[摘要]目的:檢測Runx3和Ki-67蛋白在皮膚惡性黑色素瘤(CMM)中的表達水平，以探討Runx3和Ki-67在CMM發生、發展過程中的作用。方法:采用免疫組織化學法研究Runx3和Ki-67蛋白在皮膚惡性黑色素瘤、皮膚交界痣及正常皮膚中的表達。結果:Runx3蛋白在CMM中陽性表達率為23.68%，與皮膚交界痣(85.00%)和正常皮膚(90.00%)相比，差異具有統計學意義(P<0.05);Ki-67蛋白在CMM中陽性表達率為78.95%，與皮膚交界痣(25.00%)和正常皮膚(25.00%)相比差異具有統計學意義(P<0.05)。 結論:皮膚惡性黑色素瘤的產生可能與Runx3蛋白的表達降低及Ki-67蛋白的表達升高有關。

[關鍵詞]Runx3;Ki-67;皮膚惡性黑色素瘤

[中圖分類號]Q813.1[文獻標識碼]A[文章編號]1008-6455(2010)07-1013-02

Expression of Runx3 and Ki-67 in Cutaneous M alignant Melanoma

CAO Jun-hua，CHEN Min-jing，CHEN Jian-hua

(Department of Plastic Surgery，First Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou 450052，Henan，China)

Abstract:ObjectiveTo detect the expression of Runx3 and Ki-67 in Cutaneous M alignant Melanoma(CMM)， in order to explore Runx3' and Ki-67' effection during the generation and development of CMM.MethodsImmunohistochemistry technique was perfomed to evaluate the alterations of the Runx3 and Ki-67 protein in CMM，Junction Nevus and normal skin tissues.ResultsThe expression rate of Runx3 protein in the CMM， Junction Nevus and normal skin is 23.68%，85.00%，90.00%. There was a statical significance between the CMM and Junction Nevus or normal skin(P<0.05);The expression rate of Ki-67 protein in the CMM， Junction Nevus and normal skin is 78.95%，25.00%，25.00%.There was a statical significance between the CMM and Junction Nevus or normal skin(P<0.05).ConclusionThe occurrence and development of CMM may be related to the low-expression rate of Runx3 protein and the high-expression rate of Ki-67 protein.

Key words:Runx3; Ki-67; Cutaneous M alignant Melanoma(CMM)

皮膚惡性黑色素瘤是一種惡性程度較高的體表腫瘤，其發生發展與抑癌基因的失活、突變及細胞異常增殖密切相關。Runx3是一個新近在Runx3家族中受到廣泛關注的基因，Runx3蛋白與smad2、smad3形成復合物傳遞TGF-β/activin信號，在誘發細胞凋亡、調節細胞周期中起重要作用[1]。Ki-67蛋白是人類異常增生細胞核中普遍存在的標志性抗原，在細胞增殖期表達，Ki-67蛋白表達可反映腫瘤細胞增殖活性，與惡性腫瘤的發展、轉移和預后高度相關[3]。基于Runx3和Ki-67在腫瘤發生和發展中的作用，本研究采用免疫組化(SP)法檢測Runx3和Ki-67蛋白在CMM、交界痣及正常皮膚組織中的表達水平。

1材料和方法

1.1病例資料:選取2006～2008年間就診于鄭州大學第一附屬醫院并行皮膚活檢的惡性黑色素瘤患者38例，交界痣患者20例，收集我院整形外科行全皮片移植的非癌患者手術時修剪所剩皮膚為正常對照組。所有研究對象均有完備的病史資料，且無皮膚病等合并疾病，術前均未行任何治療。

1.2實驗方法:采用免疫組化s-p法。試劑:兔抗人Runx3多克隆抗體、兔抗人Ki-67多克隆抗體SP試劑盒均購自北京博奧森生物科技公司。實驗步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3結果判定:評分標準:①根據著色的強弱，不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;②根據陽性細胞面積，陽性細胞面積/細胞總面積<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分。陽性標本判斷標準為:兩者定性積分≥2分。

1.4統計學分析:采用SPSS13.0統計軟件包進行χ2檢驗及相關性分析，以P<0.05為差異有顯著性。

2結果

2.1正常皮膚、交界痣及MM中 Runx3和Ki-67蛋白的表達情況(圖1～6):Runx3蛋白主要表達于細胞核，在MM中Runx3表達陽性率明顯低于在交界痣及正常皮膚組織中的表達陽性率;Ki-67蛋白主要表達于細胞核，在MM組織中表達陽性率明顯高于交界痣及正常皮膚組織。

2.2Runx3和Ki-67蛋白在不同組織類型中的表達見表1。

2.3 獨立樣本體檢驗結果: Runx3和Ki-67蛋白在正常皮膚中的表達與交界痣中的表達之間無統計學差異(P>0.05)，Runx3和Ki-67蛋白在正常皮膚、交界痣中的表達與在MM中的表達之間存在明顯差異，且差異有統計學意義(P<0.05)。

2.4 Runx3與Ki-67蛋白表達的相關性:Runx3與Ki-67蛋白在MM中同時表達，經Spearman等級相關性分析可知，二者呈負相關(P<0.05)。

3討論

Runx3是Runx3家族中新近受到廣泛關注的基因，在誘發細胞凋亡、調節細胞周期過程中起重要作用。在TGF-β信號轉導過程中，被激活的smad4復合物需在Runx3蛋白的指導下，方能從細胞質內轉入細胞核內特定靶位點，并加強smad4復合物與靶位點的結合強度[2]。因此，Runx3可能作為TGF-β信號傳導通路中的一個重要環節，對TGF-β上皮細胞生長起負調控作用，其表達缺失或改變將直接導致Smad蛋白功能的受限，進而影響TGF-β信號轉導通路的生物活性，最終導致腫瘤的發生、發展[4]。我們應用免疫組化SP法研究發現正常皮膚、交界痣及MM組織中Runx3蛋白均表達于細胞核，正常皮膚及交界痣組織中Runx3蛋白陽性率分別為(90.00%)、(85.00%)，明顯高于MM(23.68%)，差異有統計學意義(P<0.05﹚。提示Runx3蛋白低表達或失表達可能與MM的發生發展及浸潤轉移密切相關，檢測Runx3蛋白水平可能為MM的診斷及預后提供理論依據。

Ki-67是人類增生細胞核中普遍存在的標志性抗原，在細胞增殖期時表達，與細胞周期關系密切[5]。細胞的增殖和凋亡之間達到一種平衡狀態，才能使多細胞有機體的各種生長發育正常進行，這需要細胞的增殖、分化和凋亡過程的緊密配合才能實現。Ki-67的表達過度往往提示細胞增殖過度，且與惡性腫瘤的發展、轉移和預后高度相關[3]。通過對Ki-67檢測可估計惡性腫瘤的細胞增殖情況及惡變程度。本研究顯示MM中Ki-67蛋白陽性率(78.95%)明顯高于正常皮膚組織(25.00%)和交界痣組織(25.00%)，提示細胞增殖活性增強是腫瘤發生的一個因素。

MM具有無限生長和早期浸潤轉移的特點，目前還沒有較好的治療方法。通過本研究表明，Runx3和Ki-67與MM的發生發展關系密切。提高Runx3蛋白的表達，促進TGF-β/smad4信號通路活化可能為MM的治療提供一個新方法。Ki-67可幫助判斷病人的預后和治療方案的選擇。

[參考文獻]

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[3]Ramirea M，Davidl，LeitaoD，et al. Ki-67 labeling index in gastric careincma[J].J Pathol，1997，182(1):62.

[4]Miyazono K，Suzuki H，Imamura，et al. Regulation of TGF-beta signaling and itsroles in progssion oftumors[J].Cancer Sci，2003，94(31):230-234.

[5]Porter PL，Malone KE，Heagerty PJ，et al. Expression of cell-cycle Regulators P27kiPl and cyclin E. Alone and in combination，combination withSurvival in young breast cancer patients[J].Natt Med，1997，3(2):222-225.

[收稿日期]2010-04-19 [修回日期]2010-06-28

編輯/張惠娟