辣椒疫霉菌生長(zhǎng)和產(chǎn)孢條件的研究

李立鳳，李小梅，張景濤*

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，哈爾濱 150030；2.哈爾濱市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，哈爾濱 150070）

辣椒疫病（Phytophthora capsici Leonian）是辣椒生產(chǎn)上的一種毀滅性土傳病害。在條件適宜的情況下，辣椒疫霉菌多以游動(dòng)孢子的方式從寄主植物的根部或莖基部侵入，引起辣椒疫病，可短期內(nèi)暴發(fā)成災(zāi)[1]，選育抗病品種是控制該病的重要方法[2]。在辣椒品種抗病性鑒定研究中，需要預(yù)先誘發(fā)出大量游動(dòng)孢子作為接種菌源。

為此，本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)辣椒疫霉菌菌絲生長(zhǎng)條件和產(chǎn)孢條件的研究，確定疫霉菌快速生長(zhǎng)和產(chǎn)生大量游動(dòng)孢子的更好方法，為選育辣椒抗病品種提供適宜的菌種，從而為選育出優(yōu)良的抗病品種提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌種

試驗(yàn)選用的辣椒疫霉菌菌種采自佳木斯松江鄉(xiāng)紅利村，分離自大棚辣椒。

1.1.2 培養(yǎng)基

馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基（Potato sugar medium,PSA），胡蘿卜培養(yǎng)基（Carrot medium,CA），大豆培養(yǎng)基（Soybean medium,BA），燕麥培養(yǎng)基（Oat medium,OMA），玉米粉培養(yǎng)基（Corn medium,CMA）。

1.2 方法

1.2.1 不同培養(yǎng)基、不同溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

培養(yǎng)基種類：同1.1.2。

設(shè)置 22、24、26、28、30、32℃共 6個(gè)溫度。

每個(gè)處理3次重復(fù)。4 d后測(cè)量菌落直徑，求出生長(zhǎng)速率。

菌絲生長(zhǎng)速率（mm·d-1）＝（菌落直徑－4）/（2×4）。

1.2.2 不同培養(yǎng)基對(duì)菌種保存時(shí)間的影響

將菌種分別接種于5種培養(yǎng)基上，于接種后第5天、第8天、第11天、第14天、第17天、第20天觀察記錄菌絲生長(zhǎng)狀況。

1.2.3 不同光照處理對(duì)產(chǎn)孢量的影響

設(shè)置3個(gè)光照時(shí)間：0光照，半光照（12 h），全光照（24 h）。溫度設(shè)置為26℃，7 d后在10×4倍視野下觀察，選擇6個(gè)視野，記錄孢子囊量，并計(jì)算平均值。

1.2.4 不同光照天數(shù)對(duì)游動(dòng)孢子量的影響

取長(zhǎng)滿菌絲的培養(yǎng)皿6個(gè)，每皿加30 mL滅菌水后置入光照培養(yǎng)箱進(jìn)行全光照處理，溫度為26℃，并于第2天、第4天、第6天、第8天、第10天和第12天取出，鏡檢，記錄游動(dòng)孢子量，并計(jì)算平均值。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對(duì)菌落形態(tài)的影響

圖1表明，不同培養(yǎng)基上疫霉菌菌落形態(tài)、菌落厚度和菌絲稀密存在一定的差異，在五種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌絲均為白色。在CA和PSA培養(yǎng)基上菌絲層最厚、最密集，特別是靠中心接菌點(diǎn)周?chē)木鷮用黠@增厚，白色菌絲向上生長(zhǎng)茂盛，呈絨毛狀。CMA和BA培養(yǎng)基上的菌落較厚，僅次于前兩種培養(yǎng)基，菌絲呈放射狀。在OMA培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)最快，但菌絲層最薄。

圖1 不同培養(yǎng)基菌落形態(tài)比較Fig.1 Comparison of colony type on different culture media

2.2 不同培養(yǎng)基、不同溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

辣椒疫霉菌在不同培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速率差異較大（見(jiàn)圖2），其中在燕麥培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速率最高，極顯著高于其他4種培養(yǎng)基，其次是生長(zhǎng)速率較高的玉米粉和胡蘿卜培養(yǎng)基，馬鈴薯培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速率中等，在大豆培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速率最慢，極顯著低于其他培養(yǎng)基。不同溫度處理表明，辣椒疫霉菌在28℃生長(zhǎng)最快，說(shuō)明此溫度是辣椒疫霉菌生長(zhǎng)的最適溫度，30℃以上菌絲生長(zhǎng)速度逐漸下降。

2.3 不同培養(yǎng)基對(duì)菌種保存時(shí)間的影響

不同培養(yǎng)基對(duì)菌種保存時(shí)間長(zhǎng)短的影響見(jiàn)表1。

表1 不同培養(yǎng)基菌絲生長(zhǎng)狀況Table 1 Hypha growth state of Phytophthora capsici on different culture media

由表1可知，辣椒疫霉菌在馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基上保存時(shí)間最長(zhǎng)，說(shuō)明其營(yíng)養(yǎng)成分非常充足，能長(zhǎng)時(shí)間維持營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)，可減少轉(zhuǎn)接次數(shù)；其次是胡蘿卜培養(yǎng)基，其營(yíng)養(yǎng)成分也較適合菌種的保存；大豆培養(yǎng)基僅次于前兩者，但就菌絲生長(zhǎng)情況來(lái)看其營(yíng)養(yǎng)成分不均勻；玉米培養(yǎng)基保存時(shí)間在1周左右；燕麥培養(yǎng)基保存菌種時(shí)間最短，菌種較早出現(xiàn)萎蔫狀態(tài)，說(shuō)明營(yíng)養(yǎng)成分含量較少，不適合菌種的保存。

2.4 不同光照處理對(duì)產(chǎn)孢量的影響

不同光照處理后，辣椒疫霉菌產(chǎn)孢量存在極顯著差異（見(jiàn)圖3）。全光照時(shí)產(chǎn)孢量極顯著高于其他光照處理，而0光照時(shí)卻不產(chǎn)生孢子，表明辣椒疫霉菌在長(zhǎng)日照條件下有利于繁殖，加重病害的傳播，相反地，短日照條件下不利病害傳播。

2.5 不同光照天數(shù)對(duì)游動(dòng)孢子量的影響

不同光照天數(shù)處理的辣椒疫霉菌游動(dòng)孢子量存在差異（見(jiàn)圖4）。光照6 d處理的游動(dòng)孢子量顯著高于其他處理；低于6 d光照時(shí)，游動(dòng)孢子量很少；光照8 d后游動(dòng)孢子量不但無(wú)明顯增加，反而稍有減少，這可能是由于游動(dòng)孢子在沒(méi)有寄主存在的情況下，即使是溫度、濕度和光照條件都滿足的情況下，存活的時(shí)間也會(huì)很短，有待于進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

3 討論與結(jié)論

本研究對(duì)辣椒疫霉菌生長(zhǎng)條件和產(chǎn)孢條件進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，辣椒疫霉菌在燕麥培養(yǎng)基和玉米粉培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度最快，但菌絲較稀疏，在馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基和胡蘿卜培養(yǎng)基，雖然生長(zhǎng)速度中等，但是菌絲生長(zhǎng)旺盛；溫度也是影響菌絲生長(zhǎng)的重要條件。結(jié)果表明，菌絲生長(zhǎng)的最佳溫度范圍是26～28℃，28℃以上菌絲生長(zhǎng)明顯減慢。保存菌種時(shí)間最長(zhǎng)的培養(yǎng)基是馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基，其營(yíng)養(yǎng)充足能較長(zhǎng)時(shí)間維持菌絲的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)，因此減少了轉(zhuǎn)接的次數(shù)，省時(shí)省力。誘導(dǎo)產(chǎn)孢的試驗(yàn)表明，光照是孢子囊產(chǎn)生的必要條件，全光照時(shí)產(chǎn)孢的量最高，6 d為最佳天數(shù)，半光照次之，零光照則很難產(chǎn)生孢子囊，即使產(chǎn)生孢子囊，其量也很少，是否光照強(qiáng)度越高則越有利于辣椒疫霉產(chǎn)生孢子囊還需要進(jìn)一步研究。另外，本研究認(rèn)為水對(duì)游動(dòng)孢子量增加同樣有著不可替代的作用，因此本試驗(yàn)在前人工作的基礎(chǔ)上對(duì)產(chǎn)孢條件進(jìn)行了改進(jìn)和補(bǔ)充，即在長(zhǎng)滿菌絲的培養(yǎng)皿中加水后進(jìn)行全光照，此方法大大增加了游動(dòng)孢子量，替代了誘孢培養(yǎng)液的制備，簡(jiǎn)化了操作程序，為抗源篩選提供大量菌源。

辣椒疫霉菌菌絲生長(zhǎng)需要較高的溫度，孢子囊產(chǎn)生需要水和光照，表明病原菌的入侵與溫濕度密切相關(guān)，田間夏季灌水后疫病迅速蔓延可能與這種特性有關(guān)。因此，建議夏季盡量避免高溫時(shí)大水漫灌，或大雨過(guò)后及時(shí)排除田間積水，可有效控制辣椒疫病。同時(shí)本部分結(jié)果也豐富了通過(guò)病原形態(tài)學(xué)對(duì)辣椒疫霉菌進(jìn)行快速鑒定方面的內(nèi)容，有利于對(duì)辣椒疫病的準(zhǔn)確預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)，一旦田間發(fā)現(xiàn)此類病癥，應(yīng)及早拔除病株，盡早采取防治措施，避免病害傳播致使大面積發(fā)生。

[1] 陸家.植物病害診斷[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,1997:19.

[2] 易圖永,謝丙炎,張寶璽,等.辣椒疫病防治研究進(jìn)展[J].中國(guó)蔬菜,2002(5):52-55.

[3] 戚仁德,丁建成,顧江濤,等.不同培養(yǎng)基對(duì)辣椒疫霉致病力的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2001,29(1):96-97,105.

[4] 康立功,許向陽(yáng),姜景彬,等.番茄晚疫病病原菌生物學(xué)特性研究(Ⅱ)[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2008,39(2):168-170.

[5] 彭化賢,劉波微,李薇.四川辣椒疫霉菌生物學(xué)特性和辣椒抗霉疫病性鑒定方法初探[J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2005,20(1):140-144.

[6] 張榮,辛光云,劉愛(ài)媛.辣椒疫霉菌保存及游動(dòng)孢子誘導(dǎo)技術(shù)研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,36(20):8678-8680.

[7] 王彥杰.番茄早疫病病源菌的鑒定及抗病種質(zhì)資源篩選[D].哈爾濱:東北農(nóng)業(yè)大學(xué),2004.