HPLC法測定五倍子油膏中沒食子酸的含量

楊躍輝,姜清華,林智娟

(1.中國醫科大學附屬盛京醫院藥學部,遼寧沈陽110004;2.大連醫科大學,遼寧大連116044)

HPLC法測定五倍子油膏中沒食子酸的含量

楊躍輝1,姜清華1,林智娟2

(1.中國醫科大學附屬盛京醫院藥學部,遼寧沈陽110004;2.大連醫科大學,遼寧大連116044)

采用高效液相色譜法測定五倍子油膏中沒食子酸的含量。結果表明,五倍子油膏中沒食子酸在0.1136～0.6816μg范圍內線性良好(R=0.9998),回歸方程為 y=3217x+25.747,平均回收率為99.54%(RSD=0.75%)。該方法準確可靠、簡便易行,可用于五倍子油膏中沒食子酸的含量測定。

HPLC;五倍子油膏;沒食子酸

五倍子為蚜科昆蟲角倍蚜或倍蛋蚜在其寄主鹽膚木、青桴楊或紅桴楊及同屬樹種植物葉上形成的蟲癭[1],異名文哈、百蟲倉、木附子、花倍(角倍)、獨角倍(肚倍)等,具斂肺降火、澀腸止瀉、固精止遺、斂汗止血、收濕斂瘡之功效[2],可用于治療新生兒尿布皮炎[3],即新生兒紅臀。五倍子對變鏈菌生長的抑制作用與其主要成分鞣質有關[4,5]。鞣質在醫學上稱為五倍子鞣酸,水解后的產物主要為6～8分子沒食子酸和1分子D-葡萄糖[6],因此,通過測定沒食子酸的含量,可以建立一種五倍子的含量控制方法。

五倍子油膏是以生藥五倍子粉直接入藥制成的一種有效預防和治療新生兒紅臀的藥物。其基質甘油、凡士林、羊毛脂的加入加強了其潤滑和保濕作用,更提高了五倍子油膏的持久性與保護性。生藥生倍子以粉末狀均勻分散于基質中,因此可以采用五倍子藥材含量測定方法測定其中沒食子酸的含量。

作者參考藥典中五倍子藥材含量的測定方法并加以改進,采用HPLC法測定了酸性條件下五倍子油膏水解后沒食子酸的含量。

1 實驗

1.1 試藥、試劑與儀器

沒食子酸對照品(批號:1108312200302),中國藥品生物制品檢定所;五倍子油膏,中國醫科大學附屬盛京醫院。

甲醇為色譜純,鹽酸、磷酸為分析純,水為重蒸水。

Agilent 1100型高效液相色譜儀,美國;電恒溫水浴鍋,余姚市亞星儀器儀表有限公司;CP2250型電子天平,沈陽市計量測試所;SZ-96型自動純水蒸餾器,上海亞榮電化儀器廠。

1.2 溶液的配制

1.2.1 對照品溶液的配制

精密稱取沒食子酸對照品5.68 mg,溶解,用甲醇定容至100 mL,即得濃度為0.0568 mg·mL-1的沒食子酸對照品。

1.2.2 供試品溶液的配制

取五倍子油膏約5 g(含五倍子生藥量約0.5 g)置于100 mL具塞錐形瓶中,精密加入4 mol·mL-1的鹽酸溶液100 mL,水浴加熱3.5 h,趁熱過濾[7～10]。精密量取續濾液2 mL于100 mL容量瓶中,加50%甲醇至刻度,搖勻即得。

按處方比例和工藝制備無五倍子藥材的陰性樣品,再按上述方法制備陰性對照溶液。

1.3 色譜條件

色譜柱:Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm),流動相:水-甲醇-磷酸(85∶15∶0.085),檢測波長270 nm,柱溫30℃,流速1 mL·min-1,進樣量10 μL。理論塔板數按沒食子酸峰面積計算不少于2000。

2 結果與討論

2.1 線性關系考察

取對照品溶液(0.0568 mg·mL-1),分別進樣2 μL、4μL、6μL、8μL、10μL、12μL,以峰面積為縱坐標、進樣量(μg)為橫坐標,繪制標準曲線。擬合線性回歸方程為y=3217x+25.747,R=0.9998。表明在0.1136～0.6816μg范圍內線性關系良好。

2.2 精密度

精密吸取對照品溶液10μL,重復進樣5次,記錄峰面積。結果發現,沒食子酸峰面積RSD為0.13%,表明方法的精密度良好。

2.3 重復性

取同一批號樣品5份,按1.2.2方法制備供試品溶液,重復平行測定。結果發現,五倍子油膏中沒食子酸峰面積的 RSD為1.70%。表明方法的重復性較好。

2.4 穩定性

取同一批號的供試品溶液,在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h分別進樣10μL,記錄峰面積,計算沒食子酸峰面積的RSD為0.11%。表明供試品溶液在12 h內穩定性良好。

2.5 回收率

精密稱取已知含量(54.12 mg·g-1)的五倍子油膏約0.5 g,加入定量的沒食子酸對照品,測定沒食子酸的含量,計算回收率,結果見表1。

表1 加樣回收率實驗結果(n=5)Tab.1 Results of recovery(n=5)

由表 1可知,平均回收率為 99.54%,RSD為0.75%。

2.6 樣品含量測定

取3批樣品,按1.2.2方法制成供試品溶液。取供試品溶液與對照品溶液各10μL,記錄峰面積,計算沒食子酸的平均含量,結果見表2。

表2 樣品含量測定結果(n=3)Tab.2 Determining results of sample content(n=3)

3 結論

采用HPLC法測定五倍子油膏中沒食子酸的含量準確可靠,簡單易行。沒食子酸在0.1136～0.6816 μg范圍內線性關系良好,平均回收率為99.54%(RSD =0.75%)。該方法可用于五倍子中沒食子酸的質量控制。

[1] 李秀萍,李春遠,渠桂榮,等.五倍子的研究概況[J].中醫藥學報, 2002,30(3):72-74.

[2] 江蘇新醫學院.中藥大辭典(上)[M].上海:上海科技出版社, 1986:391-392.

[3] 楊秀榮,朱露霞,臧玉紅.五倍子治療尿布皮炎68例療效觀察[J].中國社區醫師,2004,20(12):40.

[4] Wu-Yuan C D,Chen C Y,Wu R T.Gallotannins inhibits growth, water-insoluble glucan synthesis,and aggregation of mutans streptococci[J].J Dent Res,1988,67(1):51-55.

[5] Chen C P,Lin C C,Namba T.Screening of Taiwanese crude drugs for antibacterial activity againstStreptococcus mutans[J].J Ethnopharmacol,1989,27(3):285-295.

[6] 劉軍蓮,唐德才,金芳.五倍子研究近況[J].中藥材,2002,25 (12):911-914.

[7] 杜瑞蓮,楊中林.五倍子中鞣質提取工藝研究[J].中成藥,2008, 30(6):839-841.

[8] 韓雙,席先蓉,黃平.貴州不同地區五倍子中沒食子酸含量測定與品質評價[J].中國中醫藥信息雜志,2009,16(5):52-53.

[9] 帥益武,尤玉如,袁海娜.五倍子中鞣質的提取、分離純化研究[J].食品科技,2007,(6):125-128.

[10] 國家藥典委員會.中國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社, 2005:45.

Determination of G allic Acid Content in Chinese G all Ointment by HPLC

YANGYue-hui1,JIANG Qing-hua1,LIN Zhi-juan2
(1.Department ofPharmacy,The A f f iliated S hengjing Hospital,China Medical University, S henyang110004,China;2.Dalian Medical University,Dalian116044,China)

A HPLC method has been established to determine the gallic acid content in the Chinese gall ointment.There are good linear relationships within the gallic acid content of 0.1136～0.6816μg(R=0.9998).The regression equation isy=3217x+25.747.The average recovery of gallic acid is 99.54%and the relative standard deviation is 0.75%.This method is simple,accurtate and reliable with high reproducibility,which can be applied to determine the gallic acid content in Chinese gall ointment.

HPLC;Chinese gall ointment;gallic acid

O 657.72

A

1672-5425(2010)06-0090-02

2010-03-01

楊躍輝(1969-),女,湖南長沙人,副主任藥師,研究方向:醫院制劑及醫院藥學。E-mail:yangyh1@sj-hospital.org。