白三烯受體拮抗劑對(duì)毛細(xì)支氣管炎外周血CD4+CD25+Treg的影響及療效觀察

楊 娟,錢(qián)瑋和,韓雪花,柏 進(jìn),成玉花,許 將,單春明

(徐州醫(yī)學(xué)院附屬淮安醫(yī)院兒科,江蘇淮安,223002)

毛細(xì)支氣管炎是嬰幼兒時(shí)期最為常見(jiàn)的喘息性疾病,有資料表明,白三烯受體拮抗劑能明顯改善毛細(xì)支氣管炎患兒的咳喘癥狀[1-2],但對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞如CD4+CD25+Treg影響研究尚少。為探討其對(duì)毛細(xì)支氣管炎患兒外周血CD4+CD25+Treg的影響及療效,作者給予毛細(xì)支氣管炎患兒孟魯司特口服治療,檢測(cè)治療前后外周血中CD4+CD25+Treg水平,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 臨床資料與方法

1.1 一般資料

2009年1月～2009年12月期間收治的48例毛細(xì)支氣管炎患兒,符合以下標(biāo)準(zhǔn)[3]:年齡<2歲,以喘憋為主要臨床表現(xiàn),可有發(fā)熱或無(wú)熱,雙肺可聞及較多喘鳴音,亦可有濕口羅音,胸片結(jié)果顯示兩肺紋理增粗、斑點(diǎn)狀或小片狀模糊陰影或透亮度增高,均為首次發(fā)作感染性喘息。將患兒隨機(jī)分為2組:孟魯司特干預(yù)組24例,男15例,女9例;常規(guī)治療組24例,男16例,女 8例。兩組患兒年齡、性別、病情輕重等差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。健康對(duì)照組 19例,其中男 11例,女8例。近2周內(nèi)無(wú)呼吸道感染、未用糖皮質(zhì)激素,無(wú)過(guò)敏性及免疫相關(guān)的疾病。

1.2 方法

1.2.1 治療方法:兩組患兒均采用相同的綜合性治療(抗病毒、抗生素預(yù)防感染、糜蛋白酶霧化吸入及鹽酸氨溴索靜滴化痰、補(bǔ)液,必要時(shí)予吸痰、吸氧、糾酸等治療)。孟魯司特干預(yù)組在上述基礎(chǔ)上加用孟魯司特(魯南貝特制藥有限公司生產(chǎn),商品名平奇),用法為4 mg,每晚1次。

1.2.2 檢測(cè)方法:CD4+CD25+T reg的測(cè)定分別采集各組患兒治療前及治療后7 d及健康對(duì)照兒外周靜脈血2 mL,肝素抗凝;取肝素抗凝的全血100 μ L,加入CD4-FITC和CD25-PE單克隆抗體20 μ L,IgG1-FITC 和IgG1-PE作為同型對(duì)照,室溫避光反應(yīng)30 min,加2 mL optiLyseC溶血素室溫下溶解紅細(xì)胞20 min;磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌10 min(1 500 r/min),棄上清液后加2 mL PBS后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。流式細(xì)胞儀為Beckman-Coulte ALTRA,所有試劑均由蘇州生物基因有限公司提供。CD4+CD25+Treg表面CD69的檢測(cè)為了區(qū)別CD4+和CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與近期活化的CD4+T細(xì)胞,應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)來(lái)源于上述各組外周血CD4+CD25+Treg活化表型CD69。

2 結(jié) 果

2.1 兩組主要臨床癥狀比較

孟魯司特干預(yù)組咳嗽、喘憋、肺部哮鳴音持續(xù)天數(shù)明顯短于常規(guī)治療組,差異有顯著性(P<0.01),見(jiàn)表1。

表1 兩組主要臨床表現(xiàn)持續(xù)天數(shù)比較( ±s,d)

表1 兩組主要臨床表現(xiàn)持續(xù)天數(shù)比較( ±s,d)

組別 n 咳嗽 喘憋 肺部哮鳴音孟魯司特干預(yù)組 24 7.5±2.3＊＊ 4.2±1.4＊＊ 5.9±2.7＊＊常規(guī)治療組 24 10.1±3.2 6.8±2.1 9.3±2.2

2.2 各組治療前后外周血中CD4+CD25+Treg水平比較

治療前外周血CD4+CD25+Treg水平均明顯低于健康對(duì)照組(P<0.01)。治療7 d后孟魯司特干預(yù)組CD4+CD25+Treg明顯上升(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 治療前后外周血中CD4+CD25+Treg水平比較(%)

3 討 論

毛細(xì)支氣管炎是2歲以下嬰幼兒特有的呼吸道疾病,多數(shù)在6個(gè)月以內(nèi),喘憋和肺部哮鳴音為其突出表現(xiàn),主要由病毒感染引起,半數(shù)以上為RSV,此外,副流感病毒、腺病毒、流感病毒、鼻病毒均可引起毛細(xì)支氣管炎,少數(shù)系由人肺炎支原體引起[3]。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn),嬰幼兒期患過(guò)毛細(xì)支氣管炎的患兒50%～70%可反復(fù)喘息,甚至發(fā)展至哮喘[4]。隨著免疫學(xué)的快速發(fā)展,大量研究已證明毛細(xì)支氣管炎的發(fā)病和免疫功能紊亂有關(guān),具有Th1/Th2平衡失調(diào),呈Th2細(xì)胞因子強(qiáng)勢(shì)狀態(tài)[5-7]。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是不同于Th1和Th2的具有調(diào)節(jié)功能的T細(xì)胞群體,在多種免疫性疾病中起重要調(diào)節(jié)作用。在這類(lèi)細(xì)胞中,主要發(fā)揮作用的是自然狀態(tài)的CD4+CD25+Treg細(xì)胞。這類(lèi)細(xì)胞的缺乏或功能缺陷會(huì)影響自身免疫環(huán)境的穩(wěn)定[8],實(shí)驗(yàn)證明,在體外用抗原刺激后,人類(lèi)CD4+CD25+Treg可以抑制CD4+CD25-T細(xì)胞增殖和Th2型細(xì)胞因子的產(chǎn)生[9]。

研究發(fā)現(xiàn)CysLTs受體拮抗劑的作用機(jī)制為抑制呼吸道嗜酸性粒細(xì)胞炎性反應(yīng),抑制炎性反應(yīng)介質(zhì)和細(xì)胞因子釋放,抑制氣道LTC4釋放,改善肺功能,抑制氣道重塑,降低氣道高反應(yīng)性等。CysLTs受體拮抗劑對(duì)小鼠和人類(lèi)的免疫系統(tǒng)具有一定的影響。包括對(duì)淋巴細(xì)胞的作用,細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)釋放的影響,膜受體的表達(dá),細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響等。Toriyama等[10]報(bào)道CysLTs受體拮抗劑對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性眼色素層視網(wǎng)膜炎(EAU)具有較好的治療效果。大鼠進(jìn)行自身免疫處理后,給予CysLTs受體拮抗劑治療后其EAU眼睛炎癥程度對(duì)CysLTs受體拮抗劑呈劑量依賴性減輕,其眼組織內(nèi)淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞滲出明顯減少。在CysLTs受體拮抗劑治療組,大鼠CD45RC在CD4+T細(xì)胞上的表達(dá)明顯減少。該研究表明CysLTs受體拮抗劑對(duì) EAU的免疫抑制機(jī)制很可能是通過(guò)抑制中性粒細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞的激活而實(shí)現(xiàn)的。而TCR介導(dǎo)的信號(hào)刺激活化后CD4+CD25+T reg,能夠抑制CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的活化增殖[11]。本研究顯示治療前兩組患兒外周血CD4+CD25+Treg占CD4+T細(xì)胞的百分比均明顯低于健康對(duì)照組,治療后孟魯司特干預(yù)組外周血中CD4+CD25+Treg水平較常規(guī)治療組顯著上升(P<0.05),同時(shí)咳嗽、喘憋、肺部哮鳴音持續(xù)天數(shù)明顯短于常規(guī)治療組。提示CysLTs拮抗劑治平喘可能機(jī)制之一是通過(guò)活躍毛細(xì)支氣管炎患兒體內(nèi)CD4+CD25+Treg,從而抑制效應(yīng)性CD4+T細(xì)胞尤其是Th2細(xì)胞大量增殖活化發(fā)揮治療毛細(xì)支氣管炎作用的。

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