消脂護(hù)肝片中總黃酮的含量測(cè)定

陳蕾，姜林

（新疆維吾爾自治區(qū)區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830000）

消脂護(hù)肝片中總黃酮的含量測(cè)定

陳蕾*，姜林

（新疆維吾爾自治區(qū)區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830000）

目的：建立消脂護(hù)肝片中總黃酮的含量測(cè)定方法。方法：采用分光光度法，以蘆丁為對(duì)照品，對(duì)其進(jìn)行絡(luò)合顯色，在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，從而測(cè)定消脂護(hù)肝片中總黃酮的含量。結(jié)果：線性范圍在0.008～0.08 mg·mL－1（r＝0.999 7），平均回收率為97.0%，RSD＝1.84%（n＝6）。結(jié)論：該法簡(jiǎn)便易行、重現(xiàn)性好、結(jié)果可靠，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

消脂護(hù)肝片；總黃酮；分光光度法

消脂護(hù)肝片為新疆維吾爾自治區(qū)區(qū)中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑。由郁金、赤芍、白芍、丹參、山楂、決明子、瓜蔞、海藻、昆布、香附、雞內(nèi)金、黨參、西紅花13味中藥組成，具有疏肝、行氣、活血的功能，用于高血脂癥、脂肪肝、早期肝纖維化。主要化學(xué)成分有黃酮類、苷類、有機(jī)酸、生物堿類、多糖等。該制劑原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)除片劑檢查通項(xiàng)外，只有芍藥苷的薄層色譜。本實(shí)驗(yàn)采用分光光度法對(duì)總黃酮進(jìn)行含量測(cè)定，通過(guò)對(duì)消脂護(hù)肝片中總黃酮的含量測(cè)定，為該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供定量依據(jù)?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

UV-cintra20紫外分光光度計(jì)（澳大利亞GBC scientific Equipment），蘆丁對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100080-200707），消脂護(hù)肝片（批號(hào)080707，081223，、090511），水為本院實(shí)驗(yàn)中心超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液制備［1-2］

精密稱取蘆丁對(duì)照品40 mg，置100 mL容量瓶中，加入甲醇50 mL溶解，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得0.4 mg·mL－1的對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液制備［3-4］

精密稱取樣品1 g，加入70%乙醇50mL，超聲提取30 min（功率250 W，頻率59 KHz），放冷，過(guò)濾待用，作為供試品溶液。

2.3 波長(zhǎng)的選擇［5-6］

對(duì)蘆丁對(duì)照品溶液和供試品溶液從400～800 nm進(jìn)行掃描，得到紫外－可見(jiàn)吸光圖譜，見(jiàn)圖1。從圖1可知510 nm為最大吸收波長(zhǎng)。

圖1 蘆丁及供試品溶液的紫外-可見(jiàn)圖譜

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備［7-8］

精密量取對(duì)照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置于25 mL容量瓶中，各加水至6 mL。加入5%亞硝酸鈉溶液1 mL，使混勻，放置6 min；加入10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min；加入氫氧化鈉試液10 mL，再加入水至刻度，搖勻，放置15 min。在510 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。以吸收度為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算得回歸方程Y＝0.053 7X＋0.001 0（r＝0.999 7），表明蘆丁對(duì)照品溶液在0.008～0.08 mg·mL－1呈良好的線性關(guān)系。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別于配制后0，10，20，30，40，50，60，90 min，依照“2.4”項(xiàng)方法測(cè)定吸光度，計(jì)算RSD＝2.33%，結(jié)果表明溶液制備后90 min穩(wěn)定。

2.6 精密度試驗(yàn)

取同一供試品溶液6份，依照“2.4”項(xiàng)方法測(cè)定吸光度，計(jì)算RSD＝1.39%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取供試品溶液1份，依照“2.4”項(xiàng)方法重復(fù)測(cè)定吸光度值6次，計(jì)算RSD＝0.40%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn)

制備同一濃度供試品溶液6份，依照“2.4”項(xiàng)方法測(cè)定吸光度，計(jì)算RSD＝0.98%，結(jié)果表明重現(xiàn)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取樣品1.0 g，按2.2項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，分別精密量取供試品溶液1mL，共6份，每份分別加入一定量蘆丁對(duì)照品，按2.4項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 蘆丁對(duì)照品加樣回收率

2.10 樣品含量測(cè)定

取批號(hào)080707，081223，090511的消脂護(hù)肝片，分別按2.2項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，各精密量取1 mL按2.4項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，代入回歸方程計(jì)算消脂護(hù)肝片中總黃酮含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品中總黃酮含量測(cè)定

根據(jù)以上結(jié)果，確定該制劑中總黃酮含量應(yīng)不低于35 mg·g－1。

3 討論

目前，文獻(xiàn)報(bào)道總黃酮的含量測(cè)定方法［1-9］，主要有紫外分光光度法、HPLC、熒光光度法等。本試驗(yàn)采用分光光度法測(cè)定消脂護(hù)肝片中總黃酮的含量，簡(jiǎn)便易行、重現(xiàn)性好、結(jié)果可靠。本實(shí)驗(yàn)以蘆丁為對(duì)照品，經(jīng)波長(zhǎng)掃描確定最大吸收波長(zhǎng)510 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

黃酮類化合物易溶于甲醇、乙醇等溶劑，甲醇毒性大，且浸透能力強(qiáng)，提取范圍廣，雜質(zhì)較多，故采用乙醇做溶劑提取消脂護(hù)肝片中總黃酮。通過(guò)比較超聲提取、回流提取，結(jié)果表明超聲提取效率明顯高于回流提取，且超聲提取時(shí)間短，操作方便，而且不用加熱，避免高溫對(duì)黃酮結(jié)構(gòu)的影響，故采用超聲提取法。

在實(shí)驗(yàn)中，我們通過(guò)考察樣品、蘆丁對(duì)照品在400～800 nm波長(zhǎng)范圍的光譜圖，結(jié)果樣品與蘆丁對(duì)照品的吸收光譜在510 nm為一平峰，故選擇510 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。在實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)供試品溶液的顯色受溫度影響且隨時(shí)間有變化，因此比色測(cè)定應(yīng)平行操作，并按照規(guī)定時(shí)間進(jìn)行。黃酮類化合物母核上多帶有酚羥基，對(duì)光和空氣中的氧很敏感，其溶液長(zhǎng)時(shí)間久置后吸光度會(huì)下降，因此，待測(cè)液不宜久放，并避光低溫保存。

［1］邵彩云.蒙藥文冠木不同部位總黃酮的含量測(cè)定［J］.中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2005，11（1）：28-29.

［2］劉斌，石任兵，周素蓉.苦參湯有效部位總黃酮含量測(cè)定方法研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2004，10（6）：24-26.

［3］黃永林，趙志國(guó)，文永新.不同部位艾納香中總黃酮的含量測(cè)定［J］.廣西植物，2006，26（4）：453-455.

［4］黃永林，阮俊，文永新，等.不同部位紫玉盤總黃酮的含量測(cè)定［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006，17（10）：1900-1901.

［5］宋永強(qiáng)，湛樂(lè)剛.分光光度法測(cè)定裸花紫珠片中總黃酮含量［J］.海南醫(yī)學(xué)，2005，16（6）：152.

［6］謝鳴，彭鑲心，劉超，等.紫外分光光度法側(cè)定夏枯草微丸中總黃酮的含量［J］.西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，32（1）：136.

［7］郭亞健，范麗，王曉強(qiáng).關(guān)于NaNO2-Al（NO3）3-NaOH比色法測(cè)定總黃酮方法的探討［J］.藥物分析雜志，2002，22（2）：97-99.

［8］馬陶陶，張群林，李俊，等.三氯化鋁比色法測(cè)定中藥總黃酮方法的探討［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19（1）：54-56.

［9］楊書良.HPLC測(cè)定雙果膠囊中總黃酮的含量［J］.中國(guó)中藥雜志，2004，29（6）：586.

Determination of Total Flavones in Xiaozhihugan Tablets

Chen Lei，Jiang Lin
（Traditional Chinese Medical Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi Xinjiang830000，China）

Objective：To establish ultraviolet sepctrophotometry for the determination of total flavones in Xiaozhihugan tablets.Methods：Quercetin was selected as reference material，and the samples were determined at510 nm.Results：The linear range for quercetin was 0.008～0.08 mg·mL－1（r＝0.999 7）.The recovery rate was 97.0%，RSD＝1.84%（n＝6）.Conclusion：This method is easy to handle with good accuracy and reproducibility，and is suitable for the quality control of Xiaozhihugan tablets.

Xiaozhihugan tablets；Total Flavones；Sepctrophotometry

*陳蕾，E-mail：leibaobao＠sina.cn

2010-06-05）