正交試驗(yàn)法優(yōu)化消風(fēng)膠囊中牛蒡子的提取工藝

2010-09-15 09:52:58江蘇省張家港市中醫(yī)醫(yī)院215600

中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育 2010年18期

關(guān)鍵詞：工藝

余輝張衛(wèi) 江蘇省張家港市中醫(yī)醫(yī)院（215600）

余輝張衛(wèi) 江蘇省張家港市中醫(yī)醫(yī)院（215600）

目的優(yōu)化消風(fēng)膠囊中牛蒡子的提取工藝。方法采用正交試驗(yàn)法，以提取液中牛蒡苷的含量為考察指標(biāo)，對影響水煎提取效果的加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)等3個(gè)因素進(jìn)行研究，用HPLC測定消風(fēng)膠囊中牛蒡子苷的含量。結(jié)果消風(fēng)膠囊的最佳提取工藝為A2B1C2，即加水量為10、8倍，提取時(shí)間為2、1.5小時(shí)。結(jié)論該實(shí)驗(yàn)所優(yōu)選的工藝得到的干浸膏率和牛蒡苷的含量最高。

消風(fēng)膠囊；牛蒡子；牛蒡子苷；提取工藝；正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

消風(fēng)膠囊是根據(jù)《醫(yī)宗金鑒》之處方消風(fēng)散衍化而成,由牛蒡子、苦參、防風(fēng)、荊芥、蟬蛻、知母等11味中藥材組成，具有疏風(fēng)養(yǎng)血、清熱除濕之功效，主要用于治療蕁麻疹、濕疹、糠疹、皮炎等瘙癢性皮膚病。牛蒡子味辛、苦、性寒、歸肺、胃經(jīng)，具有疏散風(fēng)熱、解毒透疹、利咽消腫等功效，主要用于治療外感風(fēng)熱，咽喉腫痛，發(fā)熱咳嗽；麻疹初期，疹出不暢；風(fēng)熱疹癢；熱毒瘡腫；痄腮；咽喉腫痛等[1]；民間用于治療風(fēng)熱感冒、流行性腮腺炎、風(fēng)疹、癰腫瘡瘍、梅毒、壞血癥等[2,3]，現(xiàn)代藥理學(xué)證明有抗菌、抗腫瘤、降血糖等作用[4,5]。牛蒡子的主要化學(xué)成分為牛蒡子苷、牛蒡子苷元[6]，牛蒡苷具有很強(qiáng)的藥理作用，故本研究選擇牛蒡苷的含量作為水提正交工藝研究的評價(jià)指標(biāo)，對影響水煎提取效果的加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)等3個(gè)因素進(jìn)行研究，用HPLC法測定消風(fēng)膠囊中牛蒡子苷的含量對消風(fēng)膠囊水提取工藝進(jìn)行優(yōu)化研究。

1 儀器與材料

SPD-10A、LC-10AT高效液相色譜儀；TG328A電子分析天平；循環(huán)水式多用真空泵SHB-ⅢA(上海豫康科教儀器設(shè)備有限公司)；數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-4(國華電器有限公司)；2102超聲波清洗器（上海安譜科學(xué)儀器有限公司）；DHG-9053A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海浦東榮豐科學(xué)儀器有限公司,上海圣欣科學(xué)儀器有限公司)；消風(fēng)膠囊（張家港市中醫(yī)醫(yī)院自制）；牛蒡苷對照品（購自中國藥品生物制品檢定所批號(hào)0818-200203 供含量測定用）；水為超純水，乙腈為色譜純(購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司批號(hào)07020211)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選用L，(34)正交表，以牛蒡苷的提取率為考核指標(biāo)，考察水提取中的加水量（A）、煎煮時(shí)間（B）和煎煮次數(shù)（C）三個(gè)因素，每個(gè)因素設(shè)三水平。其因素水平見表1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

2.2 樣品提取液的制備按處方配比稱取藥材適量，按正交試驗(yàn)表進(jìn)行水提取，藥液抽濾，濾液濃縮至1000ml，備用。

2.3 牛蒡子苷含量的測定

2.3.1 正交試驗(yàn)法提取牛蒡子苷供試品溶液的制備[7]：取處方量的藥材共計(jì)121g,煎煮后合并煎液,抽濾,濾液濃縮后定容至1000ml，量取20ml，經(jīng)微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。精密量取50ml液體置干燥恒重的蒸發(fā)皿中于水浴鍋上蒸干,轉(zhuǎn)移至105℃烘箱干燥，測重，每份樣品平行測兩份，計(jì)算得干浸膏得率（%）。

對照品溶液的制備[7]：精密稱取干燥的牛蒡苷對照品16.40mg，置25.0ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為0.656mg/ml的牛蒡苷對照品溶液。

2.3.2 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算，即得牛蒡苷含量。正交試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 干浸膏得率的方差分析

表4 牛蒡苷含量的方差分析

從正交結(jié)果可知：各因素對干浸膏得率影響大小順序?yàn)椋篈（加水量)＞C(煎煮次數(shù))＞B(煎煮時(shí)間)；每個(gè)因素三個(gè)水平之間的趨勢為A2＞A1＞A3,B1＞B2＞B3,C3＞C2＞C1。各因素對牛蒡苷含量的影響大小順序?yàn)椋篈＞B＞C；每個(gè)因素三個(gè)水平之間的趨勢為A2＞A1＞A3, B1＞B2＞B3,C2＞C3＞C1。直觀分析得到本實(shí)驗(yàn)的最佳提取工藝是A2B1C2，即加水量為10、8倍，提取時(shí)間為2、1.5h。方差分析結(jié)果表明：A、B、C三個(gè)因素均無顯著性差異。

2.3.3 色譜條件的選擇[8]色譜條件BDS Hypersil C18色譜柱（5μm，4.6mm×250mm）；流動(dòng)相為乙腈∶水（23:77）；測定波長280nm；流速1mL/min；進(jìn)樣量10μL，理論板數(shù)按牛蒡苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取牛蒡苷對照品溶液（0.656mg/ml），分別進(jìn)樣2μL、4μL、6μL、8μL、10μL，注入高效液相色譜法儀，測定，以牛蒡苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程為：A=464359C—96301，R2=0.9981。結(jié)果表明：牛蒡苷進(jìn)樣量在1.312～6.56μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。牛蒡苷線性考察結(jié)果見表5。

表5 牛蒡苷線性考察結(jié)果

2.3.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取取牛蒡苷對照品溶液（0.656mg/ml），進(jìn)樣10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定色譜峰面積，其RSD為1.7240%（n=5），結(jié)果表明本法精密度良好.附圖1、附圖2

表6 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.3.6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 稱取處方量的藥材共五份，按最佳提取工藝A2B1C2制備供試品溶液，進(jìn)樣10μL，分別測定其峰面積，求出RSD=1.80%，結(jié)果表明本方法重現(xiàn)性良好，附圖3。

表7 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

3.1 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析從方差分析表中的統(tǒng)計(jì)量的值可以知道，三個(gè)因素都是不顯著的，即通過方差分析不能確定最好的水平組合。只能通過直觀分析得到本實(shí)驗(yàn)的最佳提取工藝是A2B1C2，即加水量為10、8倍，提取時(shí)間為2、1.5h。

3.2 提取方法的選擇口服液體制劑消風(fēng)合劑為張家港中醫(yī)院自制制劑，臨床療效確切，成效顯著，但合劑生產(chǎn)工藝原始，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)偏低，且服用量大，不便攜帶，膠囊劑可以提高藥物的穩(wěn)定性及生物利用度，服用量小，便于攜帶，故進(jìn)行了膠囊劑的研究。牛蒡子為本處方之君藥，其主要成分和活性成分為牛蒡苷，牛蒡苷極性較大，一般可溶于水，易溶于熱水、稀醇。考慮到大生產(chǎn)的成本及原合劑的生產(chǎn)工藝，故本次實(shí)驗(yàn)選用水提取工藝，但本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明采用水提工藝進(jìn)行牛蒡子的提取，其影響因素?zé)o顯著性差異。有研究表明采用70%的乙醇提取牛蒡子所得有效成分較高，鑒于時(shí)間關(guān)系，本次實(shí)驗(yàn)未進(jìn)行牛蒡子水提和醇提的差異比較，還有待于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。

3.3 流動(dòng)相的選擇本研究曾采用《中國藥典》一部牛蒡子項(xiàng)下的流動(dòng)相甲醇：水（1:1）進(jìn)行預(yù)試，結(jié)果樣品分離不理想，后參考了藥典中羚羊感冒片【含量測定】項(xiàng)下牛蒡子的測定方法，以乙腈-水為流動(dòng)相，結(jié)果采用乙腈-水（23:77）進(jìn)行分離，可獲得較好的效果。