保肝益胃合劑治療大鼠急性肝損傷的實驗研究

王 哲 姜樹民 遼寧中醫藥大學附屬醫院（110032）

保肝益胃合劑治療大鼠急性肝損傷的實驗研究

王 哲 姜樹民 遼寧中醫藥大學附屬醫院（110032）

目的 探討保肝益胃合劑對急性肝損傷大鼠的治療作用。方法 將100只Wister大鼠隨機分為7組，連續灌胃給藥7天，以CCL4腹腔注射建立大鼠肝損傷模型，造模后檢測各組大鼠血清中AST，ALT的含量，取肝臟組織進行病理檢查。結果 模型組與空白對照組相比，具有顯著性差異（P＜0.01）。各給藥組中，與AST，ALT模型組相比較，保肝益胃合劑高劑量組和易善復對照組的血清AST，ALT顯著降低，結果有統計學意義(P＜0.05)，其他組無統計學意義(P＞0.05)。模型組大鼠肝組織結構嚴重破壞，保肝益胃合劑高劑量組大鼠肝臟組織結構輕度破壞，其它各組的肝組織破壞程度均輕于模型對照組，但不如保肝益胃合劑高劑量組。結論 保肝益胃合劑對CCL4所致的大鼠急性肝損傷有一定的保護作用。

保肝益胃合劑；急性肝損傷；大鼠

肝損傷是臨床常見的危害人類健康的疾病，肝損傷涉及的病理因素比較廣泛，許多因素，如病毒、生物、藥物、理化、酒精等，都可以導致肝損傷。醫學科學國際組織委員會認為：如肝功能異常持續時間不超過3個月，為"急性肝損傷"。急性肝損傷若長期存在往往是導致肝纖維化，甚至肝硬化、肝癌發生的重要始動因素[1]，防治急性肝損傷是臨床肝病治療的主要環節之一。本研究觀察具有寧絡護膜、護肝和胃之功效的保肝益胃合劑治療CCL4所致的大鼠急性肝損傷的藥理作用，研究結果如下：

1 實驗材料

1.1 動物 Wister大鼠100只，雌雄各半，體重200～250g，SPF級，購買于北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證編號：scxx（京）2006-0009。

1.2 試劑 CCL4，500ml，沈陽市東興試劑廠，批號：2009年09月25日。大豆油，500ml，嘉里糧油（營口）有限公司，食品生產許可證：QS210802010025。生理鹽水，500ml，浙江康樂藥業股份有限公司，生產批號：09013115。

1.3 藥物 保肝益胃合劑湯劑：茵陳30g，黃芪10g，白及15g，苦參10g，蘇梗10g，公英15g，砂仁10g，五味子15g。購買于遼寧中醫院眾意愿大藥房。由遼寧中醫藥大學附屬醫院中醫藥實驗中心煎制。煎制過程如下：取3倍處方量的藥物，總量為345g，煎煮兩次。第一次加10倍量水，即3450ml，煎煮90分鐘，濾出藥液。第二次加8倍量水，即2760ml，煎煮60分鐘，濾出藥液。兩次濾液混合后濃縮，最后體積為115ml。該藥物濃度為300%。

西藥對照藥：易善復，賽諾菲安萬特（北京）制藥有限公司，產品批號：D9071。

中藥對照藥：甘利欣，江蘇正大天晴藥業股份有限公司，產品批號：090505。

2 分組及給藥方法

①空白對照組：生理鹽水 20ml/kg 2次/d。②模型對照組：生理鹽水 20ml/kg 2次/d。③西藥對照組：易善復膠囊 100 mg/kg/d (0.25% 20ml/kg 2次/d )。④中藥對照組：甘利欣膠囊 50mg/kg/d (0.125% 20ml/kg 2次/d )。⑤保肝益胃合劑低劑量組：10g/kg/d (50% 10ml/kg 2次/d )。⑥保肝益胃合劑高劑量組：30g/kg/d (100% 10ml/kg 2次/d )。⑦保肝益胃合劑低劑量+ 易善復組：保肝益胃合劑10g/kg/d + 易善復100 mg/kg/d。

3 實驗方法

①大鼠適應性喂養3天。②按上述分組，第4天開始給藥，連續灌胃給藥7天。③給藥后第7天早，建立肝損傷模型，以CCL42ml/kg腹腔注射。空白對照組用大豆油（1ml/100g）灌胃，禁食供水24h。④大鼠造模24h后，給予烏拉坦（25% 4ml/kg ip）麻醉，腹主動脈取血，靜置30min，3000r/min，離心20min，制備血清。取右葉肝臟，置于10%甲醛保存。

4 檢測指標

①血清中AST，ALT的含量。②肝臟組織進行甲醛固定，石蠟包埋切片，HE染色，進行病理檢查。

5 統計方法

6 實驗結果

6.1 血清AST，ALT檢測 模型組與空白對照組相比，P＜0.01，具有顯著性差異。各給藥組中，與AST，ALT模型組相比較，保肝益胃合劑高劑量組（30g/kg/d）和易善復對照組的血清AST，ALT結果P＜0.05，有統計學意義，其他組P＞0.05，無統計學意義。（統計結果見表）

表1 保肝益胃合劑對四氯化碳所致大鼠急性肝損傷AST和ALT的影響

表1 保肝益胃合劑對四氯化碳所致大鼠急性肝損傷AST和ALT的影響

注：與空白組比較，△△P＜0.01，與模型組比較，＊P＜0.05

組別 給藥劑量(g/kg/d) 動物數(n) AST(U/L) ALT(U/L)空白組 -- 12 101±28 50±15模型組 -- 10 4496±2616△△ 908±363△△低劑量組 10 10 3662±1504 830±281高劑量組 30 10 2350±1540＊ 529±301＊低劑量+易善復組10+0.1 11 2764±1295 743±417甘利欣組 0.05 10 3044±1280 538±426易善復組 0.1 10 2524±1380＊ 594±280＊

6.2 肝組織病理學檢測 實驗結果表明：模型組大鼠肝組織結構嚴重破壞，肝小葉不完整，細胞排列紊亂。部分肝細胞發生明顯的脂肪變性、壞死。匯管區見大量炎細胞浸潤，與模型組相比，保肝益胃合劑高劑量組大鼠肝臟組織結構輕度破壞，細胞排列較整齊，肝細胞脂肪變性及炎細胞浸潤都明顯減輕。其它各組的肝組織破壞程度及脂肪變性、壞死、炎細胞浸潤等肝組織的保護作用均優于模型對照組，但不如保肝益胃合劑高劑量組。

7 討論

肝臟疾病常常波及到肝外組織器官。CCL4 建立大鼠肝損傷模型主要是通過破壞肝細胞膜劑內膜結構損傷或壞死，引起肝細胞的破壞，從而使胞漿中的成分釋放入血。AST、ALT水平是肝損傷疾病中診斷最為敏感的指標，肝細胞受損時酶從細胞中逸出，導致其血清水平顯著升高。

本研究參照施新猷[2]方法復制急性肝損傷模型，通過灌胃CCL4研究急性肝損傷伴發胃粘膜的損傷情況。實驗結果提示，模型組大鼠血清中AST，ALT均顯著升高，預先給予肝胃合劑高劑量組（30 g/kg/d）的大鼠血清中AST，ALT均明顯下降。肝臟病理學檢測結果也提示肝胃合劑對CCL4所致的肝損傷有一定的保護作用。

中醫學認為引起急性肝損傷的病因多為感受時邪，或飲酒過度，或情志失調，或久病體虛等，急性肝損傷發病主要是肝臟受傷，但其中包含胃氣受傷、正氣不足的因素，故筆者提出治療肝損傷時，應該用調肝保肝與保胃氣并舉的方法，故擬保肝益胃合劑用于治療急性肝損傷，每于臨床獲效。方中苦參、黃芪相配，一苦一溫，一升一降，茵陳利濕退黃、解毒療瘡；白及收斂止血、清熱利濕、消腫生肌；紫蘇梗寬胸利膈除脹滿；蒲公英苦寒清降、消腫散結；砂仁和胃氣降濕濁；五味子酸甘養陰、護肝利膽。諸藥配伍，共奏寧絡護膜、護肝合胃之功效。

[1] 楊鉑,崔愛慶.中醫藥防治肝損傷機制研究進展[J].山東中醫藥大學學報,2005,29(3):246-249.

[2] 施新猷.現代醫學實驗動物方法學[M].人民醫學出版社,1999:457.

10.3969/j.issn.1672-2779.2010.18.135

1672-2779（2010）-18-0181-02

2010-07-30）