復(fù)肝寧對實驗性肝纖維化大鼠血清標(biāo)志物和肝功能的影響

梁治學(xué)，胡燕，周語平，李蓮英，李其忠

（1．上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海 201203；2．平?jīng)鲠t(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，甘肅平?jīng)?744000；3．甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州 730000）

復(fù)肝寧對實驗性肝纖維化大鼠血清標(biāo)志物和肝功能的影響

梁治學(xué)1，2，胡燕2，周語平3，李蓮英2，李其忠1

（1．上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海 201203；2．平?jīng)鲠t(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，甘肅平?jīng)?744000；3．甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州 730000）

目的觀察中藥復(fù)肝寧對肝纖維化的預(yù)防效果，探討其作用機(jī)理。方法采用豬血清腹腔注射法制成大鼠免疫性肝纖維化模型，觀察復(fù)肝寧對實驗性肝纖維化大鼠血清ALT、AST和血清標(biāo)志物HA、LN、C-Ⅳ含量的影響。結(jié)果實驗性肝纖維化大鼠在應(yīng)用復(fù)肝寧后，血清ALT、AST和血清標(biāo)志物HA、LN、C-Ⅳ含量明顯降低，與病理模型組比較有顯著性差異（P＜0．05）。結(jié)論復(fù)肝寧能有效防止免疫性肝纖維化模型大鼠血清ALT、AST和血清標(biāo)志物HA、LN、CⅣ含量的升高，具有保護(hù)肝細(xì)胞、抑制肝纖維化形成、促進(jìn)膠原降解的作用，從而對肝纖維化具有一定的預(yù)防作用。

復(fù)肝寧；肝纖維化；血清標(biāo)志物；肝功能

隨著對肝纖維化發(fā)生機(jī)制認(rèn)識的不斷深化，現(xiàn)已證實肝纖維化是可逆性病變[1]。減緩、阻止肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展，逆轉(zhuǎn)、降解已經(jīng)形成的肝纖維化，對于治療慢性肝炎和預(yù)防肝硬化、肝癌的發(fā)生，有著重要的實用價值和社會意義。復(fù)肝寧在治療慢性乙型肝炎及肝纖維化的臨床實驗中已取得明顯療效[2]。本實驗主要從檢測肝纖維化大鼠血清標(biāo)志物和血清ALT、AST方面來進(jìn)一步驗證復(fù)肝寧預(yù)防肝纖維化的藥效，并探索其作用機(jī)理。

1 實驗材料與方法

1.1 實驗動物及飼料

合格成年SPF級Wistar大鼠70只，雌雄各半，體重（200± 20）g，動物合格證號:SCXK（甘）2004-007-0001512;飼料為普通大顆粒飼料。大鼠及飼料均由甘肅中醫(yī)學(xué)院SPF級動物實驗中心提供。

1.2 主要藥品及試劑

復(fù)肝寧由黃芪、丹參、當(dāng)歸、苦參、桃仁、川芎、赤芍、莪術(shù)、三棱、柴胡、漢防己、垂盆草組成，其藥量比例為3∶2∶1．2∶1．2∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1，以上藥物購自甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科。中藥水提醇沉處理后1 ml含生藥1．54 g（黃芪、當(dāng)歸用涼水浸泡15分鐘，煎2次，將藥液濃縮至每毫升含生藥1 g。其余藥材用同法水提濃縮后，加無水乙醇醇沉處理，將藥液與黃芪、當(dāng)歸藥液混勻濃縮至每毫升含生藥1．54 g）。秋水仙堿由昆明制藥集團(tuán)公司生產(chǎn)，批號為20031149。豬血清由中美合資民海生物工程公司生產(chǎn)，批號為20041122。ALT、AST試劑盒由北京中生公司生產(chǎn)，批號為010081。HA、LN、C-Ⅳ放免試劑盒由北京北方生物技術(shù)研究所生產(chǎn)，批號為20051020。

1.3 動物分組

將大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為6組:空白對照組10只，病理模型，秋水仙堿，復(fù)肝寧低、中、高劑量組各12只，每組均雌雄各半。

1.4 造模方法

采用豬血清腹腔注射法制成大鼠免疫性肝纖維化模型。除空白對照組外，其余各組均用豬血清白蛋白按文獻(xiàn)方法進(jìn)行造模[3]，每只動物腹腔注射豬血清0．5 ml，每周2次，連續(xù)6周。

1.5 給藥

各用藥組在造模同時給藥，每天1次，至6周結(jié)束。實驗期間各組動物自由飼食，飲用蒸餾水。大鼠用藥量按文獻(xiàn)方法折算[4]。復(fù)肝寧低、中、高劑量組每日分別以復(fù)肝寧3．85g/kg、7．7g/kg、15．4 g/kg靜脈注射給藥；秋水仙堿組每日以秋水仙堿0．1 mg/kg靜脈注射給藥；空白對照組、病理模型組同一時間靜脈注射蒸餾水，劑量為10 ml/kg。

1.6 標(biāo)本采集與處理

實驗結(jié)束時，各組大鼠均摘眼球取全血測定血清ALT、AST和血清標(biāo)志物HA、LN、C-Ⅳ。

1.7 檢測指標(biāo)和方法

血清ALT、AST用自動分析法測定，血清標(biāo)志物HA、LN、CⅣ用放射免疫分析法測定。

1.8 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13．0統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理，用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，2組均數(shù)比較進(jìn)行t檢驗。

2 實驗結(jié)果

2.1 復(fù)肝寧對大鼠血清ALT、AST含量的影響（見表1）

表1 各組大鼠血清ALT、AST含量比較（，U/L）

表1 各組大鼠血清ALT、AST含量比較（，U/L）

注：與病理模型組比較，1）P＜0．05，2）P＜0．01；與秋水仙堿組比較，3）P＜0．01

10 12 12 12 12 12 42．57±5．202）84．94±9．33 58．95±5．522）60．30±6．052）57．94±5．892）47．65±9．672，3）135．40±20．042）307．40±48．90 192．93±38．312）210．04±41．601）195．54±38．322）151．07±22．922，3）組別例數(shù)（例）ALTAST空白對照組病理模型組秋水仙堿組復(fù)肝寧低劑量組復(fù)肝寧中劑量組復(fù)肝寧高劑量組

由表1可見，各用藥組大鼠血清ALT、AST含量均有所降低，與病理模型組比較均有顯著性差異（P＜0．05，P＜0．01）；復(fù)肝寧高劑量組與秋水仙堿組比較有極顯著性差異（P＜0．01）。

2.2 復(fù)肝寧對大鼠血清標(biāo)志物HA、LN、C-Ⅳ含量的影響（見表2）

表2 各組大鼠血清標(biāo)志物HA、LN、C-Ⅳ測定值比較（，ng/ml）

表2 各組大鼠血清標(biāo)志物HA、LN、C-Ⅳ測定值比較（，ng/ml）

注：與病理模型組比較，1）P＜0．05，2）P＜0．01；與秋水仙堿組比較，3）P＜0．01

組別例數(shù)（只）HALNC-Ⅳ空白對照組病理模型組秋水仙堿組復(fù)肝寧低劑量組復(fù)肝寧中劑量組復(fù)肝寧高劑量組10 12 12 12 12 12 163．34±32．332）341．42±39．35 233．56±24．432）242．93±21．972）224．18±30．202）166．23±25．252）24．74±4．542）42．86±4．57 33．90±2．762）34．51±3．472）31．34±3．582）27．71±4．362，3）14．23±2．542）26．36±4．85 20．83±4．801）19．89±4．092）19．42±2．422）15．89±2．202，3）

由表2可見，各用藥組大鼠肝組織中血清標(biāo)志物HA、LN、C-Ⅳ含量均有所降低，與病理模型組比較均有顯著性差異（P＜0．05，P＜0．01）；復(fù)肝寧高劑量組與秋水仙堿組比較有極顯著性差異（P＜0．01）。

3 討論

肝纖維化是多種慢性肝病的共同病理基礎(chǔ)，早期阻斷和逆轉(zhuǎn)肝纖維化是防治各種慢性肝病的關(guān)鍵。周語平教授認(rèn)為肝纖維化總屬本虛標(biāo)實，根據(jù)氣血淤滯、濕淤互結(jié)的病機(jī)特點提出以活血化淤為主，兼益氣養(yǎng)血、柔肝除濕的治療原則，確立復(fù)肝寧為防治肝纖維化的主方。在肝纖維化發(fā)生的過程中，肝細(xì)胞的變性、壞死及炎癥是肝纖維化發(fā)生的前提。血清ALT、AST活性能夠敏感地提示肝細(xì)胞的損傷及其損傷程度，其是反映肝功能的相關(guān)指標(biāo)，其都不同程度地與肝纖維化相關(guān)，其對于判斷疾病的嚴(yán)重性、藥物療效評價及預(yù)后檢測都具有重要意義[5]。ECM（細(xì)胞外基質(zhì)）的沉積和降解失衡是肝纖維化形成的本質(zhì)，恢復(fù)兩者的平衡是治療的根本目的。血清標(biāo)志物HA、LN、C-Ⅳ皆屬于ECM成分，血清標(biāo)志物HA、LN、C-Ⅳ的聯(lián)合檢測是反映肝纖維化的良好指標(biāo)，其對判斷慢性肝炎炎癥程度、肝纖維化程度有重要意義[6]。

本實驗結(jié)果表明:復(fù)肝寧能明顯降低血清ALT、AST和血清標(biāo)志物HA、LN、C-Ⅳ的含量，且與病理模型組比較有顯著性差異，提示該方可通過保護(hù)肝細(xì)胞、減輕炎癥反應(yīng)、抑制膠原合成及膠原分泌細(xì)胞的繁殖、促進(jìn)膠原的降解、減輕膠原的過度沉積，從而直接或間接抑制肝纖維化的形成，起到預(yù)防、逆轉(zhuǎn)肝纖維化的作用，且在一定范圍內(nèi)，劑量越大，效果越好，這也提示如果能進(jìn)一步調(diào)整劑量可望獲得更好的療效。在肝纖維化尚未完全形成之前就開始使用復(fù)肝寧，可以預(yù)防肝纖維化的形成，阻斷肝纖維化的發(fā)展，達(dá)到逆轉(zhuǎn)肝纖維化的目的。

[1]賈克明．加強(qiáng)對乙型病毒性肝炎治療的研究[J]．中華內(nèi)科雜志，2000，39（12）:797．

[2]周語平，劉光煒，楊志軍．復(fù)肝寧對肝炎后肝纖維化患者肝功能及血清標(biāo)志物的影響[J]．甘肅科技，2004，20（5）：125～126．

[3]徐叔云．藥理實驗方法學(xué)[M]．第3版．北京:人民衛(wèi)生出版社，2002．

[4]施新猷．現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實驗動物學(xué)[M]．北京：人民軍醫(yī)出版社，2000．

[5]高春芳，孔憲濤．肝纖維化生化診斷指標(biāo)的選擇和評價[J]．現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2004，20（16）:1571～1574．

[6]張萍．血清LN、CⅣ、PCⅢ、HA對肝纖維化及肝硬化的診斷價值[J]．中國療養(yǎng)醫(yī)學(xué)，2002，11（1）:50．

G424．31

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1671-1246（2010）08-0125-02

本文系甘肅省科學(xué)事業(yè)費(fèi)資助科研項目（QS022-C33-007）