麻桂抗感顆粒提取工藝研究

黃華軾,陳 軍,陳汀波

(1.廣東省深圳市寶安區人民醫院,廣東深圳,518101;2.廣州中醫藥大學,廣東廣州,510405)

麻桂抗感顆粒提取工藝研究

黃華軾1,陳 軍2,陳汀波2

(1.廣東省深圳市寶安區人民醫院,廣東深圳,518101;2.廣州中醫藥大學,廣東廣州,510405)

祛風顆粒;正交試驗;鹽酸麻黃堿

麻桂抗感顆粒由麻黃、桂枝、柴胡等多味藥材組成,具有解表散寒、宣肺平喘之功效,以湯劑形式長期應用于臨床,療效確切。麻黃為方中君藥,文獻報道麻黃中的主要有效成分麻黃堿具有顯著的鎮咳平喘和利尿作用[1]。本文選擇以鹽酸麻黃堿保留率為指標,對該方提取工藝進行研究。根據方中藥材的理化性質,綜合考慮,使用水作為溶媒,通過正交試驗設計法,優選復方提取工藝條件[2Ο4],為后續研究提供理論依據,同時亦為其它復方中麻黃藥材的提取提供參考。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

SHIMADZU高效液相色譜儀,含UV檢測器,LC-20AT泵,SIL-20A自動進樣器,Lab2 solution色譜工作站,十萬分之一分析天平(Met2 tler Toledo CP225D);萬分之一分析天平(Mettler Toledo AB204-N),EYELA N-1000S-W旋轉蒸發儀。

1.2 試藥

麻黃藥材(購于廣東和翔制藥股份有限公司,經廣州中醫藥大學黃海波副教授鑒定為草麻黃Ephedra sinica Stapf.的干燥草質莖),鹽酸麻黃堿對照品(批號171241-200506),乙腈為色譜純,高效液相測定用水為超純水,其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

以Kromasil C18柱為固定相,以乙腈-0. 1%磷酸(5∶95)為流動相,檢測波長為210 nm,流速為1.0 mL/min。

2.2 標準曲線的制備

取鹽酸麻黃堿對照品適量,精密稱定(4.98 mg),置25 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取1～10 mL量瓶中并加甲醇至刻度,搖勻,制成每1 mL含19.92μg的對照品溶液,濾過,即得。

分別精密吸取上述鹽酸麻黃堿對照品溶液2、4、6、8、12、16和20μL注入高效液相色譜儀,測定,記錄峰面積,以鹽酸麻黃堿進樣質量對峰面積作工作曲線,得鹽酸麻黃堿回歸方程:y= 2208553.65x+6008.65,r=0.9991,表明鹽酸麻黃堿在0.03984～0.3984μg范圍內與峰面積成良好的線性關系。

2.3 正交實驗

采用L9(34)正交設計法進行實驗,考察影響提取效果的主要因素:水的用量、提取次數和提取時間,每個因素設置3個水平,見表1。

表1 麻桂抗感復方水提工藝條件考察因素水平表

2.4 實驗方法

按處方比例全方藥材,共9份,照正交表進行實驗,提取液濾過,合并濾液,測定體積,備用。

2.5 鹽酸麻黃堿的測定

2.5.1 麻黃藥材供試品溶液的制備:取本品細粉約0.2 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25 mL,稱定重量,超聲處理(功率160 W,頻率50 kHz)45 min,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過。精密量取續濾液1 mL,置中性氧化鋁柱(100～200目,1.5 g,內徑1 cm)上,用50%甲醇洗脫,收集洗脫液約9 mL,置10 mL量瓶中,加磷酸1滴,用50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,精密吸取10μL,注入液相色譜儀,測定,即得。經測定麻黃藥材中鹽酸麻黃堿的含量為1.18%。

2.5.2 復方供試品溶液制備:各精密量取2.4項下相當于0.5 g(僅提1次者取樣量為1.0 g)麻黃生藥的各提取液,60℃下減壓回收溶劑至約40 mL,加氨水調節pH至約11,加乙醚振搖提取5次(50、40、40、30和30 mL),合并乙醚提取液,加磷酸2滴,搖勻,于通風櫥中揮干乙醚,殘渣用甲醇轉移至25 mL量瓶中并稀釋至刻度,搖勻,精密量取0.5～2mL量瓶中(提2次)或1～5 mL量瓶中(提1次和3次),加甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續濾液,即得。

2.5.3 測定法:分別精密吸取麻黃藥材和復方供試品溶液各適量,按照上述色譜條件,注入液相色譜儀,測定,即得。

2.5.4 數據分析:按照上述正交實驗設計方案進行實驗,使用高效液相色譜法對鹽酸麻黃堿進行測定,對結果進行直觀分析和方差分析。

結果表明,提取次數(B)及提取時間(A)對鹽酸麻黃堿的提取效果有顯著性影響(P<0.05),且其各水平間差異均較顯著,都以選擇水平(3)即提取3次,時間為2 h、1.5 h、1.5 h為佳;而溶媒用量(C)對其影響較小,各水平間提取效果基本一致,從節省能源和利于后續的濃縮干燥工藝考慮宜選擇水平(1),即加8、4、4倍的水進行提取;故該工藝以A3B3C1即用8、4、4倍水提取3次,時間依次為2 h、1.5 h、1.5 h為佳。

2.6 驗證實驗

對所確定的A3B3C1的可靠性與重現性進行驗證;同時與理論最佳工藝即A3B3C3,加12、8、8倍的水提取3次,時間為2 h、1.5 h、1.5 h進行比較。開展實驗如下:

按處方比例稱取復方各藥材,3份,按上述所優選出的最佳工藝條件煎煮即加8、4、4倍的水提取3次,提取時間為2 h、1.5 h、1.5 h;濾過,濾液合并,測定體積,備用。

另按上述方法稱取藥材,考察理論最大提取條件即加12、8、8倍的水提取3次,提取時間為2 h、1.5 h、1.5 h;濾過,濾液合并,測定體積,備用。

驗證實驗中鹽酸麻黃堿的平均保留率為68.27%,與理論最大值76.82%相差不大,且重復性良好,表明本實驗所確定的提取路線A3B3C1合理、可行。

3 討 論

麻桂抗感顆粒為臨床應用多年的驗方,具有解表散寒、宣肺平喘之功效。麻黃為方中君藥,成分主要含有生物堿,尚有部分黃酮、揮發油等[5Ο6]。其中鹽酸麻黃堿是其主要藥效成分之一,故選為本實驗的考察指標成分。

本實驗通過正交試驗對麻桂抗感顆粒的提取工藝進行優選,確定了最佳工藝,即加8、4、4倍的水提取3次,提取時間為2 h、1.5 h、1.5 h。按該工藝進行驗證實驗,結果鹽酸麻黃堿保留率高,重復性良好。

加大水的用量雖然能較小程度的提高提取液中鹽酸麻黃堿的保留率,但兩者相比并無顯著性差異,且由于鹽酸麻黃堿在高溫下容易揮發,水用量的大幅度增加,將使后續的濃縮、干燥時間延長,可能對鹽酸麻黃堿的保留造成不良影響,又不利于節能[7Ο8]。故本實驗確定工藝條件如正文所述,驗證實驗證明所確定的工藝條件較為合理,易于操作。該實驗結果為后續生產的濃縮、干燥等進一步的研究提供了理論依據,亦為復方中麻黃提取工藝的確定提供參考。

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TQ 46

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1672Ο2353(2010)15Ο0100Ο02

2010-06-20