應用DAD檢測器判別液相色譜峰純度

摘要 本文對應用DAD檢測器判別液相色譜峰純度進行了探討。

關鍵詞 檢測器 判別液 純度

高效液相色譜法定量的前提是色譜峰由單一組分構成，因此色譜峰的純度即一個色譜究竟是有一種組分構成，還是包含兩種以上的成分，這就是我們大家所要關心的問題。二極管檢測器(DAD簡稱)的開發，是過去20年內高效液相色譜峰的定性功能DAD檢測器可以得到各個波長的吸光度值即可以得到樣品在各時刻的吸收光譜圖。

使用這些方法判別峰純度時都要求待測組分色譜峰中洗脫雜質的紫外光譜，明顯不同于主組分的紫外光譜。光譜間的差異越大對于其洗脫雜質的檢測就越低，然而有機物的紫外光譜一般均顯示曲線變化不明顯的寬帶。缺乏能夠說明細微差別的精神結構，尤其是對于那些生色團相同而結構上的差異部分，由于生色團不同的化合物間的結構差異不能夠予以足夠的描述實際上許多情況下，例如同分異構體的雜質和主組分的降解或代謝產物與主組分結構上是非常相似的。這是利用組分的紫外光譜信息判別色譜峰純度時就會遇到不能檢測到分析物的共洗脫雜質的情況，甚至有時候會給出完全錯誤的峰純度結果從而給下一步的定性定量分析很大誤差。

使用DAD可以獲得三維譜圖，進而得到等吸收圖提取所要檢測波長下的色譜圖。本文通過選擇頭孢拉定作為分析對象對DAD用于判別液相色譜峰純度時的局限性研究。

1 試驗部分

儀器和試劑AgilenFechnologiesl200SeriesDAD檢測器、甲醇(色譜純)其它試劑均為分析純。頭孢拉定、頭孢氨芐對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。

色譜柱：EXSILCl8柱5μm150*406mid，流動相：水、甲醇、3.86％醋酸鈉溶液、4％醋酸溶液(1654：400：30：6)流速為0.7ml／min-0.9ml／min進樣量10μl柱溫為室溫。

對照品溶液制備：①取頭孢拉定對照品約35mg精密稱定置50ml量瓶中加流動相溶解并稀釋至刻度搖勻。②取頭孢氨芐對照品約20mg精密稱定置50ml量瓶中加流動相溶解并稀釋至刻度搖勻。供試品溶液的制備實驗用的混合溶液根據要求按不同的配比使用標準對照溶液和流動相來配制。

2 結果與討論

2.1DAD用于色譜峰純度判別

頭孢拉定和頭孢氨芐其二者在合適的條件下可以被分離。通常頭孢拉定中含有一定量的頭孢氨芐從二者的紫外光譜，可以發現他們的紫外光譜形狀幾乎完全一致。事實上二者結構上的相似在實際工作中由于柱效下降或者分離條件偶爾變化有時仍然會遇到二者嚴重重疊或者其洗脫的情況通過一根使用過一段時間的色譜柱對供試品的洗脫得到的頭孢氨芐和頭孢拉定的洗脫的色譜峰利用歸一化光譜對照和吸收比值圖法對該假單峰的純度進行鑒定。結果頭孢拉定和頭孢氨芐的共洗脫色譜峰前沿峰頂和峰尾提取的紫外光譜柱歸一化后重疊，頭孢拉定中含有微量的頭孢氨芐由于二者結構和性質上的相似使得他們保留的時間也很相近對流動相的配比略作改變后可使頭孢氨芐峰被掩蓋表現上呈單一峰。使用DAD抽取該色譜圖歸一化后重疊和利用吸收比值圖對該色譜的純度進行判別的結果，認為該色譜圖峰是純的。幸運的是它們在適當的條件下可以被分離開，從上面選擇的有代表性的分析物或者光譜相似雜質組成的體系中可以明顯的看出使用DAD判別液相色譜峰純度有時可能會得出錯誤的峰純度信息。文獻中也認為任何情況下相同的吸收比或者整個色譜峰歸一化光譜的一致只應該被當作是峰純度的一個相對指示而不是一個絕對的證據，對于可能存在于主組分結構相似的雜質的樣品體系的液相色譜分析方法，峰純度的可靠評價最好是通過收集色譜峰出液，然后更換不同的色譜體系或者是由于對微小結構差異靈敏的質譜等手段來驗證。

2，2靈敏度

在對于化合物的痕量分析中檢測器的靈敏度起著重要的作用，本研究中還對二極管陣列檢測器與常用的可變波長檢測器的靈敏度進行了比較，頭孢拉定的檢測限分別是0.09μg和0.04μg相比通常使用的可變波長檢測器要高大約1個數量級這表明DAD在線獲得光譜信息的同時靈敏度是有所降低的，因此對于色譜峰中微量的雜質的檢測有時DAD就會顯得無能為力。