利膽溶石軟膠囊GC指紋圖譜研究

竇 霞，畢宇安， 王振中，吳 云， 陳寶來，尚 強， 蕭 偉

（江蘇康緣藥業股份有限公司，江蘇 連云港 222001）

利膽溶石軟膠囊為江蘇康緣藥業股份有限公司研制的中藥復方新藥，由香葵油、薄荷油等藥味組成，具有清熱利濕、利膽排石之功效，臨床用于膽道結石、膽道感染等病癥。為了更全面、有效的控制產品內在質量，提高本品的質量控制水平，保證臨床用藥的安全及療效，參照國家食品藥品監督管理局頒布的中藥指紋圖譜研究的技術要求，建立了利膽溶石軟膠囊的氣相指紋圖譜。因為制劑中主要成分薄荷腦、香葉醇等均為揮發性成分，所以我們采用氣相色譜法進行研究。結果表明，本實驗所建立的指紋圖譜方法，重現性好，操作簡單，同時也為其他復方中藥指紋圖譜的研究提供了研究思路［1，2］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 6890氣相色譜儀，FID檢測器。

1.2 試藥 試劑為分析純。薄荷醇對照品，中國藥品生物制品檢定所(批號:0774-9904，含量測定用)；香葉醇對照品，美國SIGMA公司(批號:G-5135)。利膽溶石軟膠囊由江蘇康緣藥業股份有限公司生產(批號:071101)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Agilent 6890氣相色譜儀；用5%二苯基-95%二甲基硅烷共聚物為固定相的毛細管色譜柱(HP-5:30 m×0.32 mm×0.25 μm)；進樣口溫度:240℃；檢測器溫度(FID):240℃；分流比:50∶1；程序升溫:初始溫度50℃，保持5 min，以每分鐘2℃升至80℃，保持5 min，以每分鐘2℃升至120℃，保持6 min，再以每分鐘10℃升至210℃，保持3 min，測定；載氣流速:1.5 ml/min；理論板數按薄荷腦峰計算，應不低于30000。

2.2 參照物的選擇 考慮利膽溶石軟膠囊主要成分為薄荷腦和香葉醇，且薄荷腦含量高，所占峰面積較大，保留時間也較為適中，所以我們選擇薄荷腦作為參照物。

2.3 參照物溶液的制備 取薄荷腦對照品適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。

2.4 供試品溶液的制備 取利膽溶石軟膠囊10粒，內容物混勻，取約50 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，即得。

2.5 方法學考察

2.5.1 精密度試驗:取樣品(批號:071101)，按供試品溶液的制備方法制備供試品，連續進樣6次進行測定。記錄色譜圖，經中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統的操作規范軟件(版本2004A)計算，6張圖譜之間的相似度均為1.000，說明測定方法精密度良好。

2.5.2 穩定性試驗:取樣品(批號:071101)，按供試品溶液制備方法制備供試品，分別在 0、3、6、9、12、24 h 測定，計算出相似度均為1.000，說明供試品溶液在24 h穩定。

2.5.3 重復性試驗:取樣品(批號:071101)6份，按供試品溶液制備方法制備供試品，進行測定，記錄色譜圖，計算出相似度均為1.000。

2.6 指紋圖譜的建立

2.6.1 樣品測定:取10批利膽溶石軟膠囊，按供試品的制備方法處理，同時取參照物溶液10 μL記錄色譜圖。將10批利膽溶石軟膠囊指紋圖譜導入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統的操作規范軟件(版本2004A)，對保留時間7～53 min(溶劑峰剪切:0～7 min、53～60 min)的色譜峰進行多點校正后，自動匹配，色譜圖見圖1，生成對照指紋圖譜(見圖2)，共標定12個共有峰，其中薄荷醇為參照峰(S)。各批利膽溶石軟膠囊樣品與對照指紋圖譜比較相似度在0.969～0.990，平均為0.979，RSD為0.73%，見表1。以7號峰(薄荷醇)作為指紋圖譜的參比峰，計算各共有指紋峰相對于參比峰的相對保留時間和相對峰面積的比值。結果見表2、3。

圖1 10批利膽溶石軟膠囊GC指紋圖譜測定色譜圖

圖2 利膽溶石軟膠囊氣相指紋圖譜

表1 10批利膽溶石軟膠囊相似度測定結果

表2 利膽溶石軟膠囊指紋圖譜中共有峰的相對保留時間

表3 利膽溶石軟膠囊指紋圖譜中共有峰的相對峰面積

2.6.2 指紋圖譜中主要色譜峰的組成藥味歸屬:在相同色譜條件下，測定了兩個原料的指紋圖譜。薄荷油原料以薄荷腦(7號峰)為參照進行測定，共有10個色譜峰，香葵油原料以香葉醇(8號峰)作為參照進行測定，共有5個色譜峰。通過對原料及成品的指紋圖譜中各色譜峰相對保留時間的比較分析，結果表明，1、2、3、4、5、6、7(S)、8、9、12 號峰來源于薄荷油，其中7(S)峰為薄荷腦；5、6、8、10、11號峰來源于香葉油，其中8號峰為香葉醇，；5，6，8號峰薄荷油及香葵油均有。見圖2～4。

圖3 薄荷油氣相指紋圖譜

圖4 香葵油氣相指紋圖譜

3 討論

3.1 升溫程序的選擇 考察了不同的氣相色譜分析條件，柱溫是色譜條件的重要參數，它對各組分分離的影響很大，為此摸索了以下3種程序升溫條件:(1)起始50℃(維持5 min)，3℃/min升至80℃(維持5 min)，3℃/min升至120℃(維持3 min)，再以10℃/min升至210℃(維持10 min)；(2)起始50℃(維持5 min)，2℃/min升至80℃(維持5 min)，2℃/min升至120℃(維持3 min)，再以10℃/min升至210℃(維持3 min)；(3)起始50℃(維持5 min)，1℃/min升至80℃(維持5 min)，1℃/min升至120℃(維持3 min)，再以20℃/min升至210℃(維持3 min)。結果表明程序(2)分離較好，保留時間適中，峰形好。因此選程序(2)作為利膽溶石軟膠囊指紋圖譜測定的升溫程序。

3.2 毛細管色譜柱的選擇 選用二根不同生產廠家的毛細管色譜柱，均為5%二苯基-95%二甲基硅烷共聚物為固定相的毛細管色譜柱:Agilent HP-5(30 m×25 mm×0.25 μm)；Phenomenex ZB-5(30 m×25 mm×0.25 μm)；進行試驗篩選，比較分離度和柱效，結果兩根色譜柱分離效果均較好。

［1］國家藥品監督管理局.中藥注射劑指紋圖譜研究的技術要求［S］.(暫行).2000.

［2］國家藥典委員會.中藥注射劑指紋圖譜實驗研究技術指南［S］(試行).2002.

［3］中國藥典［S］.一部.2005.