異丙酚對大鼠急性壞死性胰腺炎的干預作用

吳敬醫 張義勝 金孝岠 趙國海

·論著·

異丙酚對大鼠急性壞死性胰腺炎的干預作用

吳敬醫 張義勝 金孝岠 趙國海

目的探討異丙酚對大鼠急性壞死性胰腺炎(ANP)的干預作用及其機制。方法54只雄性SD大鼠按隨機表法分為假手術組、ANP組、異丙酚組。異丙酚組在ANP制模后經陰莖背靜脈持續泵輸注異丙酚10 mg·kg-1·h-1。制模后3、6、12 h分批處死大鼠，取血檢測血清淀粉酶、脂肪酶、一氧化氮(NO)、TNF-α、IL-6水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性，取胰腺組織常規病理檢查并評分。結果制模后6 h，假手術組、ANP組和異丙酚組的血淀粉酶水平分別為(1743±370)U/L、(7745±1030)U/L和(5529±874)U/L；脂肪酶為(274.9±36.1)U/L、(1672±262)U/L和(1219±207)U/L；TNF-α為(1.110±0.276)mg/L、(3.191±0.279)mg/L和(2.361±0.281)mg/L；IL-6為(102.6±28.5)ng/L、(334.1±34.0)ng/L和(268.6±29.8)ng/L；NO為(42.2±18.1)μmol/L、(120.7±22.3)μmol/L和(73.6±19.3)μmol/L；SOD為(120.6±20.1)U/ml、(54.1±15.3)U/ml和(85.7±17.1)U/ml；胰腺病理評分為0.333±0.408、4.417±0.665和3.500±0.707。ANP組血清淀粉酶、脂肪酶、IL-6、TNF-α、NO水平及胰腺病理評分均較假手術組明顯升高(P<0.05)，而SOD活性明顯降低(P<0.05)。異丙酚組血清淀粉酶、脂肪酶、IL-6、TNF-α、NO水平及胰腺病理評分均較ANP組明顯降低(P<0.05)，而SOD活性明顯升高(P<0.05)。結論異丙酚可降低ANP大鼠血清淀粉酶和脂肪酶水平，減輕胰腺組織的損害，對ANP具有一定的治療作用。

胰腺炎，急性壞死性； 異丙酚； 模型，動物

大多學者認為,在重癥急性胰腺炎(SAP)的發病過程中，炎癥介質、氧自由基的大量釋放起著重要的作用。因此，如何阻止炎癥介質、氧自由基的大量釋放成為阻止胰腺炎癥及壞死發展的重要手段。異丙酚(propofol)是一種常用的靜脈麻醉藥，具有作用迅速、消除半衰期短等優點，已廣泛應用于麻醉誘導、維持及重癥監護患者的鎮靜。近來研究發現，異丙酚還具有較強的抗炎、抗氧化作用[1-2]。本研究旨在探討異丙酚對急性壞死性胰腺炎(ANP)大鼠的干預作用。

材料和方法

一、實驗動物及分組

健康成年雄性SD大鼠54只，體重為(300±30)g，清潔級，由南京安立默公司提供。按隨機表法分為假手術組、ANP組和異丙酚組。每組再分為術后3、6、12 h 3個時間點，每個時間點6只大鼠。

參照Aho等[3]和王勇等[4]方法，以微量輸液泵持續向膽胰管逆行輸注4%?；敲撗跄懰徕c溶液1 ml/kg體重(0.1 ml/min)制備ANP模型。制模前，以4.5號頭皮針經大鼠陰莖背靜脈建立靜脈通道。ANP組在制模后立即以微量注射泵持續靜脈輸注生理鹽水12 ml·kg-1·h-1。異丙酚組在制模后立即持續輸注異丙酚10 mg·kg-1·h-1(用生理鹽水稀釋為總容量12 ml·kg-1·h-1)。假手術組進腹后僅翻動胰腺數次，隨即關腹，靜脈輸注等容量生理鹽水。

術后3、6、12 h處死大鼠，經下腔靜脈取血，分離血清，-20℃ 保存。取部分胰腺組織置10%中性福爾馬林溶液固定，常規病理檢查。

二、觀察指標和檢測方法

1．血清淀粉酶、脂肪酶檢測：采用全自動生化分析儀檢測(日立7170 全自動生化分析儀，日本)，按試劑盒說明書操作。

2．血清TNF-α、IL-6含量檢測：應用中國人民解放軍總醫院科技開發中心放免所提供的TNF-α、IL-6試劑盒，按說明書操作，應用中科大公司生產的GC-911γ免疫計數儀檢測。

3．血清NO、SOD水平檢測：應用南京建成生物工程研究所生產的試劑盒檢測，嚴格按照說明書操作。NO含量測定采用硝酸還原酶法，以NO2-/NO3-的比值反映NO水平；SOD活性采用比色法測定。

4．病理學檢查：胰腺組織切片由我院病理科醫師在光鏡下觀察，并按Schmidt標準[5]進行雙盲評分。

三、統計學處理

結 果

一、各組血清淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-6、NO水平及SOD活性的變化

與假手術同時間點組相比，ANP組血清淀粉酶、脂肪酶、IL-6、TNF-α、NO水平均明顯升高(P<0.05)，而SOD活性明顯降低(P<0.05)。異丙酚組血清淀粉酶、脂肪酶、IL-6、TNF-α、NO水平較ANP同時間點組明顯降低(P<0.05)，SOD活性明顯升高(P<0.05);與假手術組比較，除3 h組的NO含量及SOD活性外，其他各組仍有明顯差異(P<0.05，表1)。

表1 各組血清淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-6、NO水平及SOD活性的比較

注：與假手術組同時間點比較,aP<0.05；與ANP組同時間點比較,bP<0.05

二、大鼠胰腺組織病理改變

假手術組胰腺無明顯改變。ANP組大鼠胰腺肉眼可見明顯充血水腫、出血，胰腺周圍散在淡黃色皂化斑；光鏡下見間質充血水腫，胰腺組織出血、壞死，大量炎性細胞浸潤，胰腺腺泡結構消失，腺泡出現空泡化。異丙酚組胰腺的病理改變較ANP組減輕。假手術組、ANP組和異丙酚組3 h點的病理評分分別為0.417±0.376、3.417±0.585和2.417±0.736；6 h點分別為0.333±0.408、4.417±0.665和3.500±0.707；12 h點為0.250±0.418、6.333±0.606和5.750±0.758。ANP組和異丙酚組的胰腺病理評分均明顯高于假手術組(P<0.05)；異丙酚組3、6 h點的胰腺病理評分又明顯低于ANP組(P<0.05)，但12 h點的差異無統計學意義。

討 論

本實驗采用經胰膽管內逆行注射4%牛磺脫氧膽酸鈉建立ANP模型。制模后3 h血淀粉酶、脂肪酶明顯升高，胰腺出血、壞死、炎性細胞浸潤、腺泡空泡化，表明模型制備成功。

在胰腺炎的發生、發展中，大量炎性介質及氧自由基的生成，促炎與抗炎因子的失衡已被認為是其主要機制之一。在SAP時，胞內誘生型一氧化氮合成酶(iNOS)的轉錄和翻譯水平增加，iNOS大量產生并激活，致使NO生成增多，誘導胰腺損傷[6]。超氧化物岐化酶(SOD)可以特異性地催化氧自由基發生岐化反應，對機體起保護作用，其活性的高低間接反映機體清除氧自由基的能力。本實驗結果顯示，ANP組血清NO水平在制模后持續升高，SOD活性持續下降，表明機體清除氧自由基的能力下降。與ANP組相比，異丙酚干預后，血清NO、淀粉酶、脂肪酶水平均明顯降低(P<0.05)，SOD活性明顯增加(P<0.05)，胰腺組織病理評分也降低，但仍高于假手術組，表明異丙酚干預ANP有一定的治療作用，與楊引等[7]的報道一致。這可能與異丙酚具有自由基清除劑類似的酚羥基結構有關。

文獻報道[8-9]，急性胰腺炎癥狀出現后IL-6水平>140 U/L時提示為SAP。TNF-α也是SAP時最早升高的炎癥介質之一，是刺激其他細胞因子釋放的重要啟動因子。本實驗結果顯示，ANP制模后，血TNF-α、IL-6水平較假手術組明顯升高。應用異丙酚干預后血TNF-α、IL-6水平較ANP組均明顯下降(P<0.05)。表明異丙酚具有抑制炎性介質的生成或釋放、減輕炎癥反應的功效，與國內外相關報道一致[1，10-11]。

總之，異丙酚具有抗氧化、抗炎、抑制炎性介質生成的作用，對SAP有著積極的干預作用，但單一應用異丙酚尚不能有效地控制胰腺炎的病變。因此，臨床上還需要探索更多或更有效的治療方法。

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[4] 王勇，劉志蘇，江平，等．兩種逆行膽胰管穿刺方法復制胰腺炎模型比較．醫學新知雜志，2002，12：82-83.

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[7] 楊引,劉欣,彭雪,等.異丙酚對急性壞死性胰腺炎肺損傷保護作用的研究.中國醫師雜志,2005,7:1199-1200.

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2009-05-25)

(本文編輯：屠振興)

Effectsofpropofolonsevereacutepancreatitisinrats

WUJing-yi,ZHANGYi-sheng,JINXiao-ju,ZHAOGuo-hai.

DepartmentofICU,YijishanHospital,WannanMedicalCollege,Wuhu241001,China

ZHAOGuo-hai,Email:yjsyy228@126.com

ObjectiveTo investigate the therapeutic effects and mechanisms of propofol on acute necrotizing pancreatitis(SAP) in rats.Methods54 male Sprague-Dawley rats were randomized into three groups with 18 rats in each group: sham-operation group, ANP group, propofol-treated group. After ANP models were induced, propofol(10 mg·kg-1·h-1) were injected by dorsal vein of penis in the propofol-treated group. The rats in all groups were sacrificed at 3, 6, 12 hours after induction of the model. The serum amylase, lipase, nitric oxide (NO), TNF-α, superoxide dismutase (SOD), IL-6 were detected; the histopathological score of pancreatic tissue were evaluated.ResultsAt 6 h, the levels of serum amylase in sham-operation group, ANP group, propofol-treated group were (1743±370)U/L, (7745±1030)U/L and (5529±874)U/L; the levels of serum lipase were (274.9±36.1)U/L, (1672±262)U/L and (1219±207)U/L; the levels of serum TNF-α were (1.110±0.276)mg/L, (3.191±0.279)mg/L and (2.361±0.281)mg/L; the levels of serum IL-6 were (102.6±28.5)ng/L, (334.1±34.0)ng/L and (268.6±29.8)ng/L; the levels of serum NO were (42.2±18.1)μmol/L, (120.7±22.3)μmol/L and (73.6±19.3)μmol/L; the levels of serum SOD were (120.6±20.1)U/ml, (54.1±15.3)U/ml and (85.7±17.1)U/ml; the histopathological scores were 0.333±0.408, 4.417±0.665 and 3.500±0.707. The serum levels of amylase, lipase, NO, TNF-α, IL-6 and the histopathological score of pancreas in ANP group were significantly higher than those in sham-operation group group (P<0.05), while the serum levels of SOD were significantly lower (P<0.05). The serum levels of amylase, lipase, NO, TNF-α, IL-6 and the histopathological score of pancreas in propofol-treated group were significantly lower than those in the ANP group (P<0.05), while the serum levels of SOD were significantly higher (P<0.05).ConclusionsPropofol could decrease the levels of serum amylase and lipase, reduce pancreatic tissue damage, and had therapeutic effects on ANP in rats.

Pancreatitis,acute necrotizing； Propofol； Models,animal

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.01.014

241000 蕪湖，安徽省皖南醫學院附屬弋磯山醫院ICU

趙國海，Email:yjsyy228@126.com