豬α干擾素在畢赤酵母中的分泌表達
2010-12-31 00:00:00梁望旺周丹娜田永祥伍銳楊克禮劉澤段正贏鄧均華郭銳袁秋云徐滌平
湖北農業科學 2010年11期
摘要:利用PCR技術從長白豬全血基因組DNA中擴增出豬α干擾素的成熟肽(mPoIFN-α)基因，并將其亞克隆到含分泌信號肽序列的畢赤酵母(Pichia pastoris)-大腸桿菌(Eshericjia coil)穿梭質粒pPIC9K載體中，構建分泌型重組表達載體pPIc9K-mPOIFN-α。將SallI線性化的pPIC9K-mPoIFN-α電轉化畢赤酵母CS115株(組氨酸缺陷型)，使重組表達載體與酵母染色體發生同源重組。轉化子經MD平板篩選和PCR鑒定后，得到的陽性菌株再以G418抗性梯度法篩選多拷貝重組子。該多拷貝菌株經1%甲醇誘導表達，表達產物經SDs—PAcE和western-blot檢測，結果表明，豬α干擾素在畢赤酵母中成功地獲得了分泌表達，并具有免疫活性，表達產物約為19kD，這為進一步研究豬α干擾素的功能奠定了基礎、
關鍵詞:豬α干擾素;畢赤酵母;分泌表達
