FT-IR法定性鑒別熊膽粉等常見動物膽類藥材

袁丹，金鳳，于山川，潘英妮，宋愛華,袁園

(1.沈陽藥科大學中藥學院，遼寧 沈陽 110015；2.武警四川總隊醫院，四川 樂山 614000)

*袁丹，E-mail： yuandan_kampo@163.com

FT-IR法定性鑒別熊膽粉等常見動物膽類藥材

袁丹1*，金鳳1，于山川1，潘英妮1，宋愛華1,袁園2

(1.沈陽藥科大學中藥學院，遼寧 沈陽 110015；2.武警四川總隊醫院，四川 樂山 614000)

目的建立熊膽粉與豬膽、牛膽、羊膽的快速定性鑒別方法。方法采用FT-IR法測定熊膽粉、牛膽、豬膽和羊膽IR光譜，分析常見動物膽類藥材的IR鑒別特征。結果熊膽粉IR光譜特征為：1 655cm-1和1 545cm-1有酰胺基(-CO-NH-)雙峰，1 216cm-1和1 048cm-1為-SO3H雙強峰，且T 1 216cm-1/2 930cm-1約為1.0；牛膽、豬膽和羊膽等動物膽類藥材IR光譜不具備或同時具備以上3個特征。結論FT-IR法定性鑒別熊膽粉與牛膽、豬膽和羊膽等其他動物膽類藥材具有操作簡單、分析時間短和鑒別特征明顯等優點。

動物膽類藥材；FT-IR法；定性鑒別

熊膽粉為黑熊SelenaretosthibetanusCuvie經膽囊引流膽汁的干燥品，具有清熱，平肝，明目功效?，F代研究表明：引流熊膽粉主要成分和藥理作用等與天然熊膽類似，主要成分以牛磺熊去氧膽酸(TUDCA)為主，同時含?；蛆Z去氧膽酸(TCDCA)、牛磺膽酸(TCA)、?；侨パ跄懰?TDCA)、UDCA、CDCA和CA等游離膽汁酸[1,2]。衛生部熊膽粉質量標準[3]中，采用薄層色譜法定性鑒別熊去氧膽酸、鵝去氧膽酸。檢查規定：不得檢出豬去氧膽酸、糖和異性有機物等。采用高效液相色譜法測定?；切苋パ跄懰岷坎坏蒙儆?3.0%。然而，由于熊膽粉市場價格昂貴，藥材市場上常有以牛、豬、羊膽汁干燥加工成粉混充熊膽粉出售或豬、羊膽粉混充牛膽粉出售等現象。薄層色譜和高效液相色譜等定性方法操作比較繁瑣，分析時間較長，且需要相應膽酸類成分對照品進行鑒別試驗。傅立葉變換紅外光譜儀(FT-IR)通常用于化學物質的結構鑒定，具有分辨能力高、掃描時間極快、分析靈敏度高等優點，為此，本研究建立了FI-IR法快速定性鑒別熊膽粉與牛、羊、豬膽汁粉的方法。

1 儀器和試藥

瑞士BrukerIFS-55型傅里葉變換紅外光譜儀，日本東京理化器械株式會社FD-5N型臺式凍結干燥機。

?；切苋パ跄懰岷湍懰徕c對照品購自中國藥品生物制品檢定所(純度大于98.5%，批號110816-200305，078-8910)。熊膽粉購自沈陽同仁堂藥店；牛膽粉(樣品1和2)、豬膽粉和羊膽粉為自制品，由新鮮牛膽、豬膽及羊膽(購自沈陽南塔農貿大市場)分別剪開膽囊膜取出膽汁后，經冷凍干燥制得凍干粉。以上藥材經沈陽藥科大學中藥學院江澤榮教授鑒定為正品。

2 紅外光譜測定方法

2.1壓片

分別取熊膽粉、牛膽粉、豬膽粉、羊膽粉各約0.5～1.0mg，于瑪瑙乳缽中磨細，加干燥的溴化鉀細粉(過200目篩)約200mg，繼續研磨混勻。將磨好的物料加到壓片模具(Φ13mm)中，鋪勻，合上模具，置油壓機上先抽氣約2min后(除去粉末中的濕氣和空氣)，邊抽氣邊加壓至150～180kg·cm-2，壓制2～5min，取出壓成透明片狀的物料，裝入樣品架待測。

另取熊膽粉與豬膽粉(1∶1)的混合品各約1.0mg，按上述方法壓片。

另取?；切苋パ跄懰岷湍懰徕c對照品各約0.5mg，按上述方法壓片。

2.2紅外光譜測繪

將空白溴化鉀片進行背景空白測定后，再把上述制備的7個樣品片置于光路中，選擇適當光學參數及掃描次數，在4000～400cm-1間繪制各自的紅外光譜。

3 結果

中藥的紅外光譜是其各組分混合物紅外光譜的疊加，樣品中主要成分的特征吸收峰通常作為藥材的鑒別依據。不同動物膽粉樣品及牛磺熊去氧膽酸和膽酸鈉對照品IR光譜如圖1所示。

A：?；切苋パ跄懰?；B：熊膽；C：膽酸鈉；D1和D2：牛膽1和2；E：豬膽；F：羊膽；G：豬膽與熊膽混合品圖1 熊膽粉及其混淆品的紅外光譜

熊膽粉主要成分為熊去氧膽酸和鵝去氧膽酸與?；撬岬慕Y合體。熊膽粉IR圖譜(圖1B)顯示與?；切苋パ跄懰釋φ掌?圖1A)類似特征：1655cm-1和1545cm-1雙峰為酰胺基吸收峰，1216cm-1和1048cm-1雙強峰，為磺酸基(-SO3H)吸收峰-SO3H。此外，1216cm-1磺酸基吸收峰透光度與熊膽粉中熊去氧膽酸或鵝去氧膽酸與?；撬岬慕Y合比例有關，而它與2930cm-1的C-H伸縮振動透光度比值(T1216cm-1/2930cm-1)接近1.0。

牛膽粉主要成分為膽酸、去氧膽酸和鵝去氧膽酸及它們與?；撬岷透拾彼岬慕Y合體[4]。其IR圖譜(圖1的D1和D2)顯示了與熊膽粉類似特征：1655cm-1和1545cm-1雙峰(酰胺基)，1216cm-1和1048cm-1雙強峰(磺酸基)。牛膽粉IR圖譜1000～900cm-1間顯示了與膽酸鈉對照品IR圖譜(圖1C)相似的3個尖銳小峰，為膽酸的-C-O-H面外彎曲振動特征吸收峰，而熊膽粉IR圖譜中無此特征。此外，牛膽粉兩個樣品D1和D2的T1216cm-1/2930cm-1分別為1.0和0.6，據文獻[5]報道，不同產地牛膽中膽酸類成分與?；撬峤Y合比率不同，因此本研究結果與文獻一致。

豬膽粉主要成分為豬去氧膽酸與甘氨酸的結合體[6]。豬膽粉IR圖譜(圖1E)沒有熊膽粉主要IR特征，也沒有牛膽粉IR在1000～900cm-1間的3個尖銳小峰。

羊膽粉主要成分為膽酸與甘氨酸的結合體[7]，其IR圖譜(圖1F)沒有熊膽粉上述3個主要特征，但顯示了牛膽粉和膽酸鈉IR在1000～900cm-1的3個尖銳小峰。

本研究還測定了熊膽粉與豬膽粉(1∶1)混合品IR圖譜，結果表明，混合品IR圖譜(圖1G)與熊膽粉IR圖譜明顯不同：1655cm-1和1545cm-1酰胺基雙峰變為一個寬峰，T1216cm-1/2930cm-1明顯降低。

根據測定結果，各動物膽粉樣品主要特征吸收峰總結見表1。

表1 各動物膽紅外光譜主要特征峰

4 討論

本研究采用FI-IR法可快速準確地定性鑒別熊膽粉與牛膽粉、豬膽粉和羊膽粉等不同動物膽類藥材及其混合品。有文獻報道采用TLC法和HPLC法等鑒別熊膽粉與牛膽、豬膽和羊膽等其他動物膽類藥材[5,8]，TLC方法雖然簡單易行，但需要對照品和分析樣品的前處理。HPLC法樣品前處理繁瑣，分析時間長，也需要對照品，分析成本高。與二者比較，本研究采用FT-IR法優點在于：樣品不需前處理，可直接打片測定，分析時間短，牛磺熊去氧膽酸和膽酸鈉的IR光譜可查閱Satler紅外標準圖譜進行比較，故不需要對照品，分析成本低。

[1] 謝培山,梁廣華,顏玉貞.熊膽的檢驗與質量考察[J].藥物分析雜志,1981,1(3)：137.

[2] 于淑賢,高穎.天然與人工熊膽粉的藥效學實驗研究[J].吉林中醫藥,2005,25(3)：55-56.

[3] 衛生部.熊膽粉質量標準[S].WS3-09(B-09)-96(Z).1996.

[4] 張啟明.牛膽粉的化學研究[J].藥物生物技術,1997,4(1)：58-60.

[5] 橫田洋一,江尻千鶴子.高速クロマトグラブ法による市販動物膽の抱合膽汁酸の分析[J].富山県薬事研究所年報,1991,18：88-96.

[6] 游元元,萬德光.動物膽汁藥用研究進展[J].貴陽中醫學院學報,2007,29(4)：58-61.

[7] 鞠愛華,茍雅書,蘇秀蘭等.蒙藥牛膽粉與羊膽粉中膽酸類成分的分析測定[J].光譜學與光譜分析,2008,28(3)：645-647.

[8] 張贇華,劉建忠,彭霞,等.HPLC法比較熊膽粉及豬膽粉、牛膽粉、羊膽粉和雞膽粉中膽汁酸類成分[J].藥物分析雜志,2009,29(3)：487-490.

[9] 王永金，楊澤民.紅外光譜鑒定熊膽的研究[J].沈陽藥學院學報，1989，6(3)：157.

FI-IRSpectroscopyinIdentificationofBearBilesandOtherAnimalBiles

Yuan Dan1, Jin Feng1, Yu Shanchuan1, Pan Yingni1, Song Aihua1, Yuan Yuan2

(1.SchoolofTriditionalChineseMatericaMedica，ShenyangPharmaceuticalUniversity,ShenyangLiaoning110015,China;2.SichuanCorpsHospitalofChinesePeople′sArmPoliceForce,Leshan,614000,China)

Objective: To establish a rapid method for the identification of bear bile powder and other animal biles.MethodsThe IR spectrum of bile bear powder, ox-bile powder, pig bile powder and goat bile powder were determined by Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FI-IR) spectroscopy, and their spectral characteristics were elucidated.ResultsThe IR spectral characteristics were shown including double absorption at1655and1545cm-1due to amide group, double strong absorption at1216and1048cm-1due to sulfonic group, and the transmittance ratio of the absorption at1210cm-1to that at1048cm-1was near to one. However, the mentioned above characteristics were not shown in the IR spectrum of other animal biles such as ox-bile powder, pig bile powder and goat bile powder.ConclusionThe FI-IR spectroscopic methods are simple, rapid and reliable, can be used for qualitative identification of bile bear powder and other animal biles.

Animal bile; Fourier Transform Infrared Spectroscopy; Qualitative identification

2009-07-20)