5株奶牛乳房炎鏈球菌的鑒定

■ 賈保中 王建軍 包頭市家畜改良工作站

奶牛乳房炎是奶牛乳房的乳腺組織或腺體發炎而形成的乳房疾病，是危害奶牛養殖業的主要疾病之一。北京、上海、廣州、蘭州等城市的調查結果顯示，乳房炎是奶牛場最嚴重的疾病之一，發病率達20%～70%。乳房炎可造成奶牛產奶量下降，原料奶品質降低和廢棄。由于國內不少奶牛場濫用抗生素，耐藥菌株不斷出現，很多抗生素失去了治療作用，使乳房炎的發病率居高不下。

引起奶牛乳房炎的原因有物理因素、化學因素、機械因素、微生物的感染等。在引起乳房炎的各種因素中，微生物的感染又占相當大的比例，微生物又可分為細菌、病毒等。其中鏈球菌是主要細菌之一。目前，鏈球菌屬共有30多種，比較常見的有10多種，其中，無乳鏈球菌為奶牛乳房炎最常見的致病菌。該菌能引起嬰兒敗血癥、腦膜炎和肺炎等，人醫臨床上對該菌以B群鏈球菌相稱。該菌感染牛、山羊、綿羊發生乳腺炎，不產生明顯的免疫，目前也無可靠的多價疫苗。本實驗對送檢的奶樣進行了分離，對其中分離到的5株鏈球菌生物學特性進行了研究。

1 實驗材料

1.1 乳樣

由奶牛場工作人員無菌操作，采集乳樣送至實驗室待檢。

1.2 藥敏紙片

由包頭市動物疫病預防控制中心化驗室提供。

1.3 標準菌株

葡萄球菌1株（呈β－溶血），由內蒙古農業大學動物科學與醫學院提供。

1.4 實驗動物

綿羊、小白鼠，由包頭市動物疫病預防控制中心化驗室提供。

圖1 實驗步驟

2 實驗步驟與方法

2.1 實驗步驟

本實驗的步驟如圖1所示。

2.2 實驗方法

2.2.1 形態學檢查

將乳樣進行涂片，革蘭氏染色之后，置顯微鏡下觀察細菌的形狀、排列和染色特性，初步判斷樣品中是否含有鏈球菌。

各層次、各專業的職業教育均是以職業能力的培養為核心，并按照核心崗位的需求來構建課程體系，[2]這就要求中高職在市場調研的基礎上共同協商統籌專業課程。但當前中高職銜接過程中關于課程設置的問題較為突出。文化課方面，中職堅持“簡單、夠用”，高職則強調“深度、廣度”。因此，中職學生進入高職院校后，學習文化課普遍感到吃力，尤其在高等數學和大學英語等級考試方面的能力較差，較難完成專業培養目標要求。②專業課程方面。中高職在專業課程方面存在的最大問題是課程重復現象嚴重、課程先后順序不合理、課程內容層次不分明。

2.2.2 分離培養

根據所要研究的鏈球菌的培養特性以及生長特性，選擇血液瓊脂培養基進行分離培養，獲得5株細菌。

2.2.3 細菌的培養特性及生長特性檢查

主要進行細菌培養特性檢查（營養物質、氧氣與CO2需要、溫度要求、pH值及對氯化鈉耐受性），細菌生長表現檢查（如菌落、生長表現等）及生化物性檢查（如糖代謝實驗、特征性生化實驗——CAMP實驗）。

2.2.4 細菌對抗菌藥物的敏感實驗

將細菌接種于血清肉湯培養基中，培養24h后，進行無菌操作，用無菌吸管吸取肉湯0.1mL，滴于血液瓊脂培養基平皿中。用推棒先沿一個方向涂布，然后反方向涂布，使其涂布均勻，之后加蓋放置。待平皿稍干，用滅菌的鑷子將藥片貼于已經平均分成若干份、標記且已涂布的平皿上，并輕壓使其貼在培養基表面，藥敏片一旦接觸平板就不要移動。藥敏片之間的距離應適當，避免互相影響，之后置37℃培養24h，觀察結果。測量抑菌圈直徑，按其大小報告敏感、中度敏感或耐藥。

2.2.5 細菌致病性實驗——動物實驗

3 實驗結果

3.1 形態

各樣品涂片、染色鏡檢可觀察到革蘭氏陽性菌長短不一的、鏈狀排列的球形或卵圓形的細菌，初步判斷為鏈球菌。

3.2 培養特性

營養要求比較高，普通瓊脂上生長不良，血液瓊脂上呈細小、灰白色、圓而微凸的菌落，有光澤，濕潤、閃光，呈露滴狀。血液瓊脂斜面上生長量中等，呈現類似一層灰白色的膜，將瓊脂斜面全部覆蓋，且邊緣整齊；無其它氣味，血液瓊脂無其它顏色或其它變化。從培養特性上看符合鏈球菌的所有培養特性。

3.3 生化特性

3.3.1 糖類代謝

根據糖類實驗結果（表1）可知，此5株菌接近于無乳鏈球菌。

3.3.2 CAMP實驗

實驗結果表明，5株細菌在交接處出現箭頭型溶血，可確定5株菌均為無乳鏈球菌。

3.3.3 藥物敏感性

此5株菌的藥物敏感性實驗結果如表2所示。

3.3.4 致病性

小白鼠1周之內沒有死亡，致病性不強。

4 討論與小結

4.1 經實驗鑒定，5株鏈球菌均為無乳鏈球菌，屬于革蘭氏陽性菌，是B群鏈球菌的成員，呈α溶血。從培養特性可知，無乳鏈球菌營養要求高，在普通瓊脂營養基中生長不良，5%血液培養基上生長也不是太好。實驗時要考慮加大血液培養基中血液的比例。糖類實驗中，5株無乳鏈球菌的結果并不完全一致，可能是因為5株無乳鏈球菌抗原構造不同而使結果不一致。此5株無乳鏈球菌未產生很強的耐藥性，對多數抗生素敏感，而只對少數抗生素產生了耐藥性。

表1 糖類代謝結果

表2 藥物敏感性

4.2 鏈球菌是環境性病原微生物，它們常寄生在牛體及周圍環境中，因此搞好環境衛生對于預防乳房炎極為重要，以下方法可供參考。一是要搞好周圍環境衛生，牛舍、運動場要清潔、干燥，通風換氣良好；要定期消毒，不積留糞尿；墊草要干、軟、清潔。二是要搞好牛體衛生，經常刷拭牛體，保持清潔。據報道，牛體、尾、后肢和乳頭細菌占全身的50%，因此要特別注意后肢、尾部和乳房的衛生狀況。三是要盡量減少應激反應和外傷因素，增加營養，提高免疫力，防止其它疾病的繼發，還要規范擠奶操作。

［1］黃青云．畜牧微生物學．北京：中國農業出版社，2005

［2］馬學恩．家畜病理學．北京：中國農業出版社，2007

［3］耿永鑫．獸醫臨床診斷學．北京：中國農業出版社，2006