Akt和磷酸化Akt1在胰腺癌組織中的表達及意義

劉俊 裘正軍 江弢 黃陳 孫晶 孫紅成 鐘福全 金宇彪 胡宏慧

·論著·

Akt和磷酸化Akt1在胰腺癌組織中的表達及意義

劉俊 裘正軍 江弢 黃陳 孫晶 孫紅成 鐘福全 金宇彪 胡宏慧

目的了解Akt和磷酸化Akt1(p-Akt1)蛋白在胰腺癌組織中的表達情況，探討其臨床意義。方法應用免疫組織化學法檢測74例胰腺癌組織、10例正常胰腺組織中Akt和p-Akt1蛋白的表達，并分析其與臨床病理學特征及預后的關系。結果Akt和p-Akt1蛋白在胰腺癌組織中的陽性表達率分別為87.8%和83.8%，而正常胰腺組織均陰性表達，相差非常顯著(Plt;0.05)。癌組織中Akt和p-Akt1蛋白的表達呈正相關性(r=0.274,P=0.018)。Akt和p-Akt1蛋白表達與年齡、性別、腫瘤生長部位、腫瘤大小、病理學分級、淋巴結轉移、臨床分期及神經浸潤均無顯著相關性(Pgt;0.05)，但p-Akt1蛋白高表達與病理學T分期及TNM分期相關(P=0.002)。Akt和p-Akt1蛋白高表達者的中位生存期分別為(16.0±5.7)個月和(23.0±5.5)個月，明顯高于低表達者的(9.3±0.2)個月和(11.1±1.8)個月(P分別為0.007和0.004)。結論胰腺癌組織中p-Akt1蛋白表達的程度與良性預后有關，檢測胰腺癌中p-Akt1蛋白的表達具有一定的臨床意義。

胰腺腫瘤； 免疫組織化學； 蛋白激酶類； Akt； p-Akt1； 預后

Akt是一個絲/蘇氨酸激酶，可被很多生長因子激活，進而通過抑制凋亡和調節細胞增殖在腫瘤的發生以及耐藥中起著重要作用[1-2]。Akt有三個亞型(Akt1、Akt2和Akt3)，在腫瘤中的作用不同[3]。磷酸化Akt(p-Akt)為其活化狀態，在胰腺癌的作用存在爭議[4-5]。為此，本研究檢測胰腺癌組織和正常胰腺組織中Akt和p-Akt1蛋白的表達，分析其與臨床病理學特征及預后的關系。

材料與方法

一、病例資料

收集上海交通大學附屬第一人民醫院1993年8月至2009年1月手術切除的胰腺癌標本74例，其中男50例，女24例，平均年齡(64±10)歲(40～80歲)。另取10例正常胰腺組織標本作為對照。通過電話和直接上門相結合的方式進行隨訪。

二、Akt和p-Akt1蛋白表達的檢測

采用免疫組織化學法檢測，嚴格按試劑盒(上海明睿公司)說明書操作。參考Shah等[6]的標準，隨機選擇5個高倍視野，每視野計數500個細胞，無陽性細胞為-,陽性細胞lt;10%為+，10%～50%為++，gt;50%為+++。-和+為低表達組，++和+++為高表達組。

三、統計學處理

采用SPSS17.0軟件分析。Akt和p-Akt1的相關性采用Spearman等級檢驗分析，Akt和p-Akt1表達與臨床病理資料間關系用χ2檢驗，生存分析采用Kaplan-meier法，Plt;0.05為有統計學意義。

結 果

一、胰腺癌組織中Akt和p-Akt1蛋白的表達

Akt和p-Akt1蛋白主要在細胞質中表達，少數在細胞核中表達(圖1)。Akt和p-Akt1蛋白在胰腺癌組織中總的陽性表達率分別為87.8%和83.8%，陽性細胞數≥10%的表達率分別為73.0%和55.4%，陽性細胞數≥50%的表達率為28.4%和21.6%，而正常胰腺組織中均呈陰性表達(Plt;0.05)。

二、胰腺癌Akt和p-Akt1蛋白表達的相關性

胰腺癌組織Akt和p-Akt1蛋白的表達具有正相關性(表1，r=0.274,P=0.018)。

三、胰腺癌組織Akt和p-Akt1蛋白表達與臨床病理學特征的關系

胰腺癌Akt蛋白表達與年齡、性別、腫瘤生長部位、腫瘤大小、病理分級、淋巴結轉移、臨床分期及神經浸潤均無顯著相關性。而p-Akt1高表達與腫瘤T分期及TNM分期相關(表2)，與其他特征無顯著相關性(Pgt;0.05)。

四、Akt和p-Akt1蛋白表達與預后

胰腺癌患者總的中位生存期為(14.3±1.4)個月。Akt高表達者的中位生存期為(16.0±5.7)個月，明顯高于低表達者的(9.3±0.2)個月(圖2a，P=0.007)。p-Akt1高表達者的中位生存期為(23.0±5.5)個月，明顯高于低表達者的(11.1±1.8)個月(圖2b，P=0.004)。多因素分析顯示，TNM分期為胰腺癌預后差的因素(r=1.436，P=0.041)，p-Akt1為胰腺癌良性預后因素(r=0.421，P=0.010)。

表1 胰腺癌組織Akt和p-Akt1蛋白的表達(例數)

圖1正常胰腺和胰腺癌組織中Akt和p-Akt1的表達(SP ×400)。(a)正常胰腺Akt陰性表達，(b～e)胰腺癌中Akt表達(-、+、++、+++)；(f)正常胰腺p-Akt1陰性表達；(g～j)胰腺癌中p-Akt1表達(-、+、++、+++)

表2胰腺癌組織中Akt和p-Akt1蛋白表達與臨床病理學特征的關系

參 數例數Akt蛋白低表達高表達p-Akt1蛋白低表達高表達年齡 ≤60歲244201212 gt;60歲5016342129性別 男5011392426 女24915915腫瘤部位 胰頭6517482936 胰體尾93645分化程度 高分化15411411 中分化4713342324 低分化103764淋巴結轉移 無4611352224 有289191117T分期 T1+T228622622a T34614322719TNM分期 Ⅰa+Ⅰb19514415a Ⅱa27621189 Ⅱb+Ⅲ+Ⅳ289191117神經浸潤 無3410241616 有307231317腫瘤大小 ≤2cm101928 gt;2cm6419453133

注：aPlt;0.01

圖2胰腺癌組織Akt(a)和p-Akt1(b)蛋白表達與患者生存期的關系

討 論

Hutchinson等[7]報道Akt1高表達可加速ErbB-2介導的乳腺腫瘤的發生，但抑制腫瘤的侵襲能力。Maroulakou等[8]報道，不表達Akt1的腫瘤更具有侵襲性。Chadha等[4]報道，Akt蛋白在胰腺癌的高表達率為71.8%。在很多胰腺癌細胞株中Akt也高表達[9]。本實驗結果顯示，胰腺癌組織Akt蛋白的高表達率為73.0%，明顯高于正常胰腺組織。而且p-Akt1蛋白高表達與腫瘤病理學T分期及TNM分期相關，提示Akt1的高表達可能與胰腺癌的局部侵襲能力下降有關，與上述文獻報道結果一致。

Akt在PI3K或缺氧微環境的刺激下發生磷酸化，其中T308位點和S473位點的同時磷酸化為Akt活化所必需。激活的Akt從細胞質募集至胞膜或轉位到胞核，使底物蛋白特定部位的絲氨酸、蘇氨酸磷酸化。p-Akt通過抑制凋亡促進細胞的存活，在腫瘤的發生中起重要作用。Ng等[9]報道，p-Akt1在很多胰腺癌細胞株中高表達。本結果顯示，p-Akt在胰腺癌組織中也高表達，且Akt和p-Akt1蛋白的表達存在明顯的正相關，提示Akt的磷酸化激活與Akt的異常過表達有關。

至于p-Akt對胰腺癌預后的意義存在爭議。Chadha等[4]認為，p-Akt是胰腺癌預后良好的指標之一，而Yamamoto等[5]認為，p-Akt在胰腺癌的高表達與預后差相關。本結果顯示，Akt和p-Akt1蛋白高表達者的中位生存期均明顯高于低表達者，多因素分析提示p-Akt1高表達為良性預后因素。這可能與p-Akt1高表達者胰腺癌的局部浸潤少有關。

[1] Woodgett JR.Recent advances in the protein kinase B signaling pathway.Curr Opin Cell Biol,2005,17:150-157.

[2] Sheng S,Qiao M,Pardee AB.Metastasis and AKT activation.J Cell Physiol,2009,218:451-454.

[3] Dillon RL,Marcotte R,Hennessy BT,et al.Akt1 and akt2 play distinct roles in the initiation and metastatic phases of mammary tumor progression.Cancer Res,2009,69:5057-5064.

[4] Chadha KS,Khoury T,Yu J,et al.Activated Akt and Erk expression and survival after surgery in pancreatic carcinoma.Ann Surg Oncol,2006,13:933-939.

[5] Yamamoto S,Tomita Y,Hoshida Y,et al.Prognostic significance of activated Akt expression in pancreatic ductal adenocarcinoma.Clin Cancer Res,2004,10:2846-2850.

[6] Shah A,Swain WA,Richardson D,et al.Phospho-akt expression is associated with a favorable outcome in non-small cell lung cancer.Clin Cancer Res,2005,11:2930-2936.

[7] Hutchinson JN,Jin J,Cardiff RD,et al.Activation of Akt-1 (PKB-alpha) can accelerate ErbB-2-mediated mammary tumorigenesis but suppresses tumor invasion.Cancer Res,2004,64:3171-3178.

[8] Maroulakou IG,Oemler W,Naber SP,et al.Akt1 ablation inhibits, whereas Akt2 ablation accelerates,the development of mammary adenocarcinomas in mouse mammary tumor virus (MMTV)-ErbB2/neu and MMTV-polyoma middle T transgenic mice.Cancer Res,2007,67:167-177.

[9] Ng SSW,Tsao MS,Chow S,et al.Inhibition of phosphatidylinositide 3-kinase enhances gemcitabine-induced apoptosis in human pancreatic cancer cells.Cancer Res,2000,60:5451-5455.

2009-07-15)

(本文編輯：屠振興)

ExpressionandclinicalsignificanceofAktandphosphoryledAkt1inpancreaticcarcinoma

LIUJun,QIUZheng-jun,JIANGTao,HUANGCheng,SUNJing,SUNHong-cheng,ZHONGFu-quan,JINYu-biao,HUHong-hui.

DepartmentofGeneralSurgery,FirstPeople′sHospitalofShanghai,ShanghaiJiaotongUniversity,Shanghai200080,China

QIUZheng-jun,Email:qiuwryb@online.sh.cn

ObjectiveTo investigate the expression of Akt and phosphoryled Akt (p-Akt1) protein in pancreatic carcinoma and to determine the clinical significance.MethodsIn 74 cases of pancreatic carcinoma and 10 cases of normal pancreatic tissue samples, the expression of Akt and p-Akt1 were detected by immunohistochemical method, and the its relationship with clinicopathologic characteristics and prognosis were analyzed.ResultsThe positive expression rate of Akt and p-Akt1 in pancreatic carcinoma were 87.8% and 83.8% respectively, while there was no expression of Akt and p-Akt1 in normal pancreatic tissue, and the difference was statistically significant (plt;0.05). There was a positive correlation between the expression of Akt and p-Akt1 in pancreatic carcinoma (r=0.274,P=0.018). The expression of Akt and p-Akt1 was not significantly associated with the age, sex, location, size, pathology stages, lymph nodes metastasis, clinical stages and nerve invasion of the tumor (Pgt;0.05). But the higher expression of p-Akt1 was associated with T stages and TNM staging (p=0.002). Patients with high intensity of Akt and p-Akt1 expression showed a significantly longer median survival time [(16.0±5.7) month and (23.0±5.5) month, respectively] than those with low intensity expression [(9.3±0.2) month and (11.1±1.8) month (P=0.007 andP=0.004) respectively].Conclusionsp-Akt1 expression is a significant positive prognostic factor for pancreatic carcinoma and detection of p-Akt1 expression may be of clinical value.

Pancreatic neoplasms； Immunohistochemistry； Protein kinases; Akt； p-Akt1； Prognosis

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.02.018

200080 上海，上海交通大學附屬第一人民醫院普外科(劉俊、裘正軍、江弢、黃陳、孫晶、孫紅成、鐘福全)，病理科(金宇彪 、胡宏慧)

裘正軍，Email: qiuwryb@online.sh.cn