河南省不同產(chǎn)區(qū)桔梗飲片HPLC指紋圖譜研究*

廣西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院 楊海玲

河南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院 張振凌

湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院 李俊雅

河南省信陽市食品藥品檢驗(yàn)所 張紅偉

河南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院 王一碩

河南省不同產(chǎn)區(qū)桔梗飲片HPLC指紋圖譜研究*

廣西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院 楊海玲

河南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院 張振凌

湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院 李俊雅

河南省信陽市食品藥品檢驗(yàn)所 張紅偉

河南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院 王一碩

桔梗為桔梗科植物桔梗Platycodongrandiflorum（Jacq.）A.DC.的干燥根。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為下品。具有宣肺利咽、祛痰排膿的功效，臨床可用于咳嗽痰多，胸悶不暢，咽痛等證，屬臨床常用中藥。為了探討不同產(chǎn)地對桔梗飲片質(zhì)量的影響，本文采用高效液相法對河南省不同產(chǎn)區(qū)桔梗飲片指紋圖譜進(jìn)行比較研究，以便結(jié)合藥效實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步揭示其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，建立其飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

一、材料與儀器

1.樣品來源。桔梗飲片為河南禹州、南陽桐柏及洛陽欒川產(chǎn)地的中試及放大生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)樣品，見表1。

表1 樣品來源

二、方法與結(jié)果

檢測波長210nm，分析時間120min，進(jìn)樣量20L。

2.對照品溶液的制備。精密稱取對照品桔梗皂苷D適量，置2mL容量瓶中，用50%甲醇溶解并定容至刻度，即得1.00mg.ml-1的對照品溶液。

3.供試品溶液的制備。精密稱取樣品粉末（過50目篩）2g，加甲醇50mL，水浴加熱回流30min，濾過，濾液至蒸發(fā)皿中，于水浴鍋上揮去溶劑后用50%色譜甲醇溶解并定容至10mL容量瓶中，搖勻，經(jīng)0.45μm的微孔濾膜過濾，取濾液作為供試品溶液。

4.測定方法。分別吸取對照品溶液和供試品溶液各20L，注入色譜儀，結(jié)果見圖1，圖2，結(jié)果表明，溶劑對桔梗飲片指紋圖譜無干擾。

圖1 桔梗皂苷D對照品色譜

圖2 桔梗飲片供試品溶液色譜

5.方法學(xué)考察。

（1）精密度試驗(yàn)。取同一供試品溶液20L，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果表明8個共有峰的相對保留時間RSD均小于1.0%，相對峰面積RSD均小于2.7%，說明供試品溶液精密度良好。

（2）穩(wěn)定性試驗(yàn)。取同一供試品溶液，分別在0，3，6，9，12，24h內(nèi)進(jìn)樣20L，結(jié)果表明8個共有峰的相對保留時間RSD均小于1.0%，相對峰面積RSD均小于3.0%，說明供試品溶液穩(wěn)定性良好。

（3）重復(fù)性試驗(yàn)。精密稱取桔梗（南陽桐柏中）粉末5份，各2g，分別制備供試品溶液進(jìn)行分析。結(jié)果表明8個共有峰的相對保留時間RSD均小于0.34%，相對峰面積RSD均小于3.4%。說明本法測定的重復(fù)性良好。

6.桔梗飲片HPLC指紋圖譜的建立。分別取上述10批桔梗飲片，制備供試品溶液；分別精密吸取20L，注入液相色譜儀，按色譜條件測定，記錄指紋圖譜。根據(jù)測定結(jié)果，確定了8個共有色譜峰，對其順序編號為1～8，其中8號色譜峰為桔梗皂苷D參照峰。桔梗飲片1～8號中位數(shù)相關(guān)系數(shù)依次為0.963，0.977，1.000，0.740、0.773，0.740，0.707，0.735，0.780，0.781，色譜圖見圖3、圖4。

圖310 批桔梗HPLC指紋圖譜比較（2D）

三、小結(jié)與討論

1.本研究首次建立河南產(chǎn)桔梗飲片HPLC指紋圖譜，并采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版對不同產(chǎn)地的桔梗飲片的HPLC指紋圖譜進(jìn)行相似度評價。結(jié)果表明其指紋圖譜相互間較為吻合，雖然樣品的個體存在一定差異，特征峰的相對含量存在一定的差異，但整體輪廓均符合共有特征。同時從飲片整體色譜圖入手，選取了8個特征峰構(gòu)成了桔梗的指紋圖譜，以共有模式作為河南產(chǎn)桔梗的鑒別標(biāo)準(zhǔn)，能提供更全面的質(zhì)量控制信息。實(shí)驗(yàn)證明該方法操作性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可作為桔梗內(nèi)在質(zhì)量控制的評價方法。

2.實(shí)驗(yàn)中對提取方法（回流提取法、超聲提取法、超聲沉淀法），檢測器（普通紫外、紫外二極管陣列監(jiān)測器及檢測波長）進(jìn)行了考察，最終確定了供試品溶液的制備方法和樣品檢測的色譜條件。

3.對河南省內(nèi)禹州、欒川、桐柏3個主要產(chǎn)區(qū)的桔梗指紋圖譜的研究結(jié)果表明，桐柏產(chǎn)桔梗較其余2個產(chǎn)區(qū)的桔梗相似度為最高，且桐柏產(chǎn)的桔梗桐柏（中）飲片桔梗皂苷D峰面積較大，含量也較高，這可能與河南桐柏當(dāng)?shù)亟酃２墒者x擇在秋季地上部位枯萎時采收有一定關(guān)系。因此，這就再次充分肯定了“桐桔梗”的道地性和優(yōu)越性。另外，本實(shí)驗(yàn)采取的樣品均為河南幾個主要產(chǎn)區(qū)不同藥材，故樣品具有代表性，能較好地反映桔梗飲片指紋圖譜研究的全面性。

圖4 桔梗飲片共有模式

河南省重大科技攻關(guān)項(xiàng)目（0522030200）。