小薊炒炭前后蒙花苷的含量測定△

李璐，羅建光，孔令義

(中國藥科大學天然藥化教研室，江蘇 南京 210009)

質量標準

《中國藥典》2010年版一部品種質量標準修訂項目 (YS-234,236),國家重大科技專項(20092X09502-011)

*孔令義,E-mail：cpu_lykong@126.com

小薊炒炭前后蒙花苷的含量測定△

李璐，羅建光，孔令義*

(中國藥科大學天然藥化教研室，江蘇 南京210009)

目的比較小薊炒炭前后蒙花苷含量的變化。方法采用Agilent ZORBAX SB -C18(4.6mm×250mm,5μm)色譜柱，柱溫30℃，流動相為甲醇-0.5%醋酸(55∶45)，檢測波長為326nm，流速為1.0mL·min-1。結果蒙花苷在0.01～1.00μg線性關系良好，r=1.000，平均回收率為98.6%,RSD=2.48%(n=6)。結論該方法方便，準確，重現性好，為小薊和小薊炭的質量控制提供依據，并有助于小薊合理炮制工藝的制定。

小薊；炒炭；蒙花苷；高效液相色譜法

小薊為中醫臨床常用之涼血止血要藥，來源于菊科植物刺兒菜Cirsiumsetosum(Willd.) MB.的干燥地上部分。夏、秋二季花開時采割，除去雜質，曬干。小薊具有清熱涼血、止血、祛瘀等功能，歷代臨床上有生用和炒炭用。據文獻報道,兩者均具有促進血液凝固的作用[1]。小薊中止血有效成分主要為黃酮類成分[2]，包括蒙花苷(Linarin)、蘆丁(Rutin)、刺槐素(Acacetin)等。經過對小薊的系統研究[3]，發現小薊所含黃酮類成分中，以蒙花苷的含量最高，為其主要成分。故本文選擇蒙花苷作為指標成分，用HPLC法測定小薊藥材和小薊炭中蒙花苷的含量，為小薊和小薊炭質量標準的制定提供依據，同時為小薊炭的炮制工藝研究提供監測方法。

1 儀器與試藥

1.1儀器

Agilent1200高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)，包括G1322A在線脫氣機，GB1312A二元泵，GB1329A自動進樣器，G1316A柱溫箱，G1315DDAD檢測器，G1362ARID檢測器，ChemstationRevB.03.02工作站，ZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm,5μm)色譜柱；UP2200H型超聲波提取器 (40KHz，100W)，十萬分之一電子天平(METTLERTOLEDO)。

1.2試藥

蒙花苷為本實驗室自制，經MS，1H-NMR，13C-NMR鑒定結構，HPLC測定純度達98.5%以上。水為純凈水(樂百氏食品飲料有限公司)，甲醇(江蘇漢邦科技有限公司)為色譜純，冰醋酸(南京化學試劑有限公司)為分析純。10批小薊藥材樣品除江蘇、安徽定遠兩地為浙江中醫藥大學中藥飲片廠提供外，其余均購自各地藥材公司。經中國藥科大學生藥學研究室張勉教授鑒定為菊科植物刺兒菜Cirsiumsetosum(Willd.) MB.的干燥地上部分。10批小薊炭為分別取以上10批小薊藥材，參照《中國藥典》2005版(附錄ⅡD)[4]炒炭法炒至外焦黑色，篩去灰屑獲得。

2 方法和結果

2.1色譜條件

色譜柱：AgilentZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm,5μm)色譜柱；流動相：甲醇-0.5%醋酸(55∶45)；流動相流速：1mL·min-1；柱溫：30℃；檢測波長：326nm。對照品與樣品的色譜圖見圖1。

圖1 小薊HPLC圖

2.2對照品溶液的制備

取蒙花苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液。

2.3供試品溶液的制備

取本品粉末(過四號篩)約0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，密塞，稱定重量，超聲處理15min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

2.4線性關系考察

精密稱取蒙花苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作為對照品儲備液。上述儲備液分別進樣0.10,0.50,2.00,6.00,8.00,10.00μL，按2.1項下色譜條件進行HPLC分析，記錄峰面積，以進樣量(μg)為橫坐標，峰面積為縱坐標進行回歸計算。結果表明，蒙花苷在檢測范圍內顯示了良好的線性關系，線性方程為Y=2 048.2X+3.361 6,r=1.000，線性范圍為0.01～1.00μg。

2.5穩定性試驗

精密稱取小薊藥材粉末0.1g(過四號篩)，按2.3項制備供試樣品，分別于0，2，4，6，8，10，12h進樣，蒙花苷的RSD=0.41%，結果表明，供試品溶液在12h內穩定。

2.6精密度試驗

精密吸取對照品溶液，連續進樣6次，記錄各色譜峰峰面積，RSD=0.28%，表明儀器精密度良好。

2.7重現性試驗

精密稱取同批次小薊藥材粉末0.1g(過四號篩)6份，按2.3項制備供試樣品并分析，以蒙花苷的含量為考察指標，蒙花苷的RSD=1.44%，表明重現性良好。

2.8加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的藥材粉末0.05g，共6份，精密加入對照品溶液適量，按2.3項制備供試品溶液，計算蒙花苷的加樣回收率，結果見表1。

表1 蒙花苷加樣回收率試驗

2.9樣品測定

分別取10個批次小薊藥材和對應的小薊炭粉末(過四號篩)，按2.3項制成供試品溶液。小薊藥材含量測定為取小薊藥材供試品溶液5μL，小薊炭含量測定為取小薊炭供試品溶液10μL，分別在2.1項色譜條件下進樣，記錄各色譜峰的峰面積，每個樣品重復3次。含量測定結果見表2。結果表明小薊炒炭后蒙花苷含量明顯降低。

表2 小薊和小薊炭中蒙花苷的含量 /%

3 討論

蒙花苷為小薊的主要成分，為小薊的有效成分之一，其含量測定方法較多,有紫外分光光度法、薄層掃描法、高效液相法，其中以高效液相法居多，文獻中曾有人采用乙腈-水系統用HPLC法測定小薊中蒙花苷的含量[5]。本文考察了不同濃度的甲醇-水和乙腈-水系統，并考察了不同的酸濃度，結果表明采用甲醇-0.5%醋酸(55∶45)，蒙花苷和其他成分能達到很好的分離，并且出峰時間較早(約7min)，是一種比較經濟省時的方法。供試品溶液的制備方法，我們考察了不同的提取溶劑和提取方式，結果表明取0.1g藥材加甲醇10mL超聲15min，能將小薊中的蒙花苷提取完全，并且操作簡便易行。

小薊炒炭后蒙花苷含量明顯降低，為小薊藥材蒙花苷含量的十分之一到幾十分之一，說明炒炭過程對黃酮類成分有很明顯的破壞性作用，炒炭后黃酮類成分含量明顯降低。因各產地小薊的生長環境和采收時節的差異，小薊藥材的外觀和質地等存在著一些差別，因此導致炒炭后蒙花苷含量的變化程度并不一致，并且炮制火候和時間的差別等對蒙花苷含量變化程度也有很大的影響。總的來說，小薊炒炭后蒙花苷含量明顯降低。

[1] 山東省中醫藥研究所藥理組.30種中藥炒炭前后止血的研究[J].藥學通報，1965,11(12)：562.

[2] 樓之芩，秦波.常用中藥材品種整理和質量研究[M].北京：北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社，1995：711.

[3] 潘珂，尹永芹，孔令義.小薊化學成分的研究[J].中國現代中藥，2006,8(4)：7-9.

[4] 國家藥典委員會.中國藥典(一部)[S].北京：化學工業出版社，2005：附錄20.

[5] 劉翔.小薊質量標準的研究[J].南京中醫藥大學學報，2006,22(4)：263-264.

DeterminationofLinarininHerbaCirsiiandItsCarbonizedProduct

Li Lu, Luo Jianguang, Kong Lingyi

(DepartmentofNaturalMedicinalChemistry,ChinaPharmaceuticalUniversity,NanjingJiangsu210009,China)

Objective: To compare the Linarin contents of Herba Cirsii and its carbonized product.MethodsAnalyzing by Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5μm) column, at30℃, methanol-0.5% acetic acid (55∶45) was used as the mobile phase, and the detection wavelength and the flow rate were326nm and1.0mL·min-1, respectively.ResultsIn the concentration range of0.01～1.00μg, the calibration curve revealed a good linearity relationship (r=1.000), and the average recovery rate was98.6% with RSD=2.48% (n=6).ConclusionThe proposed method was found to be relatively simple, precise and reproducible, which provided an basis for the quality control of Herba Cirsii and its carbonized product, and the method can be used to formulate the reasonable technology of processing.

Herba Cirsii; Carbonizing, Linarin; HPLC

2010-02-25)