8種發(fā)酵床常用菌種的藥敏試驗(yàn)

袁廳 華利忠 宦海琳 顧洪如 吳敘蘇 邵國(guó)青

摘要：為了解各種抗生素對(duì)發(fā)酵床益生菌的影響，本研究采用紙片擴(kuò)散法研究8種發(fā)酵床常用的益生菌單獨(dú)培養(yǎng)及混合培養(yǎng)對(duì)50種常用抗生素對(duì)的敏感性。結(jié)果：?jiǎn)为?dú)培養(yǎng)的多數(shù)益生菌對(duì)氯霉素類、氨基糖苷類、喹諾酮類、四環(huán)素類及大環(huán)內(nèi)酯類高度及中度敏感，但對(duì)青霉素類、頭孢類以及林可霉素低敏感性或不敏感。混合培養(yǎng)菌對(duì)氯霉素類、氨基糖苷類、喹諾酮類、強(qiáng)力霉素、克林霉素高敏感；對(duì)四環(huán)素、美滿霉素、林可霉素、阿莫西林、頭孢曲松、頭孢噻肟等中度敏感；對(duì)氨芐西林和頭孢唑肟低敏感；對(duì)復(fù)方新諾明、多粘霉素B、青霉素、頭孢克肟、頭孢吡肟、頭孢噻吩不敏感。

關(guān)鍵詞：發(fā)酵床；抗生素；藥敏試驗(yàn)：敏感性

發(fā)酵床養(yǎng)豬是利用發(fā)酵床專用菌種，按一定比例混合鋸末、稻殼等農(nóng)林生產(chǎn)下腳料，通過(guò)發(fā)酵床的分解發(fā)酵，使豬糞、尿中的有機(jī)物質(zhì)得到充分的分解和轉(zhuǎn)化，從而將豬舍墊料發(fā)酵床演變成微生態(tài)飼料加丁廠，創(chuàng)造一種零排放、兀污染的生態(tài)養(yǎng)豬模式。因此發(fā)酵床養(yǎng)殖最重要的是其中的活性微生物，即益生菌。所以人們普遍認(rèn)為，發(fā)酵床養(yǎng)豬法豬舍內(nèi)不能使用化學(xué)消毒藥品和抗生素類藥物，否則將殺滅和抑制益生菌，或抑制其繁殖，使得微生物的活性降低。如楊景輝等在富源縣應(yīng)用發(fā)酵床養(yǎng)豬過(guò)程中，開展了飼喂含抗生素和不含抗生素飼料、抗生素治療病豬、發(fā)酵床表面消毒、豬群疫苗接種等對(duì)發(fā)酵床豬舍溫度影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)含抗生素飼料以及用抗生素治療發(fā)病豬會(huì)對(duì)發(fā)酵床床體產(chǎn)生影響，但疫苗免疫對(duì)其沒(méi)有影響。敖梅英等也認(rèn)為某些抗生素對(duì)對(duì)墊料中主要益生微生物生長(zhǎng)均有不同程度的影響，應(yīng)減少甚至停止使用抗生素作為飼料的添加劑。然而自20世紀(jì)50年代以來(lái)，抗生素作為疾病治療劑和動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑，發(fā)揮了重大作用。雖然發(fā)酵床養(yǎng)豬可以減少疾病的發(fā)生，卻也不能保證絕不發(fā)病，如不使用抗生素及時(shí)治療，也會(huì)產(chǎn)生一定的損失。為了解各種抗生素對(duì)發(fā)酵床益生菌的影響，本研究采用紙片擴(kuò)散法研究8種發(fā)酵床常用的益生菌對(duì)50種常用抗生素對(duì)的敏感性，為發(fā)酵床養(yǎng)豬的臨床用藥提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種所用8種菌株（納豆芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、凝結(jié)芽胞桿菌、假卑孢菌桿菌、蠟樣芽胞桿菌、地衣芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌）由江蘇省農(nóng)科院畜牧所提供。

1.1.2 主要藥敏片所用藥敏試紙片購(gòu)自杭州微生物試劑有限公司，規(guī)格：直徑6mm，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：WS/T125-1999。

1.1.3 主要試劑及儀器LB液體培養(yǎng)基及LB固體培養(yǎng)基由實(shí)驗(yàn)室自配。超凈工作臺(tái)，恒溫培養(yǎng)箱。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌培養(yǎng)江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧所提供上述8益生菌，LB培養(yǎng)基復(fù)蘇后，每種菌株挑取若干克隆配成0.5麥?zhǔn)蠁挝粷舛鹊膽覞嵋海?00μL/塊平板（直徑90mm）的量均勻涂布LB瓊脂平板。同時(shí)，取上述8種0.5麥?zhǔn)蠁挝粷舛鹊木焊?mL，混合均勻成一個(gè)混合菌，再按500μL/塊平板涂布LB瓊脂平板作為混合菌樣本。

1.2.2 藥敏試驗(yàn)采用紙片擴(kuò)散法，細(xì)菌涂布好后，立即將紙片置于單獨(dú)接種上述8種芽孢桿菌以及接種混合菌的LB瓊脂平板上，每個(gè)培養(yǎng)皿中放五個(gè)藥敏片，置于37℃溫箱中培養(yǎng)。24h后，分度值為1mm的刻度尺量取抑菌圈的直徑，根據(jù)藥敏試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)書，確定該菌對(duì)不同藥物的敏感程度。如有些抑菌圈過(guò)大，無(wú)法量取抑菌圈大小，則重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)，但將培養(yǎng)皿中的藥敏片降為1個(gè)。

2 結(jié)果

2.1 8 種益生菌及其混合菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果

采用50種抗生素對(duì)8種益生菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，測(cè)量抑菌圈直徑，計(jì)算平均值。結(jié)果表明見表1。由表1可知，多數(shù)益生菌對(duì)多數(shù)抗生素（氯霉素類、氨基糖苷類、喹諾酮類、四環(huán)素類及大環(huán)內(nèi)酯類）高度及中度敏感，但對(duì)青霉素類，頭孢類以及林可霉素低敏感性或不敏感。

2.2 抗生素對(duì)8種益生菌敏感數(shù)統(tǒng)計(jì)

按敏感性統(tǒng)計(jì)各抗生素，發(fā)現(xiàn)混合培養(yǎng)菌對(duì)氯霉素類、氨基糖苷類、喹諾酮類、強(qiáng)力霉素，克林霉素高敏感；對(duì)四環(huán)素、美滿霉素、林可霉素、阿莫西林、頭孢曲松、頭孢噻肟等中度敏感；對(duì)氨芐西林和頭孢唑肟低敏感；對(duì)復(fù)方新諾明、多黏霉素B、青霉素、頭孢克肟、頭孢吡肟、頭孢噻吩不敏感（表2）。

3 討論

據(jù)發(fā)酵床的微生物作用原理，有益微生物及其產(chǎn)生的有益因子，在豬拱掘采食后，改善豬腸道菌群，大大降低腸道疾病的發(fā)病率。且由于發(fā)酵床養(yǎng)殖豬舍由于發(fā)酵床體中有益菌群發(fā)酵糞便，抑制了腐敗菌等有害微生物的繁殖和有害氣體的產(chǎn)生，從而減少空氣中氣載微生物的含量，對(duì)豬舍內(nèi)空氣環(huán)境的改善有一定積極的影響，但是仍然有潛在的危險(xiǎn)，仍需要加強(qiáng)對(duì)某些細(xì)菌、病毒以及寄生蟲的防控。所以抗生素的使用成為發(fā)酵床養(yǎng)豬法的爭(zhēng)論的主要焦點(diǎn)之一。何鑫等利用益生菌高敏感的泰樂(lè)菌素和氟苯尼考，進(jìn)行抗生素預(yù)防和治療用量對(duì)發(fā)酵床床體的影響，發(fā)現(xiàn)在發(fā)酵床養(yǎng)殖過(guò)程中不是絕對(duì)不能使用抗生素類藥物，而是要看其使用量是否合適。適當(dāng)?shù)乃幬锸褂檬强尚械模绻i群本身健康狀況較差，則不一定適合在發(fā)酵床上進(jìn)行長(zhǎng)期用藥治療。說(shuō)明發(fā)酵床益生菌敏感抗生素的使用需要把握藥量，但該研究中的藥物種類較少，也沒(méi)有篩選出益生菌不敏感或低敏感的藥物。本研究通過(guò)紙片擴(kuò)散法研究8種發(fā)酵床中常用的益生菌對(duì)50種常用抗生素的敏感性，發(fā)現(xiàn)這些益生菌對(duì)青霉素類、頭孢菌素類、林可霉素及多黏霉素B的敏感性較低，甚至不敏感，適合于發(fā)酵床應(yīng)用，在用藥方案制定中可不考慮對(duì)床體益生菌的影響，但其余敏感藥物并不是一定不能用于發(fā)酵床，而是要注意用藥方案的把握，尤其是用藥量及用藥過(guò)程的控制，避免藥物影響益生菌的生長(zhǎng)繁殖。此外曾艷等發(fā)現(xiàn)一些中藥如蒲公英、茵陳、魚腥草等對(duì)枯草芽孢桿菌、高溫放線菌及產(chǎn)朊假絲酵母均無(wú)抑制作用，可選擇這些中草藥防治大腸桿菌及金黃色葡萄球菌。

由于疫苗免疫對(duì)發(fā)酵床床體沒(méi)有影響，所以疫苗免疫是發(fā)酵床養(yǎng)豬模式下疫病防控的關(guān)鍵。華利忠等通過(guò)連續(xù)2年的流行病學(xué)調(diào)查對(duì)比了阜寧縣發(fā)酵床和水沖圈模式下豬瘟，豬藍(lán)耳病及豬口蹄疫血清抗體的差異，發(fā)現(xiàn)發(fā)酵床模式下豬藍(lán)耳抗體陽(yáng)性率比傳統(tǒng)水沖圈高，這可能與發(fā)酵床能提高豬的免疫力有關(guān)。所以要根據(jù)本場(chǎng)或本地區(qū)疫病流行情況，制訂合理的免疫程序，選擇質(zhì)量合格的疫苗，并且嚴(yán)格按照疫苗接種的使用說(shuō)明、操作步驟，科學(xué)地接種疫苗。