肉豆蔻的化學(xué)成分研究

張蕾，徐云峰，沈碩，曾毅梅，彭勍，郝淑娟，李寧，王金輝*

(1.沈陽(yáng)藥科大學(xué) 中藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016；2.沈陽(yáng)化工學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110142)

化學(xué)成分

肉豆蔻的化學(xué)成分研究

張蕾1，徐云峰1，沈碩1，曾毅梅1，彭勍1，郝淑娟2，李寧1，王金輝1*

(1.沈陽(yáng)藥科大學(xué) 中藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016；2.沈陽(yáng)化工學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110142)

目的：研究肉豆蔻(MyristicafragransHoutt)的化學(xué)成分。方法：采用反復(fù)硅膠柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜、開(kāi)放ODS柱色譜和HPLC等手段分離化合物，通過(guò)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)分析確定化合物的結(jié)構(gòu)。結(jié)果：在肉豆蔻70%乙醇滲漉物中分離得到7個(gè)已知化合物，分別鑒定為：3-(3，4-二甲氧基苯基)-1，2-丙二醇(1)、反式-3，4-二甲氧基肉桂酸(2)、2-羥基-3-甲氧基-5-(2-丙烯基)苯酚(3)、去氫二異丁香酚(4)、愈創(chuàng)木素(5)、鄰苯二甲酸(6)、熊果酸(7)。結(jié)論：化合物1～3、6為首次從肉豆蔻屬植物中分離得到，化合物4、5用圓二色譜法測(cè)定了其絕對(duì)構(gòu)型。

肉豆蔻；肉豆蔻屬；化學(xué)成分；種仁

肉豆蔻為肉豆蔻科植物肉豆蔻MyristicafragransHoutt.除去假種皮的成熟干燥種仁，又名迦拘勒、豆蔻、玉果等，主產(chǎn)于印度尼西亞、馬來(lái)西亞、斯里蘭卡、巴西等地。我國(guó)在臺(tái)灣、廣東、云南、海南等地有引入栽培品[1]。肉豆蔻性溫、味辛，具溫中行氣、澀腸止瀉之功，用于脾胃虛寒、久瀉不止、脘腹脹痛、食少?lài)I吐。現(xiàn)代研究表明，肉豆蔻具有抗炎、抗菌、抗腫瘤、止瀉等功效。

肉豆蔻中主要成分為揮發(fā)油、脂肪油、苯丙素和木脂素等，近年來(lái)對(duì)于肉豆蔻化學(xué)成分的研究國(guó)內(nèi)外都有報(bào)道，不但發(fā)現(xiàn)了新的新木脂素類(lèi)化合物[2]，而且有學(xué)者陸續(xù)發(fā)現(xiàn)同屬植物及肉豆蔻中含有黃酮類(lèi)成分[3-5]。為了進(jìn)一步闡明肉豆蔻的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，更好地開(kāi)發(fā)利用藥用植物資源，作者從肉豆蔻70%乙醇滲漉物中分離得到7個(gè)化合物，通過(guò)化合物的理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)分別鑒定為：3-(3，4-二甲氧基苯基)-1，2-丙二醇[3-(3,4-dimethoxyphenyl)-1,2-propanediol,1]、反式-3，4-二甲氧基肉桂酸(trans-3,4-dimethoxycinnamic acid, 2)、2-羥基-3-甲氧基-5-(2-丙烯基)苯酚[2-hydroxy-3-methoxy-5-(2-propenyl)phenol,3]、去氫二異丁香酚(dehydrodiisoeugenol,4)、愈創(chuàng)木素(guaiacin,5)、鄰苯二甲酸(phthalic acid,6)、熊果酸(ursolic acid,7)；其中化合物4、5用圓二色譜法測(cè)定了其絕對(duì)構(gòu)型。化合物1～3、6為首次從肉豆蔻屬植物中分離得到。化合物1～3為苯丙素類(lèi)化合物，化合物4～5為木脂素類(lèi)化合物，化合物6為羧酸類(lèi)化合物，化合物7為三萜類(lèi)化合物。

1 儀器與材料

Barnstead International顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀(溫度未校正，美國(guó)美瑞泰克科技有限公司)，Bruker ARX-300型和 Bruker AV-600型核磁共振光譜儀(TMS為內(nèi)標(biāo)，瑞士Bruker公司)，L-7420液相色譜儀(日本日立公司)，JASCO pu-2080高效液相儀(日本Jasco公司)，JASCOCD-2095圓二色譜檢測(cè)器(日本Jasco公司)。

Sephadex LH-20凝膠(瑞士Pharmacia公司)，薄層色譜硅膠GF254 (10～40μm，青島海洋化工有限公司)，柱色譜硅膠(200～300Mesh，青島海洋化工有限公司)，十八烷基鍵合硅膠(ODS,10～30μm,天津化學(xué)試劑二廠(chǎng)色譜技術(shù)開(kāi)發(fā)公司)，甲醇(色譜純，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司)，其他試劑(分析純，沈陽(yáng)化學(xué)試劑廠(chǎng)、天津康科德科技有限公司)，氘代試劑(中國(guó)科學(xué)院武漢波譜公司)。

實(shí)驗(yàn)所用藥材購(gòu)于青海九康中藥飲片有限公司，產(chǎn)地安徽，由青海省藥檢所魏玉海鑒定為肉豆蔻MyristicafragransHoutt.的種仁。

2 提取分離

取肉豆蔻成熟種仁10kg，粉碎成粗粉，70%乙醇(100L)滲漉，將提取液減壓回收乙醇至無(wú)醇味，所得浸膏先用蒸餾水溶解分散，依次用等體積的石油醚、三氯甲烷、醋酸乙酯萃取，各萃取3次，回收溶劑得各層浸膏，分別為石油醚層110.0g、三氯甲烷層133.4g、醋酸乙酯層13.0g。

石油醚萃取物經(jīng)硅膠柱色譜分離，用石油醚-丙酮系統(tǒng)(200∶0～0∶1)梯度洗脫，100∶7餾分經(jīng)硅膠柱色譜分離，石油醚-丙酮系統(tǒng)(300∶0～0∶1)梯度洗脫得化合物4(200.0mg)；100∶10餾分經(jīng)重結(jié)晶、純化得化合物5(308.7mg)；200∶25餾分經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜純化，以三氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脫，重結(jié)晶得化合物7(11.2mg)；100∶20餾分經(jīng)Sephadex LH-20純化，以三氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脫，洗脫物經(jīng)ODS柱色譜，以甲醇/水梯度洗脫，50%甲醇/水洗脫物經(jīng)HPLC進(jìn)一步分離純化，以62%甲醇/水洗脫，制備得化合物3(18.1mg)。三氯甲烷萃取物經(jīng)硅膠柱色譜分離，用石油醚-丙酮系統(tǒng)(200∶0～0∶1)梯度洗脫，100∶3餾分經(jīng)硅膠柱色譜分離，石油醚-三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇系統(tǒng)(300∶100～0∶1、200∶1～0∶1)梯度洗脫得化合物6(3.0mg)；100∶20餾分經(jīng)硅膠柱色譜分離，三氯甲烷-甲醇系統(tǒng)(100∶4～0∶1)梯度洗脫，Sephadex LH-20柱色譜純化，以三氯甲烷-甲醇(2∶1)洗脫，洗脫物經(jīng)HPLC進(jìn)一步分離純化，以35%甲醇/水洗脫，制備得化合物1(4.6mg)。醋酸乙酯萃取物經(jīng)硅膠柱色譜分離，用石油醚-三氯甲烷、三氯甲烷-丙酮系統(tǒng)(100∶10～0∶1、200∶0～0∶1)梯度洗脫，石油醚-三氯甲烷系統(tǒng)(300∶100)餾分經(jīng)重結(jié)晶、純化得化合物2(24.5mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物1

白色結(jié)晶(甲醇)，1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)譜中，δ6.82(1H,dd,J=1.7Hz,8.1Hz,H-5)，6.71(1H,dd,J=1.7Hz,8.1Hz,H-6)，6.81(1H,d,J=1.7Hz,H-2)顯示該化合物結(jié)構(gòu)中具有芳環(huán)結(jié)構(gòu)且為ABX偶合系統(tǒng)的芳環(huán)；δ3.72(3H,s,3-OCH3)和3.70(3H,s,4-OCH3)為甲氧基的氫信號(hào)；δ 4.52(1H,d,J=4.8Hz,9-OH)和δ4.50(1H,d,J=4.8Hz,8-OH)為羥基的氫信號(hào)；δ3.59(1H,dd,J=13.5,4.8Hz,H-8)和δ3.26(2H,t,J=4.8Hz,H-9)為連氧碳上的氫信號(hào)；δ2.67(1H,dd,J=13.5,4.8Hz,Ha-7)和δ2.45(1H,t,J=13.5Hz,Hb-7)為芐基上的兩個(gè)氫信號(hào)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)譜中，δ148.4(C-3)，147.0(C-4)，132.2(C-1)，121.3(C-6)，113.4(C-2)，111.8(C-5)6個(gè)sp2碳信號(hào)為芳環(huán)的碳信號(hào)；δ72.7(C-8)，65.3(C-9)，55.6(4-OCH3)，55.4(3-OCH3)為連氧碳信號(hào)，δ39.4(C-7)為與苯環(huán)相連的碳信號(hào)；在HMBC譜中(見(jiàn)圖1)，可以觀測(cè)到δ3.26(H-9)與δ72.7(C-8)和δ39.4(C-7)存在遠(yuǎn)程相關(guān)，再結(jié)合1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)譜中δ4.52(9-OH),4.50(8-OH),3.59(8-H),3.26(9-H),2.67(7-Ha),2.45(7-Hb)可以推斷該化合物具有1,2-丙二醇結(jié)構(gòu)片段；δ2.45(7-Hb)與δ132.2(C-1)，113.4(C-2)，111.8(C-6)存在遠(yuǎn)程相關(guān)，提示1,2-丙二醇結(jié)構(gòu)片段連接到苯環(huán)上；δ3.72(3-OCH3)和δ148.4(C-3)存在遠(yuǎn)程相關(guān)可以確定δ3.72(3-OCH3)連接在該化合物的3位；δ3.70(4-OCH3)和147.0(C-4)存在遠(yuǎn)程相關(guān)可以確定δ3.70(4-OCH3)連接在該化合物的4號(hào)位。綜上將化合物1初步鑒定為3，4-二甲氧基苯丙二醇；將化合物1的NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]對(duì)照，鑒定為3-(3，4-二甲氧基苯基)-1，2-丙二醇，化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖5。

圖1 化合物1的HMBC圖

3.2 化合物2

無(wú)色針狀結(jié)晶(三氯甲烷)，溴甲酚綠反應(yīng)呈陽(yáng)性，顯示結(jié)構(gòu)中有羧基。1H-NMR(300MHz,CDCl3),δ7.08(1H,d,J=1.3Hz,H-2),7.16(1H,d,J=8.3Hz,H-5),6.88(1H,d,J=1.3Hz,8.3Hz,H-6),7.76(1H,d,J=15.86Hz,H-7),6.35(1H,d,J=15.86Hz,H-8),3.86(3H,s,3-OCH3),3.93(3H,s,4-OCH3),其中δ6.88(1H,d,J=1.3Hz,8.3Hz,H-6),7.08(1H,d,J=1.3Hz,H-2),7.16(1H,d,J=8.3Hz,H-5)為芳環(huán)上的質(zhì)子信號(hào)，且顯示該芳環(huán)為ABX偶合系統(tǒng),δ7.76(1H,d,J=15.86Hz,H-7),6.35(1H,d,J=15.86Hz,H-8)示結(jié)構(gòu)中有反式雙鍵，δ3.86(3H,s,3-OCH3)，3.93(3H,s,3-OCH3)為兩個(gè)甲氧基質(zhì)子信號(hào)。將化合物2的理化性質(zhì)及NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]對(duì)照，鑒定為反式-3，4-二甲氧基肉桂酸，化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖5。

3.3 化合物3

白色結(jié)晶(甲醇)，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽(yáng)性,示結(jié)構(gòu)中有酚羥基。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6),δ6.72(1H,d,J=1.8Hz,H-4),3.79(3H,s,3-OCH3),6.53(1H,d,J=1.8Hz,H-6),其中δ3.27(2H,d,J=6.7Hz,H-7),5.95(1H,m,H-8),5.07(2H,m,H-9)提示該結(jié)構(gòu)中具有結(jié)構(gòu)片段-CH2-CH=CH2；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6),δ147.8(C-1)，129.5(C-2),142.2(C-3),122.9(C-4),126.1(C-5),110.9(C-6),39.5(C-7),138.5(C-8),115.4(C-9),55.9(3-OCH3)；在HMBC譜中(見(jiàn)圖2)，δ3.27(2H,d,J=6.7Hz,H-7)與122.9(C-4)，126.1(C-5)，110.9(C-6)存在遠(yuǎn)程相關(guān)，提示2-丙烯基結(jié)構(gòu)片段連接到苯環(huán)上；δ3.79(3H,s,3-OCH3)與142.2(C-3)存在遠(yuǎn)程相關(guān)，可以確定3.79(3H,s,3-OCH3)連在該化合物的3號(hào)位。綜上初步推測(cè)化合物3為2-羥基-3-甲氧基-5-(2-丙烯基)苯酚；將化合物3的NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]對(duì)照，基本一致，鑒定為2-羥基-3-甲氧基-5-(2-丙烯基)苯酚，化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖5。

圖2 化合物3的HMBC圖

3.4 化合物4

白色針狀結(jié)晶(石油醚)，mp.134～136℃。三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽(yáng)性,示結(jié)構(gòu)中有酚羥基。1H-NMR(300MHz,CDCl3),δ1.38(3H,d,J=6.8Hz)和δ3.47(1H,dd,J=6.8,9.4Hz)示結(jié)構(gòu)中存在片段CH3-CH-，δ5.11(1H,d,J=9.4Hz)為連氧碳上的質(zhì)子信號(hào)，由偶合常數(shù)可知δ3.47(1H,dd,J=6.8,9.4 Hz)與δ5.11兩個(gè)質(zhì)子為反式直立；δ1.87(3H,d,J=6.5Hz，1.3Hz)和6.38(1H,brd,J=15.7Hz，1.3Hz) 示結(jié)構(gòu)中存在一丙烯基,δ3.88(3H,s)，3.85(3H,s)為2個(gè)甲氧基的質(zhì)子信號(hào),δ6.89(1H,d,J=8.3Hz)，6.92(1H,brd,J=8.3Hz)，6.97(1H,brs)顯示該化合物結(jié)構(gòu)中具有芳環(huán)結(jié)構(gòu)且為ABX偶合系統(tǒng)的芳環(huán),δ6.76(1H,brs)、δ6.78(1H,brs)為處于間位上的2個(gè)芳香質(zhì)子信號(hào)。將該化合物的NMR譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]對(duì)照，基本一致，鑒定為去氫二異丁香酚。其圓二色譜(CD)給出化合物4在231nm和270nm處呈現(xiàn)正的Cotton效應(yīng)(見(jiàn)圖3)，根據(jù)螺旋規(guī)則[9]，確定其絕對(duì)構(gòu)型為(2R，3R)，化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖5。

圖3 化合物4的CD和UV圖

3.5 化合物5

無(wú)色結(jié)晶，mp.169～171℃，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽(yáng)性,示結(jié)構(gòu)中有酚羥基。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ0.84(3H，d，J=6.2Hz，H-9′)，1.06(3H，d，J=6.3Hz,H-9)，1.51～1.66(2H，m，H-8,H-8′)，2.60～2.77(2H，m，H-7′)，3.35(1H，d，J=10.4Hz，H-7)，3.82(3H，s，Ar-OCH3)，3.85(3H，s，Ar-OCH3)，5.27(1H，brs，Ar-OH)，5.47(1H，brs，Ar-OH)，6.25(1H，s，H-2′)，6.54(1H，s，H-5′)，6.55(1H，d，J=1.8Hz，H-2)，6.61(1H，dd，J=1.8Hz，8.0Hz，H-6)，6.82(1H，d，J=8.0Hz，H-5)；13C-NMR (75MHz,CDCl3)δ146.5(C-3)，144.7(C-5′)，144.0(C-4)，143.4(C-1)，138.4(C-4′)，133.5(C-1′)，128.4(C-2′)，122.5(C-3′)，115.5(C-5)，114.0(C-6)，111.5(C-2)，110.0(C-6′)，56.0(Ar-OCH3)，55.9(Ar-OCH3)，54.3(C-7)，43.7(C-8)，39.2(C-7′)，35.7(C-8′)，20.0(C-9′)，17.2(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道的愈創(chuàng)木素的NMR譜數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定該化合物為愈創(chuàng)木素。其圓二色譜(CD)給出化合物5在231nm處呈現(xiàn)正的Cotton效應(yīng)，在290nm處呈現(xiàn)負(fù)的Cotton效應(yīng)(見(jiàn)圖4)，根據(jù)螺旋規(guī)則[9]，確定其絕對(duì)構(gòu)型為(2R，3S，4R)，化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖5。

圖4 化合物5的CD和UV圖

3.6 化合物6

白色片狀結(jié)晶(水)，mp.189～191℃，溴甲酚綠反應(yīng)呈陽(yáng)性，顯示結(jié)構(gòu)中有羧基。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ7.54(2H,dd,J=9.0Hz),7.74(2H,dd,J=9.0Hz)為芳環(huán)質(zhì)子信號(hào)，且為對(duì)稱(chēng)結(jié)構(gòu)，推測(cè)此化合物為鄰苯二甲酸。與鄰苯二甲酸對(duì)照品對(duì)照，混合熔點(diǎn)不下降。共薄層的Rf值在多種溶劑系統(tǒng)中與標(biāo)準(zhǔn)品一致，且顏色變化過(guò)程相同，故確認(rèn)化合物6為鄰苯二甲酸，化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖5。

3.7 化合物7

白色粉末(甲醇)，mp.259～261℃。Liebermann-Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性，提示該化合物可能為三萜或甾體類(lèi)化合物。1H-NMR(300MHz,Pyridine-d5)δ0.89(3H,s,H-26)，0.94(3H,d,

圖5 化合物1～7化學(xué)結(jié)構(gòu)圖

[1] 賈天柱.肉豆蔻的研究進(jìn)展[J].中草藥，1996，27(11)：690-693.

[2] 楊秀偉，黃鑫，艾合買(mǎi)提·買(mǎi)買(mǎi)提.肉豆蔻中新的新木脂素類(lèi)化合物[J].中國(guó)中藥雜志，2008，33(4)：397-402.

[3] 李建北，丁怡.云南肉豆蔻化學(xué)成分的研究[J].中國(guó)中藥雜志，2001，26(7)：479-481.

[4] 李秀芳，吳立軍，賈天柱，等.肉豆蔻的化學(xué)成分[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，23(11)：698-701，734.

[5] 徐字金，高樹(shù)緒，張梅，等.非洲產(chǎn)肉豆蔻樹(shù)干乙醇萃取物的化學(xué)成分研究[J].有機(jī)化學(xué)，2007，27(10)：1254-1257.

[6] Hiroe Kikuzaki, Sanae Hara, Yayoi Kawai, et al. Antioxidative phenylpropanoids from berries of Pimenta dioica[J]. Phytochemistry, 1999, (52): 1307-1312.

[7] 賀崢嶸，潘衛(wèi)東，盧玉振，等. 貴州蜂膠中的有機(jī)酸成分研究[J].中草藥，2002，33(5)：405-406.

[8] MERHATIBEB BEZABIH, SELEBO MOTLHAGOM, BERHANU M. ABEGAZ. Isofuranonaphthoquinones and phenolic and knipholone derivatives from the roots of Bulbine capitata[J]. Phytochemistry, 1997, 46(6): 1063-1067.

[9] 吳立軍.實(shí)用天然有機(jī)產(chǎn)物化學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：322-329.

[10] 楊秀偉，艾合買(mǎi)提·買(mǎi)買(mǎi)提，李勤，等.肉豆蔻化學(xué)成分的研究[J].中草藥，2003，34(增刊)：93.

[11] Mahato SB, Kundu AP.13C-NMR Spectra of pentacyclic triterpenoids—a compilation and some salient features [J]. Phytrochemistry,1994,37(6): 1517-1575.

StudyontheChemicalConstituentsfromMyristicafragransHoutt.

Zhang Lei1, Xu Yunfeng1, Shen Shuo1, Zeng Yimei1, Peng Qing1, Hao Shujuan2, Li Ning1, Wang Jinhui1

(1.SchoolofTraditionalChineseMateriaMedica,ShenyangPharmaceuticalUniversity,ShenyangLiaoning110016,China; 2.ShenyangUniversityofChemicalTechnology,ShenyangLiaoning110142,China)

Objective: To study the chemical constituents ofMyristicafragransHoutt..Methods: The compounds were isolated by the silica gel, Sephadex LH-20, ODS column chromatographies and HPLC. Their chemical structures were elucidated on the basis of physico-chemical properties and spectral data.Results: Seven compounds were obtained and identified as 3-(3,4-dimethoxyphenyl)-1,2-propanediol(1), trans-3,4-dimethoxycinnamic acid (2), 2-hydroxy-3-methoxy-5-(2-propenyl)phenol (3), dehydrodiisoeugenol (4), guaiacin (5), phthalic acid (6), ursolic acid (7).Conclusion: The compounds 1～3, 6 were isolated from theMyristicagenus for the first time. The absolute configuration of compounds 4, 5 were analyzed by adopting the method of circular dichroism spectra.

MyristicafragransHoutt.;Myristicagenus; Chemical constituents; Kernel

*王金輝，Tel：(024)23986479，E-mail：wangjh1972@vip.sina.com

2010-03-17)