氣相色譜法測定花生脂肪酸的穩定性分析

摘要：選用固定液為FFAP的石英玻璃毛細管柱，設置合適的載氣柱前壓、分流比及程序升溫，采用氣相色譜法測定花生主要脂肪酸，平行測定的相對標準偏差為0.67％～2.11％，而且主要脂肪酸出峰時間不到10min，只需13min即可完成一次分析。

關鍵詞：氣相色譜法；脂肪酸；穩定性

中圖分類號：Q503；S565.2 文獻標識號：A 文章編號：1001—4942(2010)12—0085—02

油脂中的脂肪酸一般是以甘油酯形式存在，沸點較高，一般采用氣相色譜法進行分離和測定。目前對植物油、魚油、海洋生物的脂肪酸測定已有許多相關文獻。氣相色譜法測定脂肪酸的穩定性是準確判定脂肪酸的關鍵步驟。本試驗根據花生中脂肪酸的主要成分設置了最佳測定條件，可為分析植物脂肪酸的成分、含量打下基礎。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

試劑：0.5 mol／L NaOH-CH₃OH溶液(分析純)；1：1苯一石油醚混合溶液(分析純)；脂肪酸甲酯標準品(Sigma公司)。

安捷倫6890氣相色譜儀，氫火焰檢測器；固定液為FFAP的石英玻璃毛細管柱，柱長25m，柱徑0.32mm。

1.2 脂肪酸的快速甲酯化

將花生干燥后，取500mg左右，研碎后放人10ml具塞試管中，加入苯一石油醚混合溶液2ml，浸提15min后，再加入0.5moL／L NaOH-CH、OH溶液2ml，振搖后置于50水浴約15min，取出后沿管壁加入蒸餾水使有機層上升至試管上部，靜置分層后，取上層清液1ml作氣相色譜分析。

1.3 色譜操作條件

載氣N₂：81kPa；分流比10：1；燃氣H₃：30ml／min；空氣：400ml／min；進樣口：250℃；檢測器：250℃；程序升溫：180℃(2min)→220℃(3min)，每分鐘升5℃。

2 結果

2.1 定性及定量分析

采用脂肪酸甲酯標準物作對照。由于各脂肪酸為同系物，可以視相對校正因子為1，采取面積歸一化法可測定脂肪酸組成。從圖1可看出，譜峰分離效果好，能分辨出多種脂肪酸。

2.2 方法的精密度

花生樣品快速甲酯化后，連續用本方法平行測定6次，測定結果見表1。

由表1結果可看出，相對標準偏差在0.67％～2.11％之間，符合色譜定量分析的允許相對標準偏差范圍，表明此方法具有較好的精密度和重復性。

3 討論與結論

3.1 色譜柱的選擇

考慮到脂肪酸酯類的極性，根據相似相溶原理，選用交聯型固定液FFAP，它不僅適于分離脂肪酸酯類，而且熱穩定性較好，高溫不易氧化和流失，即便在高溫下操作，基線也只有很小的漂移。

由于花生的脂肪酸組成復雜，如用填充柱色譜，由于其柱效低，不能良好地分離各組分；而毛細管柱的柱徑小，柱較長，因此柱效高，能使脂肪酸組分在柱內進行反復分配并得以完全分離。因此選用毛細管氣相色譜法測定。

3.2 載氣柱前壓的設置

載氣壓力設置過低，會使譜峰的半峰寬增加，或出現拖尾峰，分析時間也較長；載氣壓力過高，又會使相鄰的峰不能完全分離，甚至出現譜峰重合現象，這些情況都會影響定性定量的準確性。經過多次試驗，當設置載氣柱前壓為81kPa時，與柱前壓為50kPa時相比，出峰時間提前了近一倍，并且不影響出峰數目及分離效果，能準確地分離出30多種組分。

3.3 程序升溫的設置

由于花生的脂肪酸組成很復雜，如果采用恒溫分析，譜峰無法得到良好的分離，所以需要設置程序升溫，使各個組分按沸點高低依次出峰。多次試驗表明，程序升溫180℃(2min)→220℃(5min)，每分鐘升5℃，在此條件下，能分離出10多個組分，并且主要脂肪酸出峰時間還不到10min，只需要13min即可完成一次分析。

由測定結果可看出，本方法能準確地分離和測定花生中的主要脂肪酸，有較好的精密度和較高的可靠性，為脂肪酸組成的測定篩選提供了一個穩定可行的分析方法。