進展期白癜風患者窄譜中波紫外線治療前后血清抗黑素細胞抗體的變化

[摘要]目的:檢測白癜風患者血清抗黑素細胞IgG抗體的水平，以及窄譜中波紫外線(narrow band ultraviolet B，NB-UVB)治療前后血清中抗黑素細胞IgG抗體的變化，探討NB-UVB對白癜風的治療效應及抗黑素細胞抗體的意義。 方法:采用間接免疫熒光技術檢測56例白癜風患者血清中抗黑素細胞IgG抗體。選擇16例抗黑素細胞IgG抗體陽性的進展期患者給予窄譜中波紫外線治療，然后再檢測該抗體。結果:進展期白癜風患者血清抗黑素細胞IgG抗體陽性率顯著高于穩定期患者及正常人，NB-UVB治療后進展期白癜風患者抗黑素細胞抗體水平明顯低于治療前，差異有統計學意義。結論:白癜風患者血清中抗黑素細胞IgG抗體與疾病的活動性有一定的關系，支持白癜風與自身免疫有關。進展期白癜風患者血清中抗黑素細胞IgG抗體水平隨著治療后病情的好轉而降低，表明 NB-UVB治療白癜風有明顯效果。

[關鍵詞]白癜風;抗黑素細胞抗體;窄譜中波紫外線

[中圖分類號]Q813.1 [文獻標識碼]A [文章編號]1008-6455(2010)09-1319-03

Variation of IgG antibodies to melanocyte in sera of patients with vitiligo in progressive stage before and after NB-UVB treatment

YU Zhi-ming，LIU Hui-yu，ZHENG Shu-yun，WANG Yan-hua，CAI Li-min

(Department of Dermatology，the First Affiliated Hospital of Harbin Medical University，Harbin 150001，Heilongjiang，China)

Abstract:ObjectiveTo detect the level of IgG antibodies to melanocyte in sera of patients with vitiligo and the variation of its level before and after narrow band ultraviolet B (NB-UVB) treatment， and analyse clinical efficacy of NB-UVB treatment in vitoligo and the significance of IgG antibodies to melanocyte.MethodsIndirect immunofluorescent test was employed to measure IgG antibodies to melanocyte in sera of 56 patients with vitiligo. IgG antibodies to melanocyte were detected again in sera of 16 cases in progressive stage with positive antibodies after NB-UVB treatment.ResultsThe posotive rate of IgG antibodies to melanocyte in patients with vitiligo in progressive stage was significantly higher than patients with vitiligo in stabilization stage and the control group. The level of IgG antibodies to melanocyte was significantly lower after NB-UVB treatment than before NB-UVB treatment， with a statistical significance.ConclusionThe relationship of the antibodies and the activity of the disease supposes that vitiligo is correlated with autoimmune. IgG antibodies to melanocyte decreased accompanied by the improvement of the disease in sera of patients with vitiligo in progressive stage after NB-UVB treatment. It implied satisfied efficacy of NB-UVB treatment in vitiligo.

Key words:vitiligo; IgG antibodies to melanocyte; NB-UVB

白癜風是一種局限性或泛發性色素脫失性皮膚病。該病病因尚不清楚，但許多研究[1-3]表明白癜風患者血清中存在抗黑素細胞自身抗體，且其滴度與疾病的活動性有關。窄譜中波紫外線(narrow band ultraviolet B， NB-UVB)是治療白癜風的一種重要手段，效果較好，幾乎無副作用。我們采用間接免疫熒光技術檢測了56例白癜風患者血清中抗黑素細胞IgG抗體的水平，以及16例進展期白癜風患者NB-UVB治療前后抗黑素細胞IgG抗體的變化，來探討NB-UVB對白癜風發揮治療效應的實驗室依據及抗黑素細胞抗體在本病中的意義。

1資料和方法

1.1 臨床資料:搜集白癜風患者血清56例，男24例，女32例，12～49歲，平均年齡23歲，病程6個月～10年，平均14.2個月。有家族史3例。皮損部位:面頸部19例，軀干部21例，四肢16例，其中進展期40例，穩定期16例。疾病的活動性根據就診前3個月內原發白斑有無擴大、有無新皮損出現為準。剔除有光敏史或近2個月系統應用過糖皮質激素及免疫抑制劑患者。20份無白癜風及其他皮膚病的健康人血清為健康對照，所有血清凍存-70℃備用。

1.2 試劑:霍亂毒素(CT)、堿性成纖維細胞因子(bFGF)及RPM1640培養液均為GIBCO公司產品。FITC標記的羊抗人IgG為上海生物制品研究所產品。

1.3 方法

1.3.1 黑素細胞培養:正常人黑素細胞的培養參照文獻[4]改良而成。選用健康男性包皮環切術的皮膚，供皮者檢查無獲得性人免疫缺陷病毒(HIV)、乙肝病毒(HBV)、衣原體及支原體感染。黑素細胞培養于黑素細胞培養液-RPM1640(含10%小牛血清，6nmol/L CT及5nmol/L bFGF)，傳代于6孔培養板，取第3～4代細胞用-20℃的甲醇固定5min后用于實驗。

1.3.2 間接免疫熒光法:以上述方法培養的正常黑素細胞為底物，56例白癜風患者和20例健康對照者的血清為第一抗體，在培養黑素細胞的6孔培養板上分別加入白癜風患者和健康對照者的血清(稀釋度;1∶10)，室溫孵育48h后，PBS液沖洗3次，每次5min。用FITC標記的羊抗人IgG為第二抗體，37℃孵育30min后，PBS液沖洗3次，每次5min，吹干。熒光顯微鏡下觀察黑素細胞熒光。

1.3.3 NB-UVB治療前及治療后抗黑素細胞IgG抗體檢測:對16例抗黑素細胞抗體陽性的進展期白癜風患者采取NB-UVB治療(波長310～315nm，波峰311nm)，起始劑量0.2J/cm2，2次/周，每次遞增10%～20%，最高劑量可達3.0J/cm2。若出現輕度紅斑和瘙癢，維持原劑量直到癥狀消失，若出現疼痛性紅斑或水皰，待皮損消退后再行照射，照射劑減少10%。照射儀器采用上海西格瑪局部紫外線治療儀SS-U3B和德國Wodman全倉紫外線治療儀。治療過程中，患者以UV防護鏡保護眼睛，外生殖器以內褲防護。然后再用上述方法檢測治療后患者血清抗黑素細胞IgG抗體。

1.4統計學處理:所有數據使用SPSS10.0軟件處理，采用χ2檢驗進行統計學分析，P<0.05為有統計學意義。

2結果

2.1 抗體檢測結果:56例白癜風患者血清中抗黑素細胞IgG抗體檢測結果見表1。熒光顯微鏡下觀察到陽性的血清，胞漿和胞核呈均勻一致的亮綠色熒光。進展期與穩定期白癜風患者間抗體陽性率比較差異有統計學意義(χ2=8.46，P<0.01);進展期白癜風患者與正常對照組抗體陽性率比較有顯著差異(χ2=12.46，P<0.01);而穩定期白癜風患者與正常對照組抗體陽性率比較無統計學差異(χ2=2.562，P>0.05)。

2.2 治療后抗體檢測結果:16例抗黑素細胞抗體陽性的進展期白癜風患者NB-UVB治療8～10周后，8例痊愈(白斑消退，恢復正常色素90%以上)，5例顯效(白斑縮小，色素再生面積50%以上)，3例有效(色素再生面積20%以上，無新的白斑出現)，無效0例(治療前后無變化或皮損擴大)，總有效率100%，治療中未發現嚴重的并發癥。對此16例患者復查血清抗黑素細胞抗體，3例有效者仍陽性，其他13例轉為陰性，治療前后抗體陽性率差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

3討論

白癜風的病因仍不清楚。目前主要有以下學說:自身免疫學說、神經介質學說、先天性黑素細胞缺失及遺傳因素[5-7]。早在40年前人們就發現白癜風與一些自身免疫性疾病有關，并在病人血清中發現了一些自身抗體，如抗胃壁細胞抗體、抗腎上腺抗體、抗甲狀腺抗體等[8]。一些研究發現，白癜風患者血清中存在特異性抗黑素細胞自身抗體，而且此抗體的水平與疾病的活動性有密切關系，即進展期白癜風患者該抗體的陽性率明顯高于穩定期及正常人[1-3]。本試驗中對56例白癜風患者(包括進展期40例和穩定期16例)抗黑素細胞IgG抗體進行了檢測，發現進展期患者血清抗黑素細胞IgG抗體陽性率顯著高于穩定期和正常對照組，并有顯著的統計學差異，此結果與以往研究結果相符，提示白癜風與自身免疫有一定相關性。NB-UVB光療的作用機理主要是使表皮單位面積的黑色素細胞體積增大、樹狀突延長、酪氨酸酶的活性加強以促進皮膚黑色素形成，從而使表皮各層黑色素含量增加，皮膚變黑;另一方面通過影響免疫功能誘導皮膚浸潤活化的淋巴細胞凋亡，在調節炎癥反應及變態反應中發揮作用。目前NB-UVB的應用非常廣泛，除白癜風之外，還可以治療很多頑固的且原因不明的皮膚病如銀屑病、副銀屑病、玫瑰糠疹、斑禿、痤瘡以及帶狀皰疹等炎癥性皮膚病，在近年來臨床的廣泛應用中表現療效良好且幾無不良副作用。本試驗中選擇16例抗黑素細胞抗體陽性的進展期白癜風患者，采用NB-UVB照射治療，總有效率為100%。同時對這16例患者復查血清中抗黑素細胞抗體，其中皮損痊愈及顯效的13例均轉為陰性，抗體陽性率在治療前后有明顯統計學差異。這可能是由于NB-UVB治療后抑制了免疫反應，使黑素細胞抗體產生減少，抗體陰轉，黑素細胞的破壞停止，致使患者的白斑區有正常色素再生，無新的白斑出現，此結果進一步提示白癜風與自身免疫密切相關。而療效相對較差的3例有效患者，復查血清中抗黑素細胞抗體無一例轉陰。以上結果表明，臨床治療效果與血清中抗黑素細胞抗體的變化高度相關，抗體產生減少則臨床上治療效果較好，反之亦然。3例療效相對較差的患者可能是由于個體差異，對NB-UVB治療不敏感，這樣的患者可能需要治療的時間更長，才能達到滿意的治療效果。由此可見，抗黑素細胞抗體有利于監測NB-UVB治療白癜風的臨床有效性。我們還應該考慮到，人體是一個各器官系統相互作用的整體，同時機體與外界環境無時無刻不在交互作用，很多疾病不是一種原因和機理可以解釋的。因此，尚需要進一步的研究、隨訪和觀察，才能更好地揭示白癜風與自身免疫的關系以及紫外線對人體免疫系統的影響，為臨床治療白癜風等很多疾病提供理論及實驗室依據。

[參考文獻]

[1]YuHS，Kao CH，Yu Cl.Coexistence and relationship of antikeratinocyte an antimelanocyte antibodies in patientswith nonsegmental-type vitiligo[J]. J Invest Dermatol，1993，100(6):823-828.

[2]Hann SK，Shin HK，Park SH，et al. Detection of antibodies to melanocytein vitiligo by western immunoblotting[J]. Yonsei Med J， 1996，37(6):365-370.

[3]李志強，高天文，馬翠玲，等. 白癜風患者血清中抗黑素細胞抗體的檢測及補體介導的血清細胞毒反應[J]. 臨床皮膚科雜志，2000，29(3):136-138.

[4]Chao-Hsing KA，Hsin-Su YU. A study of the effects of phorbol-1-myristate-13-acetete on cell differentiation of pure human melanocytes in vitro[J]. Arch Dermatol Res，1991，283:119-124.

[5]Le Poole IC，DasPK，van den Wijngaard RM，et al. Review of the etiopathomechanism of vitiligo:a convergence theory[J]. Exp Dermatol，1993，2:145-153.

[6]Ortonne JP，Bose SK. Vitiligo:Where dowe stand[J]? Pigment Cell Res，1993，6:61-72.

[7]Le Poole IC， Boissy RE. Vitiligo[J]. Semin Cutan Med Surg，1997，16:3-14.

[8]畢志剛，Soltunia K，Saunders J，等. 白癜風患者血清中抗黑素細胞自身抗體的研究[J].中華皮膚科雜志，1991，24(3):154-156.

[收稿日期]2010-06-16 [修回日期]2010-08-20

編輯/張惠娟