高效液相色譜法測定螺內酯的含量

顏 雨，張 勉，李 超

（1.重慶市婦幼保健院藥劑科，重慶 400013； 2.重慶市藥品檢驗所，重慶 401121）

螺內酯是醛固酮的競爭性抑制劑，可治療水腫性疾病、高血壓等，2005年版《中國藥典（二部）》采用紫外分光光度法測定其含量[1]。根據國家藥典委員會國藥典化發[2008]25號“《中國藥典》2010年版（二部）化學藥品科研項目會議紀要”的要求，重慶市藥品檢驗所承擔了螺內酯質量標準的起草工作。由于影響紫外分光光度法檢測結果的因素較多，特采用高效液相色譜法測定螺內酯的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀（配有紫外檢測器及二極管陣列檢測器）；HP-8453E型分光光度計。螺內酯對照品（浙江新華制藥有限公司提供的螺內酯原料，批號為071007，含量為99.42%，作為工作對照品）；螺內酯樣品（原料藥，天津津津制藥有限公司，批號為S1067，S1072，S1073）；乙腈為色譜純；水為二次蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Agilent C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：乙腈 -水（50 ∶50）；測定波長：238 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；進樣量：20μL。在此條件下，色譜圖見圖1。理論板數按螺內酯計算應不低于3000，分離度應符合要求。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取螺內酯工作對照品適量，加流動相制成質量濃度為25μg/mL的螺內酯對照品溶液。取樣品適量（約相當于螺內酯12.5 mg），置100 mL量瓶中，加流動相適量，振搖，使螺內酯溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察：稱取螺內酯工作對照品約0.2 g，精密稱定，置200 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照品貯備液。分別量取對照品貯備液 1，2，3，5，7，10，15 mL，置 200 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，照2.1項下色譜條件分別進樣，記錄色譜圖，以對照品溶液質量濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y=54008 X+4.7815，r=1.000（n=6）。結果表明，螺內酯進樣質量濃度在5.0231～75.3471μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

回收率試驗：稱取相當于處方量80%，100%，120%的螺內酯工作對照品（含量為99.42%），加流動相溶解并稀釋至刻度，精密量取5 mL，置25 mL量瓶中，照2.1項下色譜條件進樣測定，計算回收率。結果見表1。

表1 回收率試驗結果（n=6）

精密度試驗：精密量取對照品溶液，按2.1項下色譜條件重復進樣6次，記錄色譜圖。結果峰面積的 RSD=0.19%（n=6）。

重復性試驗：取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液并測定含量。結果的 RSD=0.18%（n=6），表明方法重復性好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于放置 0，1，2，4，8，12，24 h時進樣測定。結果的 RSD=0.37%（n=7），表明供試品溶液在24 h內穩定。

檢測限及定量限：取線性關系考察項下最低質量濃度的對照品溶液（5.0231μg/mL），按2.1項下色譜條件進樣，以 S/N為3計算，螺內酯的檢測限為0.1677μg/mL；以 S/N為10計算，螺內酯的定量限為0.5581μg/mL。

2.4 樣品含量測定

吸取供試品溶液與對照品溶液，按2.1項下色譜條件進樣，按外標法以峰面積計算。結果批號為S1067，S1072，S1073的3批樣品中，螺內酯含量分別為標示量的100.04%，99.97%，100.24%。

3 討論

文中所建立的方法參考美國藥典（USP 31）擬訂。曾以0.02 mol/L磷酸氫二銨 - 乙腈（45 ∶55）[2]、磷酸鹽緩沖液（0.025 mol/L，pH=6.5）- 甲醇（40 ∶60）[3]、甲醇 - 水（70 ∶30）[4]為流動相進行試驗，最終選擇乙腈-水（50∶50）作為流動相及溶劑，既減少了系統干擾，又降低了對色譜柱的損害。經紫外掃描，發現螺內酯在238 nm波長處有最大吸收，且通過二極管陣列檢測器檢測，峰純度為999.407，符合檢測要求，故將238 nm定為檢測波長。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：化學工業出版社，2005：886-887.

[2]孔愛英，鐘 瓊.高效液相色譜法測定螺內酯片的含量[J].解放軍藥學學報，2003，19（4）：272-273.

[3]曾明輝，陳秋虹，吳正中，等.復方螺內酯霜的HPLC測定[J].中國醫藥工業雜志，2000，31（10）：461-463.

[4]王菊榮，王月軍，葉 勇，等.HPLC法測定復方藥物微乳膏中螺內酯的含量[J]. 藥物分析雜志，2006，26（12）：1883-1884.