基于納米金復(fù)合探針的基因芯片膜轉(zhuǎn)印檢測法

李海燕，景奉香，高秋月，賈春平，陳季武，金慶輝，趙建龍

1 華東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，上海 200062

2 中國科學(xué)院上海微系統(tǒng)與信息技術(shù)研究所，上海 200050

生物技術(shù)與方法

基于納米金復(fù)合探針的基因芯片膜轉(zhuǎn)印檢測法

李海燕1,2，景奉香2，高秋月1，賈春平2，陳季武1，金慶輝2，趙建龍2

1 華東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，上海 200062

2 中國科學(xué)院上海微系統(tǒng)與信息技術(shù)研究所，上海 200050

建立了一種基于納米金復(fù)合探針的基因芯片膜轉(zhuǎn)印核酸檢測新方法。首先，用納米金顆粒同時標(biāo)記檢測探針P2和兩種長短不同且生物素化的信號探針 (T10,T40)，其中檢測探針與靶DNA 5′端互補，兩種信號探針起信號放大作用。當(dāng)靶DNA分子存在時，芯片表面捕捉探針P1 (與靶DNA分子3′端互補) 通過堿基互補配對原則結(jié)合靶DNA分子，將其固定于芯片上，同時檢測探針通過與靶DNA 5′端互補配對將納米金復(fù)合探針結(jié)合于芯片表面，結(jié)果在芯片表面形成“三明治”結(jié)構(gòu)，后通過鏈霉親和素-生物素反應(yīng)，使芯片表面對應(yīng)有靶 DNA分子的部位結(jié)合上堿性磷酸酶，最后利用BCIP/NBT顯色系統(tǒng)使芯片表面信號結(jié)果鏡面轉(zhuǎn)印至尼龍膜表面。當(dāng)檢測探針和信號探針摩爾比為1∶10，T10和T40摩爾比為9∶1時可以檢測1 pmol/L合成靶DNA分子或0.23 pmol/L結(jié)核分枝桿菌16S rDNA PCR擴增產(chǎn)物，檢測結(jié)果通過普通的光學(xué)掃描儀讀取或肉眼直接判讀信號有無。本芯片檢測系統(tǒng)靈敏度高，操作方法簡單、快速，不需要特殊儀器設(shè)備，在生物分子的檢測方面具有較高的應(yīng)用價值。

納米金復(fù)合探針，基因芯片膜……