高山紅景天中糖基轉移酶家族cDNA全長基因的克隆

于寒松，張繼星，李彥舫，馬蘭青*，胡耀輝,*

(1.吉林農業大學食品科學與工程學院，吉林 長春 130118；2.內蒙古民族大學生命科學學院，內蒙古 通遼 028043；3.吉林大學植物科學學院，吉林 長春 130062；4.農業部都市農業(北方)重點開放實驗室，北京農學院，北京 102206)

高山紅景天中糖基轉移酶家族cDNA全長基因的克隆

于寒松1，張繼星2，李彥舫3，馬蘭青4,*，胡耀輝1,*

(1.吉林農業大學食品科學與工程學院，吉林 長春 130118；2.內蒙古民族大學生命科學學院，內蒙古 通遼 028043；3.吉林大學植物科學學院，吉林 長春 130062；4.農業部都市農業(北方)重點開放實驗室，北京農學院，北京 102206)

為了獲得高山紅景天中紅景天苷生物合成關鍵酶——UDP-糖基轉移酶家族基因的全長cDNA序列，采用在線簡并引物設計軟件結合3′-RACE技術獲得兩個糖基轉移酶基因的3′端部分序列，進一步采用不同的5′-RACE試劑盒擴增兩個基因的5′端序列，結果顯示利用Takara公司的試劑盒擴增可以得到cDNA全長序列(GenBank登錄號為EF508689和EU567325)，而采用Invitrogen公司的試劑盒得到的序列不包括全部開放讀碼框。實驗證明，利用Takara公司的SMARTerTMRACE cDNA Amplification Kit克隆獲得基因全長序列的比率更高。

糖基轉移酶；基因克隆；cDNA末端快速克隆法(RACE)；高山紅景天

Abstract：In order to obtain the critical enzyme for the synthesis ofRhodiola sachalinensisglycoside, two putative UDP-glycosyltransferase (UGT) cDNAs (GenBank accession number, EF508689和EU567325) were isolated fromR. sachalinensi.The primers were designed for 3＇-rapid amplification of cDNA ends (RACE) based on the consensus hybrid oligonucleotide primers (CODEHOP) strategy by the Block Maker program. A full-length cDNA sequence (Genbank accession numbers:EF508689 and EU567325) was obtained through the amplification using a SMARTerTMRACE cDNA Amplification Kit (TaKaRa,Dalian, China), whereas the sequence obtained using a 5'-RACE system (version 2.0, InvitrogenTMLife Technologies) contained no full-open reading frame.The cloning efficient of two 5'-RACE systems was investigated. Results exhibited that TaKaRa SMARTerTMRACE cDNA Amplification Kit was more efficient in complete cDNA sequence cloning, compared with the InvitrogenTM5'-RACE system.

Key words：glycosyltransferase；gene cloning；rapid amplification of cDNA ends (RACE)；Rhodiola sachalinensis

植物次生代謝物質在植物生命活動過程中起著重要作用，如細胞解毒、信號轉導、防御機制等[1-3]。對人類而言，很多植物次生代謝物具有很多生理功能，也是保健品和醫藥品的重要來源[4]。現階段天然產物己越來越多地被應用于保健食品、天然香料、天然色素和藥物等產品的生產上[5-6]。但是，植物雖然能合成上萬種次生代謝產物，但是它們的含量都很低。……