復方獸藥的藥敏試驗(藥敏片法)與藥物選擇

馬述臣 （青島康地恩藥業有限公司 266111）

隨著家禽疾病的發展和獸醫臨床診治水平的提高，獸醫臨床上愈來愈越多地通過藥敏試驗來進行藥物的選擇。由于目前市場上復方獸藥的成分不透明，給藥敏試驗帶來了許多困難。為了更好地利用藥敏試驗來選擇藥物，根據多年的臨床經驗以及制藥工作經驗，介紹一下獸醫臨床上如何利用藥敏試驗來選擇復方獸藥。

1 材料準備

1.1 培養基

按試驗要求選用不同的培養基。若做禽大腸桿菌藥敏試驗宜選擇普通瓊脂或麥康凱培養基；若做沙門氏菌藥敏試驗宜選擇SS培養基；若做禽巴氏桿菌藥敏試驗可選擇鮮血瓊脂平板培養基；另外使用磺胺藥物做藥敏試驗則應選用無蛋白胨肉湯瓊脂平板培養基等。

1.2 藥敏試紙

選擇質量好的定量濾紙以備制作藥敏紙片。

1.3 細菌

選自具有典型癥狀病雞的病變部位提取病料。如肝臟、心臟、脾臟等臟器。

1.4 其它設備

接種環、酒精燈、打孔器、牛津杯、移液器、滴頭等。

2 試驗準備

2.1 藥敏片的準備

2.1.1 藥敏片的制備 取定量濾紙，用打孔器打成直徑為6mm的圓形紙片，取50～100片圓紙片放入清潔干燥的青霉素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎，經15磅15～20min高壓消毒后，放在37℃溫箱或烘箱中數天，使之完全干燥，并在60℃的條件下烘干備用。

2.2.2 藥液的制備 根據經驗，按獸藥說明書(或標簽)上標明的治療量的10～20倍比例配制藥液。如某藥品100g兌水100kg，表明該藥治療量為1g兌水1L，配制藥液時就是1g加50～100ml水或1L水加10～20g藥品，即為配制藥敏片所用的藥液濃度。

2.2 藥敏片的制作 將含有50～100片紙片的青霉素瓶內加入配制好的藥液適量，并翻動紙片，使各紙片充分浸透藥液，輕輕翻動紙片以免將紙片搗爛。同時在瓶口上記錄藥物名稱，放37℃溫箱內過夜，干燥后即密封，切勿受潮，置陰暗干燥處存放備用(一般有效期3～6個月)。

3 試驗操作方法

3.1 藥敏片法

3.1.1 涂布 在超凈臺或自制無菌操作臺中，用經火焰滅菌(酒精燈)的接種環從病料中挑取適量細菌培養物，分別在平皿邊緣相對4點涂菌，以每點開始劃線涂菌至平皿的1/2，然后找到第2點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布于平皿。(另:可將待試細菌于少量生理鹽水中制成細菌混懸液，將少量混懸液倒入平皿培養基上，輕晃平皿使鋪勻，放置5～10min)。

3.1.2 貼片 將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停，取已制好的干燥藥敏片分別貼到平皿培養基表面。為了使藥敏片與培養基緊密相貼，可用鑷子輕按幾下藥敏片。若使觀察結果更準確，要求藥敏片能有規律的分布于平皿培養基上，一般可在平皿中央貼一片，外周可等距離貼若干片。一般9cm直徑的平皿可同時貼6～9片，同時標明各種藥敏片的名稱。最后將平皿培養基底部向上(倒置)放于37℃溫箱中培養12～24h。

4 結果觀察與判斷

取出培養12～24h后的培養皿進行觀察。在涂有細菌的瓊脂平板上，抗菌藥物在瓊脂內向四周擴散，其濃度呈梯度遞減，因此在紙片周圍一定距離內的細菌生長受到抑制。過夜培養后形成一個抑菌圈，抑菌圈越大，說明該菌對此藥敏感性越大，反之越小，若無抑菌圈，則說明該菌對此藥具有耐藥性。其直徑大小與藥物濃度、劃線細菌濃度有直接關系。按抑菌圈直徑大小作為判定敏感度高低的標準，抑菌圈直徑20mm以上敏感度為極敏、15～20mm敏感度為高敏、10～14mm敏感度為中敏、10mm以下敏感度為低敏、0mm敏感度為不敏。

5 藥物的選擇與應用

5.1 影響藥敏結果的因素

5.1.1 培養基 應根據試驗菌的營養需要進行配制。傾注平板時，厚度合適(約5～6mm)，不可太薄，一般直徑為9cm的培養皿，傾注培養基以18～20ml為宜。培養基內應盡量避免有抗菌藥物的拮抗物質，如鈣、鎂離子能減低氨基糖苷類的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和對氨苯甲酸(PABA)能拮抗磺胺藥和TMP的活性。

5.1.2 細菌接種量 細菌接種量應恒定，如太多，抑菌圈變小，能產酶的菌株更可破壞藥物的抗菌活性。

5.1.3 藥物濃度 藥物的濃度和總量直接影響抑菌試驗的結果，需精確配制。藥液配制時特別注意：目前獸藥廠家生產的獸藥多為復方藥物，其用量實際上是該藥中實際主要成分的治療量(說明書或標簽中一般未標出)，有時不是說明書(或標簽)中標明的藥物成分，要特別注意區分。另外，按按《中華人民共和國獸藥典》規定：說明書(或標簽)中的用量即為治療量，說明書(或標簽)中一般不能寫預防量。

5.1.4 培養溫度和時間 一般培養溫度和時間為37℃12～24h，有些抗菌藥擴散慢如多粘菌素，可將已放好抗菌藥的平板培養基，先置4℃冰箱內2～4h，使抗菌藥預擴散，然后再放37℃溫箱中培養，可以推遲細菌的生長，而得到較大的抑菌圈。

5.2 藥物選擇

獸醫臨床上藥物的選擇至少應具備以下條件：

5.2.1 敏感性要高 敏感性越高的藥物殺菌作用也越強。因此，藥物敏感試驗后，首先應考慮選擇高敏藥物，也可考慮選用兩種藥物協助使用，以減少耐藥菌株。

5.2.2 藥物在體內吸收狀況與所治療疾病的發病機制相符 在選擇高敏藥物的同時還要考慮藥物的吸收途徑以及在體內的吸收、轉化狀況。因為藥敏試驗是藥液直接和細菌接觸，而在給禽用藥的時候，必須通過機體的吸收并達到感染部位才能使藥物達到一定的效果。譬如禽大腸桿菌病，如果是敗血性型禽大腸桿菌病，那么選擇的藥物就應該既敏感性高又易于吸收才適合，如果敏感性高但吸收不佳，其治療效果是不會好的。

因此，在選擇藥物時，要同時考慮以上因素才會達到較好的治療效果。如果達不到上述要求，寧可選擇敏感性不是特高但藥物卻能很快到達感染部位的藥物，這一點非常重要。