鹵制品中人工合成著色劑檢測方法的探討

陳 磊

(上海鐵路局蚌埠疾病預防控制中心,安徽蚌埠 233000)

鹵制品中人工合成著色劑檢測方法的探討

陳 磊

(上海鐵路局蚌埠疾病預防控制中心,安徽蚌埠 233000)

目的:探討鹵制品中人工合成著色劑的檢測方法。方法:鹵制品經石油醚脫脂,乙醇氨水解析,超聲波振蕩提取,水浴揮干后進行聚酰胺粉吸附,分別用甲醇-甲酸洗脫,乙醇-氨解析后,水浴近干定容,采用C18色譜柱(250nm×46nm,5μm),流動相為0.02mol/L乙酸銨-甲醇梯度洗脫,254nm波長下檢測,保留時間定性,峰面積定量。結果:測定的合成著色劑峰面積與含量在1.0～50.0μg/ml濃度范圍內成良好線性關系,相關系數γ均大于0. 999,相對標準偏差在1.18%～3.35%之間。回收率在87.5%～97.1%之間。結論:該方法操作簡便,準確可靠,適用鹵制品中人工合成著色劑的測定。

鹵制品;人工合成色素;高效液相色譜法

人工合成色素是食品中添加的非營養成分,而人工合成色素主要是以苯、甲苯、萘等化工產品為原料,經有機反應化合而成的化合物,這類色素大多都具有一定毒性,尤以偶氮化合物合成著色劑的致癌作用更明顯。某些不法商販為使鹵制品顏色鮮艷誘人,會添加合成著色劑。但由于鹵制品具有高脂肪、高蛋白質特性,給檢驗的前處理工作帶來很大麻煩。目前國家標準中沒有具體規定前處理方法[1],本文結合實際工作和有關文獻報道[2]-[3],挑選偶氮化合物合成著色劑中日落黃、胭脂紅、莧菜紅為代表,建立了有效地測定鹵制品中合成著色劑的前處理方法,操作簡便,準確可靠。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

Waters高效液相色譜儀(2487檢測器),ER-180A電子天平,PHS-T4電位儀。

1.2 檢測試劑

日落黃標準品 GBW(E)100003a濃度0.50mg/ml(國家標準物質研究中心)

胭脂紅標準品 GBW(E)100004a濃度0.50mg/ml(國家標準物質研究中心)

莧菜紅標準品 GBW(E)100002a濃度0.50mg/ml(國家標準物質研究中心)

乙酸銨溶液(0.02mol/L);甲醇(色譜純);甲醇+甲酸(6+4);乙醇+氨+水溶液(無水乙醇7+氨水2+水1);石油醚;氨水(1+1);PH=4的純水。

1.3 色譜條件

按GB/T5009.35-2003進行HPLC分析。

色譜柱:Waters C18色譜柱(250nm×46nm,5μm),柱溫30℃,檢測波長254nm,進樣量:20μl;流動相:乙酸銨溶液(0.02mol/L)-甲醇 (色譜純),梯度洗脫;流量: 1ml/min。

1.4 樣品處理

稱取5g已粉碎均勻樣品,以石油醚分3次提取脂肪,傾去石油醚后,移入比色管,加入乙醇+氨+水溶液30ml, 70℃超聲8～10分鐘,充分提取色素,將乙醇-氨-色素濾液通過G3垂融漏斗抽濾,再用少量乙醇+氨+水溶液反復洗滌殘渣,抽濾后合并濾液。水浴除去乙醇和氨水,待濃縮至約2ml,取下加水溶解色素,用氨水(1+1)調節至PH=6,加熱至60℃,將1～2g聚酰胺粉加入,攪拌均勻,以G3垂融漏斗抽濾,用PH=4的60℃純水洗滌3～5次,然后用甲醇+甲酸(6+4)溶液洗滌3～5次,除去天然色素,再用水洗至中性,最后用乙醇+氨+水溶液解吸3～5次,收集解吸液,調節至PH=7,水浴蒸發到近干,加純水定容至5ml,經0.45μm水相濾膜過濾后直接進樣,保留時間定性,峰面積定量。

1.5 標準溶液的配制

精密吸取日落黃、胭脂紅、莧菜紅標準液,分別配成1.0、2.5、5.0、10.0、25.0,50.0μg/ml的混合標準溶液系列,按 GB/T5009.35-2003進行 HPLC分析,繪制標準曲線。

2 結果與討論

2.1 樣品前處理與探討

由于鹵制品具有高脂肪、高蛋白質特性,色素提取困難,因此,首先要對樣品進行脫脂,減少脂肪對色素溶出的影響。在用石油醚提取脂肪時,可以溫水浴加熱,可促進脂肪溶解;利用乙醇+氨+水溶液作為提取溶劑,能夠提高色素的溶出率,同時減少蛋白溶出造成的影響;超聲波能夠破壞樣品的油包水平衡,促進樣品中色素更加充分地溶于水,70℃超聲8～10分鐘可使色素全部溶出。在水浴揮干乙醇-氨時,一般溫度控制在80～85℃,揮發至2ml即可,防止影響回收率;使用甲醇+甲酸(6+4)溶液洗脫色素吸附解析液,可除去天然色素及少量殘留的脂肪,保證出峰效果。

2.2 線性與檢出限

將標準溶液系列按按 GB/T5009.35-2003進行HPLC分析,保留時間定性,峰面積定量。得到表1:出峰時間,相關系數及檢出限(以10倍儀器噪聲所對應添加劑的量計算檢出限),結果表明各組分在1.0～50.0μg/ml的濃度范圍內線性關系良好,具體色譜圖見圖1。

表1 出峰時間,相關系數及檢出限

圖1 混合標準液色譜圖

2.3 回收率與方法精密度

采用空白添加標準品方式,分別加入10.0、50.0μg/ml的標液,按1.4前處理方法處理后,進行重復性實驗(n= 3),測定結果見表2。

表2 測定結果

3 小結

鹵制品具有高脂肪、高蛋白質特性,給實驗分析特別是前處理造成很大麻煩,容易使實驗結果偏離。本實驗將樣品經石油醚脫脂后,采用乙醇+氨+水溶液直接提取色素,待水浴濃縮后加水溶解再進行吸附解析,方法簡便。所測三種人工合成色素最低檢測限均低于國家現行標準要求,回收率在87.5%～97.1%之間,相對標準偏差在1.18%～3.35%之間,證明結果靈敏,準確,適用鹵制品中人工合成著色劑地測定。

[1] GB/T5009.35-2003食品中合成著色劑的測定[S].

[2] 牛晉陽,郭文萍,趙榕.高效液相色譜法測定肉制品中的著色劑[J].肉類工業,2007,312(4):23-26.

[3] 歐陽燕玲,陳玲,謝維平.肉制品中人工合成著色劑測定前處理方法的研究[J].中國衛生檢驗雜志,2006, 16(10):1269.

責任編輯:張彩云

TS202.3

A

1671-8275(2010)03-0141-02

2009-12-20

陳磊(1977-),男,江蘇蘇州人,上海鐵路局蚌埠疾病預防控制中心理化檢驗技師。