球孢白僵菌菌株對平菇厲眼蕈蚊的室內毒力*

張宏瑞，沈登榮，袁盛勇，張雪梅，張 陶，李正躍**

（1.云南農業大學植物保護學院，云南 昆明 650201;2.紅河學院，云南 蒙自 661100；3.昆明食用菌研究所，云南 昆明 650223）

食用菌是一種可食用的高等真菌，在人們日常生活和經濟中占有重要地位。但隨著我國食用菌產業的不斷發展，食用菌害蟲也越來越猖獗，并成為了制約食用菌發展的重要因素之一。其中，雙翅目 （Diptera）、眼蕈蚊科（Sciaridae）害蟲是我國食用菌上重要的害蟲類群[1－5]。目前已報道為害食用菌的眼蕈蚊有5屬20余種[6]，而平菇厲眼蕈蚊 （Lycoriella pleuroti）1987年由楊集昆等首次記述[7]，是國內食用菌的優勢危害種。該蟲在我國的北京、上海、山東、遼寧、河北、河南、陜西、新疆、內蒙古、云南、貴州、四川等省區均有報道[8,9]。

平菇厲眼蕈蚊 （L.pleuroti）主要是以幼蟲潛入培養料及子實體中，直接取食食用菌的菌絲體和培養料，從而造成蕾萎縮死亡、菌柄折斷，對食用菌生產造成嚴重的經濟損失。成蟲常在培養料和出菇期的菌袋口端及子實體上爬行、交尾、產卵，成為菇類許多病害、線蟲、螨類的傳播者。由于食用菌栽培周期短，過多的使用化學藥劑會造成農藥殘留。因此，對食用菌上的害蟲一般采取生物防治為主，其它防治為輔的防治措施。目前，國內針對平菇厲眼蕈蚊生物防治方面的研究尚未見報道。

球孢白僵菌 （Beauveria bassiana）是一種寄生昆蟲的真菌，隸屬于半知菌綱、鏈孢霉目、鏈孢霉科、白僵菌屬，是目前研究和應用最多的一種重要昆蟲病原真菌，寄主范圍廣，可侵染15個目、149個科的700余種昆蟲和螨類，致病性強，適應性強[10，11]。近年來利用白僵菌防治林木害蟲是發展較快的一個領域，并顯示出了較好的發展前景。白僵菌對桑天牛、松褐天牛、松毛蟲、木蠹蛾等防治及致病力研究已有報道[12－17]。球孢白僵菌MZ041016菌株和蠟蚧輪枝菌 （Verticillium lecanii）MZ041024對平菇厲眼蕈蚊幼蟲、成蟲的毒力測定結果也有報道[17，18]，本研究主要報道了球孢白僵菌MZ050724菌株不同濃度分生孢子液對平菇厲眼蕈蚊幼蟲、成蟲的毒力測定結果，為利用生防菌防治食用菌雙翅目類害蟲提供理論指導。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌種

球孢白僵菌MZ050724菌株采自蒙自，經分離復壯和擴繁之后供試驗用。

1.1.2 供試昆蟲

從平菇栽培基地采集成蟲，帶回實驗室平菇菌袋上飼養，得到各供試蟲態。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌種的擴繁

采用馬鈴薯瓊脂培養基 （PDA），在溫度為25℃下進行培養。該溫度下白僵菌菌絲生長良好，培養10 d收集分生孢子。

1.2.2 球孢白僵菌MZ050724菌株對平菇厲眼蕈蚊成蟲的毒力測定

球孢白僵菌 MZ050724 菌株稀釋為 3.6×104個·mL－1～3.6×108個·mL－1五個濃度梯度。每個濃度設3個重復，每個重復30頭蟲，用0.05%吐溫20+無菌水作對照，采用噴霧法接種。在每個容量為300 mL瓶壁有孔的礦泉水瓶內放入30頭成蟲。接種時先將成蟲置于瓶內，噴施4 mL孢子液，用紗布封口，置于25℃、RH為 （80±5）%的人工氣候培養箱中。每天觀察、記錄其死亡蟲數，并將其取出。

1.2.3 球孢白僵菌MZ050724菌株菌株對平菇厲眼蕈蚊幼蟲和蛹的毒力測定

球孢白僵菌 MZ050724 菌株稀釋為 3.0×104個·mL－1～3.0×108個·mL－1五個處理濃度梯度，每個處理設3個重復，用0.05%吐溫20+無菌水對作對照，每個重復30頭幼蟲和蛹，浸入盛有30mL孢子懸液燒杯中30 s后，迅速取出，用干濾紙吸去留在蟲體上的懸浮液，置于盛有黃豆粉和沙的培養皿中，用紗布封口，置于25℃，RH為 （80±5）%的人工氣候培養箱中，每天觀察記錄幼蟲和蛹的死亡數，并將死蟲取出，連續觀察7 d。

1.3 數據分析方法

分生孢子液濃度的檢測：顯微鏡直接計數法 （血球計數法）。采用機率值分析方法，運用統計軟件SPSS，將蟲體死亡率進行機率值轉換后，分別對劑量和時間作線性回歸分析，建立直線回歸模型，從而分別估計劑量效應LC50和時間效應LT50。

2 結果與分析

2.1 球孢白僵菌MZ050724分生孢子液對平菇厲眼蕈蚊成蟲的毒力測定

球孢白僵菌MZ050724分生孢子液對平菇厲眼蕈蚊成蟲的毒力測定見表1～表3。

從表1～表3統計結果表明，供試菌株MZ050724孢子濃度在 3.6×104個·mL－1～3.6×108個·mL－1時， 對平菇厲眼蕈蚊成蟲均具有一定的毒力，濃度為3.6×108個·mL－1時，第7天累計教正死亡率達87.31%，孢子濃度為3.6×105個·mL－1～3.6×108個·mL－1的第 4 天～第 7 天， LC50值呈下降趨勢， 由 4.097×108個·mL－1降低到 2.865×105個·mL－1； 在3.6×105個·mL－1～3.6×108個·mL－1濃度下的 LT50值， 隨濃度增加而逐漸縮短，即由7.96 d縮短到4.36 d。

表1 球孢白僵菌MZ050724菌株分生孢子不同濃度對平菇厲眼蕈蚊成蟲的毒力

表2 球孢白僵菌MZ050724菌株分生孢子對平菇厲眼蕈蚊成蟲的致死中濃度

表3 球孢白僵菌MZ050724菌株分生孢子對平菇厲眼蕈蚊成蟲的致死中時間

2.2 球孢白僵菌MZ050724分生孢子液對平菇厲眼蕈蚊幼蟲的毒力測定

球孢白僵菌MZ050724分生孢子液對平菇厲眼蕈蚊幼蟲的毒力測定結果見表4～表6。

表4 球孢白僵菌MZ050724菌株分生孢子不同濃度對平菇厲眼蕈蚊幼蟲的毒力測定

表5 球孢白僵菌MZ050724菌株分生孢子對平菇厲眼蕈蚊幼蟲的致死中濃度

從表4～表6看出，接種第2天幼蟲開始出現死亡，濃度為 3.6×104個·mL－1時， 7 d累計校正死亡率 達31.11%， 濃度為3.6×108個·mL－1時， 第 7天死亡率達到92.93%，LC50值隨著孢子液濃度增高而減小，孢子濃度3.6×105個·mL－1～3.6×108個·mL－1第 4 天～第 7 天， LC50值從 1.014×108個·mL－1下降到 2.685×105個·mL－1。 LT50值由7.36 d縮短到4.06 d。

2.3 球孢白僵菌MZ050724對平菇厲眼蕈蚊蛹的毒力測定

球孢白僵菌MZ050724對平菇厲眼蕈蚊蛹的毒力測定結果見表7～表9。

表7 球孢白僵菌MZ050724菌株分生孢子不同濃度對平菇厲眼蕈蚊蛹的毒力測定

表8 球孢白僵菌MZ050724菌株分生孢子對平菇厲眼蕈蚊蛹的致死中濃度

表9 球孢白僵菌MZ050724菌株分生孢子對平菇厲眼蕈蚊蛹的致死中時間

表 7～表 9結果表明接種 2 d后， 在 3.6×107個·mL－1和3.6×108個·mL－1的2個濃度下平菇厲眼蕈蚊蛹出現死亡，濃度為 3.6×108個·mL－1時， 第 7天死亡率達到 70.12%，孢子濃度 3.6×105個·mL－1～3.6×108個·mL－1的第 4 天～第 7天， LC50值呈下降趨勢， 當由 2.801×108個·mL－1降低到9.063×105個·mL－1； 在 3.6×105個·mL－1～3.6×108個·mL－1濃度，LT50值隨濃度增加而逐漸縮短，即由9.95 d縮短到5.10 d。

3 討論

球孢白僵菌MZ050724菌株分生孢子，對平菇厲眼蕈蚊的幼蟲防治效果最好，其次是對成蟲的防治效果，3個蟲態中對蛹的防治效果相對差些，這與平菇厲眼蕈蚊各蟲態對球孢白僵菌MZ050724菌株侵染所產生的抵抗力不同有關。利用球孢白僵菌對平菇厲眼蕈蚊各蟲態進行致病力研究的相關文獻在國內還未見報道，本試驗研究結果可為平菇厲眼蕈蚊各蟲態利用昆蟲病原真菌進行生物防治提供理論依據。盡管室內對球孢白僵菌平菇厲眼蕈蚊幼蟲、成蟲和蛹有較強的致病力，但菇房的環境條件比室內環境復雜得多，因此利用球孢白僵菌防治平菇厲眼蕈蚊的菇房應用還有待進一步深入研究。

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