實驗室培養(yǎng)果蠅的方法和注意事項

馮 航

西安文理學院生命科學系，陜西 西安 710065

果蠅屬于昆蟲綱，雙翅目，與家蠅是不同的種。它的生活史包括卵→幼蟲→蛹→成蟲。果蠅具有生活史短、繁殖率高、飼養(yǎng)簡便等特點，是研究遺傳學的好材料，尤其在基因分離、連鎖、交換等方面，對果蠅的研究更是廣泛而充分[1]。因此，做好果蠅培養(yǎng)對遺傳學實驗有著重要的作用。

1 果蠅的培養(yǎng)

1.1 培養(yǎng)基的配方

培養(yǎng)基是飼養(yǎng)果蠅的基礎(chǔ)，不同材料的配制方法不盡相同。結(jié)合幾年的培養(yǎng)經(jīng)驗，目前西安文理學院生命科學系采用的效果較好的配方為：玉米粉100g，糖130g，瓊脂10g，酵母片20g，苯甲酸0.75g，丙酸1.25ml，加蒸餾水1200ml。

1.2 配制方法

1）取一定量的水將玉米粉拌勻，加熱至糊狀。期間要不斷攪拌，防止糊底；

2）將糖和瓊脂加入水中煮沸溶解；

3）將酵母片在研缽中加水研磨至糊狀。

將1）、2）二者混合后降溫至50℃左右時加入3）苯甲酸和丙酸，攪拌均勻后即可分裝到培養(yǎng)瓶中。

1.3 培養(yǎng)基的分裝

將干凈的培養(yǎng)瓶在121℃下滅菌20min，倒入約2.5cm厚的未完全冷卻的培養(yǎng)基。待培養(yǎng)基冷卻凝固后即可將果蠅轉(zhuǎn)入培養(yǎng)。

1.4 果蠅處理

因為果蠅對乙醚很敏感，易麻醉，可以對作種的果蠅輕度麻醉。（果蠅翅膀外展45℃角表示已死亡）。選用廣口瓶作為麻醉瓶，瓶塞內(nèi)部塞上適量的脫脂棉，滴加數(shù)滴乙醚。培養(yǎng)瓶口與麻醉瓶口對接輕拍上方的培養(yǎng)瓶將果蠅落到麻醉瓶里。然后迅速蓋好兩個瓶塞，半分鐘左右，果蠅被麻醉，活動緩慢，注意麻醉不得過度，如果果蠅兩翅展開且肢體僵硬，說明已致死。因此，必須抓緊時間移人新培養(yǎng)瓶中，可將培養(yǎng)瓶橫臥，用干凈毛筆把果蠅挑人，待果蠅清醒后，再豎立加塞，防止果蠅粘在培養(yǎng)基上[2]。

1.5 原種培養(yǎng)

留種培養(yǎng)時，事先檢查一下果蠅有沒有混雜，以防原種丟失。親本的數(shù)目一般每瓶5～10對[1]。原種一般可在18℃下培養(yǎng)。原種大約4周左右換一次培養(yǎng)基，要多注意觀察，具體根據(jù)培養(yǎng)溫度的不同，視培養(yǎng)基的消耗程度而定。每一原種培養(yǎng)至少保留兩套，并注明名稱和日期，培養(yǎng)時避免日光直射。

2 注意事項

果蠅培養(yǎng)過程中有幾個關(guān)鍵性的環(huán)節(jié)，如若掌握不好，將不能使果蠅正常生長，甚至導致部分或全部死亡。因此，應特別注意[3]。

2.1 玉米粉的溶解

玉米粉一定要先用涼水拌勻后再加熱，不能直接倒入加熱的培養(yǎng)基中，否則容易聚集成團，不易溶解。配制的培養(yǎng)基容易出現(xiàn)塊狀，不易于果蠅的利用。

2.2 添加酵母的時間

酵母為活性物質(zhì)，高溫易失活。因此應當在培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時加入到培養(yǎng)基中，切勿將酵母粉加入到培養(yǎng)基中直接煮沸。

2.3 培養(yǎng)溫度

果蠅的培養(yǎng)溫度要以具體使用情況而定，在遺傳學教學實驗中，由于實驗時間相對較短，要求果蠅的繁殖速度相對就較快，因此可以在23～25℃的條件下培養(yǎng)，而保種則應在18℃左右下培養(yǎng)，以免培養(yǎng)基消耗過快，減少轉(zhuǎn)接次數(shù)。

3 常見問題處理

3.1 培養(yǎng)瓶內(nèi)發(fā)霉

因為酵母菌與霉菌的生活環(huán)境相似，且由于培養(yǎng)過程幾乎都在培養(yǎng)箱中進行，通風不良，時間久了容易滋生霉菌。因此，要使用的培養(yǎng)瓶要嚴格滅菌，當室溫與培養(yǎng)溫度相似時可以在實驗室中培養(yǎng)，加強通風。對已經(jīng)發(fā)霉的培養(yǎng)基，在具有備用種時可以將其淘汰，若僅此一瓶，就要殺死果蠅身上攜帶的霉菌。方法是將帶有霉菌孢子的成蠅倒入空培養(yǎng)瓶中，棉塞上倒適量的75%酒精，再將瓶口塞緊，利用酒精具有揮發(fā)性，揮發(fā)后的酒精充滿整個瓶內(nèi)，從而將果蠅身上的霉孢子殺死。在操作上應注意兩點：一是倒在棉塞上的酒精量要合適，過多果蠅易醉昏，過少殺死不了霉菌孢子；二是果蠅呆在空瓶內(nèi)的時間要恰當，以2d為好[4]。轉(zhuǎn)入新培養(yǎng)基的第二天再次把果蠅轉(zhuǎn)到另一新培養(yǎng)基中，反復5～6次。

3.2 培養(yǎng)瓶內(nèi)壁凝結(jié)水珠

培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)瓶時熱蒸汽會凝結(jié)在瓶壁，如果過早使用，果蠅會溺死。因此，在分裝后要自然冷卻一段時間，待瓶壁的水珠蒸發(fā)后使用。如若放置在冰箱內(nèi)保存，使用前若發(fā)現(xiàn)瓶壁沾有水珠，則需用滅過菌的濾紙條吸干后使用。

3.3 培養(yǎng)基干結(jié)成塊

一般配制的培養(yǎng)基放置時間過久或培養(yǎng)溫度較高時，培養(yǎng)基因為失水而與瓶壁分離，干結(jié)成塊，此種情況下果蠅無法正常生存，更無法產(chǎn)卵。因此，要及時更換培養(yǎng)基。

3.4 培養(yǎng)基過濕

果蠅代謝過程中會產(chǎn)生一定的廢物，時間長了容易使培養(yǎng)基變成稀糊狀，果蠅容易粘附在培養(yǎng)基表面，由于無法飛行和覓食而死亡。因此，要及時根據(jù)培養(yǎng)基的情況轉(zhuǎn)接果蠅。

3.5 果蠅生活力降低

由于果蠅長期在偏低的溫度下保種，低溫使其生活力下降，許多性狀出現(xiàn)退化，甚至變異，影響實驗結(jié)果。因此，每隔一定時期必須進行復壯。復壯方法為用乙醚把果蠅麻昏，選擇個體較大的、性狀具有本品種特點的雌雄果蠅進行混合培養(yǎng)。再在產(chǎn)出的一代中又選擇個體較大的、性狀具有本品種特點的雌雄果蠅進行混合培養(yǎng)。如此進行一次，后代就能保持個體較大，又遺傳了本品系性狀的原種[5]。

[1]劉祖洞，江紹慧.遺傳學實驗[M].北京：高等教育出版社，1987：63.

[2]陳曉蕓.果蠅的飼養(yǎng)[J].生物學通報，2006（2）：51.

[3]王轉(zhuǎn)斌.果蠅的保種技巧及唾液腺染色體的制備[J].實驗技術(shù)與管理，2002（3）：38.

[4]龔慧明.果蠅培養(yǎng)基長霉的處理措施[J].生物學教學，2007（4）：52.

[5]龔慧明.果蠅飼養(yǎng)管理的幾個問題[J].生物學通報，2005（4）：5.