HPLC 法測定利血平注射液中利血平的含量

肖音，郭偉英（遼寧醫學院，錦州市121001）

利血平注射液是由枸櫞酸、L-鹽酸半胱氨酸、硫脲、濃氨水、丙二醇、注射用水制成的肌肉注射用制劑，其通過抗去甲腎上腺素能神經產生降低血壓的作用，臨床用于高血壓危象。利血平注射液載于《中國藥典》2005版[1]，其含量測定方法采用紫外吸收分光光度（UV）法。由于該制劑中輔料多達6種，所以用UV法進行含量測定時，需進行復雜的預處理，如采取不同溶劑進行多次提取，不僅操作煩瑣且提取時所用的氯仿等有機溶劑對操作人員身體有嚴重損害。而目前尚未見關于以高效液相色譜（HPLC）法測定利血平注射液中利血平含量的文獻報道[2～4]。筆者在本文中建立了以HPLC法代替UV法測定該制劑含量的方法。結果表明，該法簡便、精確，可用于利血平注射液的含量測定。

1 儀器與試藥

FL2200 HPLC儀、FL2200紫外檢測器、FL9500S色譜工作站均由浙江溫嶺福立分析儀器有限公司提供；BS223S型電子天平（北京賽多利斯系統有限公司）。

利血平注射液（廣東邦民制藥廠有限公司，批號：20080306、20080712、20080904，規格：1 mg·1 mL－1）；利血平標準品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100041-200311，純度：99.99%）；甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純，水為自制重蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Venusil XBP-C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（52∶48，用冰醋酸調酸度為pH＝（3±0.2））；檢測波長：268 nm；流速：1 mL·min－1；柱溫：28 ℃；進樣量：10 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 標準品溶液的制備。精密稱取利血平標準品10 mg，置于100 mL容量瓶中，甲醇溶解并加至刻度，搖勻，即得濃度為0.1 mg·mL－1的標準品溶液，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備。取利血平注射液以1支，精密量取1 mL置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備。按處方比例取不含利血平的其它成分，照生產工藝和“2.2.2”項下方法制成缺利血平的陰性樣品溶液。

2.3 專屬性考察

分別吸取標準品貯備液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10 μL，按上述色譜條件進樣測定。結果，利血平的保留時間約7.4 min，主峰與輔料峰分離良好，且陰性樣品無干擾，色譜見圖1

圖1 高效液相色譜圖A.標準品；B：陰性樣品；C.供試品；1.利血平Fig 1 HPLC chromatographyA.standard sample；B.negative control；C.test sample；1.reserpine

2.4 標準曲線的制備

精密吸取上述標準品溶液適量，加入甲醇稀釋至不同濃度4、6、8、10、12、14、16 μg·mL－1，分別取10 μL注入色譜儀，按上述“2.1”項下色譜條件測定。以進樣量（x，μg·mL－1）為橫坐標，峰面積（y）為縱坐標制備標準曲線，得回歸方程為y＝4.870 2x+0.208 5（r＝0.999 1）。結果表明，利血平檢測濃度在4～16 μg·mL－1范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.5 精密度試驗

取濃度為10 μg·mL－1的標準品溶液10 μL，重復進樣6次，測定。結果，RSD＝0.37%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復性試驗

取同一批樣品（批號：080306）6份，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，各取樣10 μL測定，結果，計算得含量的RSD＝1.1%，表明方法重復性良好。

2.7 穩定性試驗

取同一批供試品溶液10 μL分別于0、2 、4 、6、8、10、12 h進樣，測定。結果，峰面積的RSD＝0.84%，表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.8 加樣回收率試驗

取已知含量的利血平注射液，分別精密加入利血平標準品適量，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，計算加樣回收率，結果見表1。

2.9 樣品含量測定

取3批樣品（批號分別為20080306、20080712、20080904），照“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定利血平的峰面積，計算含量，并與UV法測定結果進行比較，見表2。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

表2 樣品含量測定結果（n＝3）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝3）

3 討論

利血平在218、268、292 nm波長處均有最大吸收，其中以在268 nm波長下吸收最強，故確定最大吸收波長為268 nm。

《中國藥典》采用UV法測定利血平注射液含量時，由于制劑中輔料過多且結構對測定造成干擾，所以必須進行多次提取，步驟煩瑣，且提取時用到了氯仿等高致癌有機溶劑，這些問題都可以通過本文的HPLC法得到解決，采用HPLC法可以直接進樣測定。

因國內尚未有關HPLC法測定利血平注射液含量的文獻報道，所以筆者建立的HPLC法對利血平注射液的含量測定方法是一種有益的補充，且本文方法與UV法測得利血平注射液含量的結果基本一致，但與后者相比較，本法測定結果更準確，精密度高，操作更簡便。

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學工業出版社，2005：264.

[2]梁選革，石慧秋.HPLC法測定復方利血平片中利血平的含量[J].中國藥房，2007，18（25）：1 978.

[3]王 昕，孫 悅，米亞嫻.HPLC法測定復方降壓平片中利血平的含量[J].天津藥學，2003，15（6）：15.

[4]歐陽曉梅，何英梅，常 琦.RP-HPLC法測定利血平片劑的含量[J].中國藥事，2003，17（12）：758.