現代分子生物學技術對微生態群落的研究進展

高傳慶 張鈞利 潘康成

（①山東省濱州市畜牧獸醫局 256600 ②江蘇無錫阿爾寶爾生物工程有限公司③四川農業大學動物醫學院 動物疫病與人類健康四川省重點實驗室）

動物消化道內的微生物群落是一個極其復雜的生物群體，包含有超過400種的細菌類別，其數量隨年齡、環境等條件的變化而產生變化。傳統的微生物群落多樣性及結構分析是以純培養技術為基礎，通過微生物形態及生理生化特征等表型分析。目前，由于受到培養條件的限制，只能培養與鑒定出約20%～40%的細菌，對這些存活但不可培養的微生物研究成為制約微生態學發展的瓶頸。另外，傳統的分離計數也難以滿足對微生物群落結構變化進行動態監測的需求。分子微生態學依據樣品中微生物核苷酸序列的不同，分析其種類和相對數量，揭示微生物種類組成以及種群數量情況，從而對微生物群落結構得到一個比較客觀、全面的認識。這種研究方法不受純培養的限制，而且速度快、提供的信息量大，因而特別適合于對消化道微生物群落結構進行連續動態分析，達到解析群落結構與功能關系、實現對群落功能定向調控的目的。

1 熒光原位雜交技術

FISH是根據16S或23S rRNA上相應于特定微生物類群的特異性序列設計專一性探針，對樣品進行全細胞熒光原位雜交，利用熒光顯微鏡對所標記的細胞進行觀察和計數的一種微生物分析技術，該技術建立在敏感度極高、不同顏色熒光標記基礎上的原位分析法。……