二鹽酸奎寧注射液質量標準的研究

趙新靜 周慧 馮凱

二鹽酸奎寧注射液是6’-甲氧基-(8α，9R)-辛可寧-9-醇的二鹽酸鹽的滅菌水溶液。奎寧是喹啉類衍生物，能與瘧原蟲的DNA結合，形成復合物，抑制DNA的復制和RNA的轉錄，從而抑制原蟲的蛋白合成，作用較氯喹為弱。另外，奎寧能降低瘧原蟲氧耗量，抑制瘧原蟲內的磷酸化酶而干擾其糖代謝，故臨床用于抗瘧藥［1］。目前藥典標準測定其含量的方法為氯仿提取蒸干后再非水滴定法［2］，但其操作步驟復雜，耗時過長，不利于對大批樣品的測定，且無有關物資測定方法，本實驗的HPLC法可以有效縮短實驗時間，并能準確測定二鹽酸奎寧注射液的含量和有關物資。

1 儀器與試藥

戴安P680高效液相色譜儀，四元梯度泵;UVD170 U檢測器;chromeleon色譜工作站;UV-1800spc型紫外可見分光光度計;BS21S型精密電子天平;20 μl標準進樣器。二鹽酸奎寧對照品:由二鹽酸奎寧原料精制，含量99.87%;二鹽酸奎寧注射液:規格 300 mg/ml，批號 081201、081202、081205。甲醇、乙腈為色譜純，其余為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:KromasilC18，(5 μm ，250 mm×4.6 mm)。流動相:甲醇-乙腈-水(150:100:750)［1000 ml溶液，加三乙胺3 ml，用磷酸調pH至2.5，搖勻］，流速為1.00 ml/min ，進樣 20 μl，檢測波長 250 nm，外標法測定。

2.2 含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取二鹽酸奎寧對照品0.03023 g，置100 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取10 ml置100 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取供試品1 ml注射液，置100 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，再精密量取10 ml置100 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性對照試驗 按處方配比，制備不含二鹽酸奎寧樣品溶液，進樣20 μl，結果表明其他成分對二鹽酸奎寧的測定無干擾。

2.2.4 線性關系 分別精密量取2.2.1項下對照品溶液5、10、15、20、25 ml，置 100 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，進樣20 μl，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積對濃度(μg/ml)作回歸處理，得一次回歸方程:

在2～50 μg/ml范圍內線性關系良好。

2.2.5 精密度實驗 按上述色譜條件，配制30.3 μg/ml對照品溶液20 μl，重復進樣6次，記錄對照品峰面積積分值，RSD為0.10%

2.2.6 穩定性試驗 取2.2.2項下樣品溶液，分別與0、2、4、8、12 h進樣，按上述色譜條件分別測得峰面積，結果峰面積的RSD為0.66%，表明供試品溶液穩定。

2.2.7 回收率試驗 精密量取不含二鹽酸奎寧的空白溶液2 ml 9份，精密稱取對照品適量共9份(相當于待測溶液的80%、100%、120%的量各三分)加入空白溶液中，按供試品溶液的制備方法制備，取20 μl進樣，計算回收率，結果見表1。

表1 回收率試驗(mg，%)

2.2.8 二鹽酸奎寧注射液含量測定 分別取2.2.1、2.2.2項下的對照品與供試品溶液，按上述色譜條件測定了3批樣品，同時按藥典標準測定其含量，結果見表2。

表2 含量測定

2.3 有關物資檢查

2.3.1 供試品溶液的制備 精密量取二鹽酸奎寧注射液2 ml，置100 ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 ml置于50 ml容量瓶中加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.2 破壞實驗 精密量取二鹽酸奎寧注射液2 ml，置100 ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 ml置于50 ml容量瓶中分別加入6 mol/L的氫氧化鈉溶液，6 mol/L的鹽酸溶液，3%的過氧化氫溶液5 ml。置水浴上加熱2 h，放冷后，分別用酸、堿中和加流動相稀釋至刻度，過濾，分別取20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

光破壞實驗精密量取二鹽酸奎寧注射液2 ml，置100 ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，從中精密量取5 ml置于50 ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，將容量瓶置4500LX光照下10 h后，取20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果本法能有效的將雜質與主峰分離。

2.3.3 檢測限 將二鹽酸奎寧注射液用流動相稀釋至含二鹽酸奎寧0.2 μg/ml時，測得樣品的響應值為噪音信號的3倍高，故本法的檢測靈敏度為0.2 μg/ml。

2.3.4 樣品中的有關物質測定 取供試溶液20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，記錄時間應為主成分色譜峰保留時間的二倍，并用面積歸一化法處理見表3。

表3 二鹽酸奎寧注射液有關物質檢測結果(%)

3 討論

3.1 紫外檢測波長 曾以水為空白，測定對照品溶液的最大吸收，但在此波長下，峰面積出現較大波動，后改用流動相為空白，并用流動相配制對照品液，得到的最大吸收下峰面積穩定。

3.2 流動相組成 為了得到較好的分離度、峰型，分別醇-水(60:40)、甲醇-乙腈-水(20:10:70)，甲醇-乙腈-水(15:10:75)(按比例配制成1000 ml溶液，加三乙胺3 ml，用磷酸調pH至2.5，搖勻)，結果表明，本試驗的流動相組成得到的圖譜最佳。

3.3 HPLC法和非水滴定法的結果基本相同，但HPLC法步驟少，用時短，同時也具有良好的線性關系、精密度和穩定性，表明HPLC法可以作為非水滴定法的替代方法對二鹽酸奎寧注射液進行行量測定。

3.4 專屬性考察 二鹽酸奎寧對光較穩定，破壞后，雜質峰面積無明顯增加;堿酸性條件下，主峰面積變化不大，但在保留時間約為3 min處出現一個較大的未知雜質峰;氧化條件下主峰面積有較大變化，且產生降解物質較多;二鹽酸奎寧經酸、堿、氧化、光照等破壞，所產生的雜質峰與主成分峰均能達到有效分離，表明方法的專屬強。

［1］李端，殷明．藥理學．人民衛生出版社，2008:466．

［2］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典二部．化學工業出版社，2005:11．