人參配伍五靈脂人參總皂苷的含量變化規律研究

北京市藥品監督管理局海淀分局（100097） 李德全

中藥合理的配伍組合是方劑的核心，也是復方不同于單味藥的主要奧秘所在。我國古代對藥物的配伍禁忌主要有“十八反”和“十九畏”的記載。人參最早記載于我國第一部藥物學專著《神農本草經》，功用為：“主補五臟，安精神，定魂魄，止驚悸，明目，開心益智，久服輕身延年。”長期的醫療實踐證實了人參補氣藥之首的地位。近年來，我國醫藥界更從藥理、臨床等方面研究了人參延緩衰老的藥理、臨床作用。

“人參最畏五靈脂”出自“十九畏”，人參與五靈脂一直被視為配伍禁忌，但在臨床上二者也經常有配伍應用。陳馥馨從古今67424個方劑中統計到人參、五靈脂合用的有31個[1]。名老中醫姜春華等亦以人參和五靈脂配伍用于臨床[2]。二者配伍在毒性實驗[3]、抗應激實驗（游泳耗竭時間、缺氧耐受能力、低溫存活時間）[4][5]都做了大量研究。而二者配伍后對藥物成分方面的影響變化尚無人研究。人參總皂苷是人參的主要有效成分之一，有廣泛的生物活性，在抗衰老方面有廣泛的應用。目前研究報道的也較多，如潘鑫鑫[6]等研究發現，人參總皂苷有減少自由基對中樞神經系統的損傷和改善衰老模型小鼠的免疫和內分泌系統等作用，具有一定的抗衰老作用。本實驗用紫外分光光度法測定人參與五靈脂配伍后其總皂苷的含量變化，考察五靈脂對人參有效成分人參總皂苷的影響，為二者配伍在臨床上是否能應用于抗衰老方面做初步探討。

1 實驗用藥材與材料

1.1 實驗用中藥材 人參為五加科植物人參Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根（生曬參），產地遼寧，五靈脂（鼯鼠科橙足鼯鼠Trogopterus Xanthies的干燥糞便），產地山西。

1.2 實驗材料 儀器：METTLER AE240電子天平；HITACHI U2000可見紫外分光光度計，水浴鍋。試劑：香草醛、冰醋酸、高氯酸、甲醇。對照品：中國藥品生物制品檢定所Re（批號110754-200218）。

2 樣品及有關溶液的制備與分組

2.1 分組 共分為6組，即A：人參20g單煎；B：五靈脂20g單煎；C：人參20g、五靈脂20g共煎；D：人參20g、五靈脂20g單煎后混合；E：人參20g、五靈脂10g共煎；F：人參20g、五靈脂40g共煎。

2.2 實驗溶液制備 ①各組加入15倍量水煎煮兩次，頭煎為1小時，后倒出提取液，再加入15倍量水再煎，第二煎半小時，后合并提取液。將合并液抽濾后濃縮至與原藥材1：1之量。②用等量乙醚（每次20ml）萃取4次，棄去乙醚層。再用正丁醇萃取4次（每次20ml），合并正丁醇層，水層棄去。③將正丁醇的萃取層用1%氫氧化鈉洗3～4次（每次20ml），棄去氫氧化鈉溶液層。后用正丁醇飽和水溶液洗至pH值在7左右。④回收正丁醇，將剩余物用甲醇溶解，定容在10ml容量瓶內。檢測前用活性炭脫色（1小時，60℃水浴）

注：A是人參樣品掃描曲線，B為人參皂苷Re掃描曲線，C為五靈脂樣品（陰性空白對照掃描圖），與基線齊平無干擾

2.3 對照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Re2.3mg置5ml容量瓶中，加甲醇使其溶解后稀釋至刻度，作為儲備溶液備用。

3 方法學研究

3.1 測定波長的確定 經過掃描，樣品和對照品的最大吸收波長均為543.5±0.5nm，吸收曲線形狀近似，陰性空白對照（五靈脂）無干擾。

3.2 陰性掃描對照 未顯色前的人參樣品掃描圖，沒有吸收。

3.3 線性關系考察 精密吸取人參皂苷Re對照品0.0023g置5ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取0.05ml，0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml置12ml具塞試管中100℃水浴揮干劑，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，60℃水浴顯色15min，冰浴冷卻至常溫，加入5ml冰醋酸稀釋搖勻。在543.5nm處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，以標準品體積為橫坐標計算工作曲線的回歸方程為：y=3.323x-0.0196（r=0.9994）。

附表1 線性關系考察

附表3 穩定性考察

附表4 精密度考察

附表5 重現性考察

由附表1、附表2的實驗結果可見，人參皂苷對照品在0.023～0.184mg范圍內質量與吸收度呈良好線性關系。

3.4 穩定性考察 在0，4，8，12，16小時每個時間點精密量取樣品0.04ml，置10ml具塞試管中100℃水浴揮干溶劑，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，60℃水浴顯色15min，冰浴冷卻至常溫，加入5ml冰醋酸稀釋搖勻。在543.5nm處測定吸收度，由附表1的數據計算RSD＝1.65%，樣品溶液穩定性良好。實驗數據見附表3。

3.5 精密度考察 分別精密吸取同一份人參樣品5份0.04ml，同上法顯色后測定吸收度，實驗數據見附表4，由附表4的數據計算RSD=1.26%，本實驗精密度良好。

3.6 重現性考察 人參平行做5份樣品，取0.04ml，顯色同3.5，在543.5nm處測定吸收度。由附表5的數據計算RSD=3.2%，本實驗重現性良好。

3.7 回收率實驗 精密稱取已知量樣品，準確加入一定量的標準品0.1ml，按前述方法處理，顯色進行含量測定，實驗數據見附表6。平均回收率98.96%。本法具有良好的回收率。

4 有效部位樣品總皂苷元含量測定

量取按上述方法制備的樣品各0.04ml同上顯色方法，隨行空白，在543.5nm處測定吸收度，并由工作曲線計算含量，見附表7。

附表6 加樣回收率

附表7 樣品含量

5 結果與討論

測定結果表明，二者配伍后人參總皂苷含量下降，人參五靈脂混合煎煮后皂苷含量下降尤其明顯，且隨著五靈脂用量的增大，人參總皂苷含量下降明顯，成正比關系，即人參:五靈脂用量為2:1時含量下降16%，人參:五靈脂用量為1:1時含量下降31%，人參:五靈脂用量為1:2時含量下降51.74%。

二者1：1用量單獨煎煮后再混合組的人參皂苷含量變化不大，僅下降1.7%，而1：1用量混合煎煮則下降約31%，二者相差很大，顯示混合煎煮的方式使人參總皂苷含量顯著下降。

上述數據表明五靈脂的用量和二者的煎煮方式是影響人參總皂苷含量的兩個重要因素。

人參五靈脂配伍后使人參的皂苷類有效成分含量下降，這些變化必然對人參的藥理作用產生影響，由于皂苷類成分在抗衰老和對中樞神經系統影響突出，因此在臨床應用人參益智和抗衰老的作用時，應避免與五靈脂一同使用。本實驗表明人參和五靈脂在益智和抗衰老的范圍內的配伍使用應屬于七情中的“相惡”范疇，“人參最畏五靈脂”的說法是有一定科學依據的。