕｒｓｉｎ，ＢＳ）是由Ａｕｄｈｙａ于１９８６年從雞法氏囊抽提液中純化出的一種三肽物質，其氨基酸序列為Ｌｙｓ－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ［１］，具有促進免疫器官的發育以及Ｂ淋巴細胞的分化等作用［２，３］。將一定劑量天然提取的或化學合成的三肽囊素與畜禽疫苗聯合應用，可以提高疫苗的免疫效果［４－６］。因此，三肽囊素有可能作為一種新型的免疫增強劑應用于畜禽疫苗。然而，三肽囊素提高機體免疫機能的機制目前仍不太清楚。為此，本試驗采用化學合成的三肽囊素，研究了不同劑量的三肽囊素對雞的血漿蛋白組分以及血漿中ＩＬ－２和ＩＬ－６含量的影響，旨在探討三肽囊素增強機體免疫機能的機理，為三肽囊素作為一種新型的免疫增強劑應用于畜禽疫苗提供試驗依據。

１材料與方法

１．１試驗動物分組與處理

１４４只體重相近的１日齡黃羽肉雞（購自佛山市南海種雞場）隨機分成４組，每組３６只，每組３個重復，每個重復１２只，雞只自由采食與飲水，２４ｈ光照。第７日齡時第Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ組分別注射０、０．００５、０．０１０、０．０３０ｍｇ／ｋｇ劑量的三肽囊素。雞只在１４、３５及５６日齡時各組隨機取一個重復，頸部采血，分離血漿，－２０℃保存，用于檢測血漿蛋白各組分以及ＩＬ－２與ＩＬ－６的含量。

１．２主要試劑

三肽囊素由上海生物化學研究所提供，純度９９％；ＩＬ－２、ＩＬ－６放射免疫檢測試劑盒購自天津九鼎醫學生物工程公司。

１．３方法

１．３．１血漿蛋白組分測定采用醋酸纖維薄膜電泳方法測定［７］，取血漿樣品５μＬ滴加至經電泳緩沖液充分浸泡的醋酸纖維薄膜，待血漿滲入膜后進行電泳，電泳完畢將膜浸于氨基黑１０Ｂ染色，然后在漂洗液中洗凈，從正極端區分各蛋白條帶依次為白蛋白、α球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白，剪下各蛋白條帶放入試管，白蛋白管內加０．４ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ ６ｍＬ，其余管內各加３ｍＬ，３７℃水浴２０ｍｉｎ，分光光度計檢測ＯＤ６００值，計算血漿中白蛋白、α球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白的比率。

１．３．２血漿ＩＬ－２及ＩＬ－６的測定采用放射免疫法，操作按試劑盒說明書。

１．４數據統計

數據采用ＳＰＳＳ（１７．０）軟件進行方差分析和鄧肯氏新復極差檢驗法（ＤＭＲＴ）進行多重比較，試驗數據采用平均值±標準差（ｘ±Ｓ）表示。

２結果

２．１三肽囊素對雞血漿蛋白組分的影響

由表１可以看出，０．０３０ｍｇ／ｋｇ劑量的三肽囊素在１４日齡時顯著降低血漿白蛋白水平，而在５６日齡時顯著提高血漿白蛋白水平（Ｐ＜０．０５），０．０１０ｍｇ／ｋｇ三肽囊素在３５日齡時顯著降低血漿白蛋白水平

（Ｐ＜０．０５），其他各劑量對血漿白蛋白水平無顯著影響。各劑量三肽囊素５６日齡時均可顯著降低血漿α球蛋白的水平（Ｐ＜０．０５）；在１４日齡時，０．０３０ｍｇ／ｋｇ三肽囊素顯著提高血漿β球蛋白水平，但到３５日齡時，各組血漿β球蛋白無明顯差異；不同劑量三肽囊素均有提高血漿γ球蛋白的趨勢，其中第１４日齡時０．００５與０．０３０ｍｇ／ｋｇ以及３５日齡時０．０１０與０．０３０ｍｇ／ｋｇ劑量組顯著高于對照組（Ｐ＜０．０５）。

２．２三肽囊素對雞血漿ＩＬ－２含量的影響

由表２可以看出，在１４日齡時，中劑量組血漿ＩＬ－２的含量顯著低于對照組（Ｐ＜０．０５），低劑量和高劑量組也低于對照組，但差異不顯著；在３５日齡時，各處理組之間血漿ＩＬ－２的含量差異不顯著；在５６日齡時，低劑量組血漿中ＩＬ－２含量顯著高于對照組（Ｐ＜０．０５），中劑量組和高劑量組也高于對照組，但差異不顯著。

２．３三肽囊素對雞血漿ＩＬ－６含量的影響

由表３可以看出，在１４日齡時，高劑量組血漿ＩＬ－６的含量顯著高于對照組（Ｐ＜０．０５），低劑量和中劑量組也都高于對照組，但差異不顯著；在３５日齡時，高劑量組血漿ＩＬ－６含量顯著低于對照組（Ｐ＜０．０５），低劑量和中劑量組都有下降的趨勢，但與對照組差異不顯著；在５６日齡時，低劑量組血漿ＩＬ－６含量低于其他各處理組，且與中劑量和高劑量組差異顯著（Ｐ＜０．０５），中劑量組和高劑量組與對照組血漿ＩＬ－６含量差異不顯著。

３討論

血漿γ球蛋白在機體的體液免疫中發揮著重要的生理作用，本試驗的結果表明，不同劑量的三肽囊素在整個試驗期均可提高雞的γ球蛋白水平，在１４日齡時，０．００５、０．０１０及０．０３０ｍｇ／ｋｇ劑量的三肽囊素分別使血漿γ球蛋白含量提高了１８．２％、５．０％和１７．７％，而在３５日齡時分別提高１３．９％、２４．０％和２８．４％，而且，在整個試驗過程中，注射各劑量的三肽囊素均可使血漿γ球蛋白較穩定地維持在較高的水平。表明三肽囊素通過提高血漿γ球蛋白水平從而提高機體的體液免疫水平。

白介素（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎｓ，ＩＬ）是一類由各種白細胞產生的細胞因子，在免疫細胞的活化、增殖與分化過程中起著重要的調節作用［８］。ＩＬ－２又名Ｔ細胞生長因子，主要由被抗原或絲裂原激活的ＣＤ４＋Ｔ細胞產生，其主要作用是促進Ｔ淋巴細胞的增殖和分化，對ＮＫ細胞、單核巨噬細胞增殖轉化也有促進作用，其分泌水平高低可以反映機體的免疫功能，特別是細胞免疫功能［９，１０］。ＩＬ－６又稱Ｂ細胞刺激因子，是誘導Ｂ細胞產生抗體的必需因子之一，其分泌水平的高低可以反映機體的體液免疫功能［１１，１２］。從本試驗的結果來看，在試驗的前期（１４ｄ），不同劑量的三肽囊素均降低了血液中ＩＬ－２的水平，其中０．０１０ｍｇ／kｇ劑量組達到了差異顯著水平，表明三肽囊素在試驗前期抑制了機體的細胞免疫功能，這與張德明等的結果一致［１３］，其原因可能是由于機體的負反饋機制，外源性的三肽囊素在一定程度上抑制了機體的細胞免疫功能。而在試驗中（３５ｄ）、后期（５６ｄ），各試驗組ＩＬ－２水平逐漸恢復，至５６日齡時，各試驗組的ＩＬ－２水平均高于對照組，表明三肽囊素促進了機體的細胞免疫功能。而不同劑量三肽囊素對血漿ＩＬ－６的影響則呈現前期升高，中期降低，后期恢復至較高水平的趨勢。綜合分析本試驗的結果，三肽囊素在不同時期通過提高血漿ＩＬ－２及ＩＬ－６以及血漿γ球蛋白水平，進而提高了機體的細胞或體液免疫機能。

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